139 статья тк: последние изменения и поправки, судебная практика

Статья 139 ТК РФ 2016-2019. Исчисление средней заработной платы. ЮрИнспекция

Ежегодные отпуска предоставляются всем сотрудникам, которые работают в организации по трудовому договору, в том числе: – совместителям (ч. 2 ст. 287 ТК РФ) ; – сезонным работникам (ст. 295 ТК РФ) ; – сотрудникам, с которыми заключен срочный трудовой договор на срок до двух месяцев (ст. 291 ТК РФ) ; – надомникам (ч. 4 ст. 310 ТК РФ) . Чтобы рассчитать сумму отпускных, нужно определить: – продолжительность расчетного периода; – заработок сотрудника за расчетный период; – средний дневной заработок; – итоговую сумму отпускных. Длительность расчетного периода зависит от того, сколько времени сотрудник работает в организации (учреждении) . Если сотрудник был принят на работу больше года назад, расчетный период – 12 календарных месяцев, предшествующих месяцу, в котором сотрудник ушел в отпуск. Календарным месяцем считается месяц с 1-го по 30-е (31-е) число соответствующего месяца включительно (в феврале 28-е (29-е) число включительно) . Если сотрудник отработал меньше года, расчетный период – все время, в течение которого он числится в организации (учреждении) . При этом в расчет включается время с первого дня работы до последнего числа месяца, предшествующего месяцу, в котором сотрудник ушел в отпуск. Эти правила следуют из части 3 статьи 139 Трудового кодекса РФ. При определении заработка сотрудника за расчетный период не учитываются суммы, начисленные за период, когда: – за сотрудником сохранялся средний заработок в соответствии с законодательством (например, во время командировки (ст. 167 ТК РФ) или оплачиваемого отпуска (ст. 114 ТК РФ)) . Исключение из этого правила составляют суммы, начисленные за время перерывов для кормления ребенка (ст. 258 ТК РФ) , – такие выплаты учитываются при расчете среднего заработка; – сотрудник получал больничное пособие или пособие по беременности и родам; сотрудник был в отпуске без сохранения зарплаты; – сотруднику предоставлялись дополнительные оплачиваемые выходные дни для ухода за детьми-инвалидами и инвалидами с детства; – сотрудник не работал в связи с простоем по вине организации или по причинам, не зависящим от организации и сотрудника (например, из-за отключения электричества) ; – сотрудник не участвовал в забастовке, но в связи с ней не мог выполнять работу; – сотрудник не работал в других случаях, предусмотренных законодательством. Такое правило установлено пунктом 5 Положения, утвержденного постановлением Правительства РФ от 24 декабря 2007 г. № 922. При расчете отпускных не учитываются выплаты социального характера и иные выплаты, не относящиеся к оплате труда (материальная помощь, оплата стоимости питания, проезда, обучения, коммунальных услуг, отдыха и т. д.) . Об этом сказано в пункте 3 Положения, утвержденного постановлением Правительства РФ от 24 декабря 2007 г. № 922. Порядок определения среднего дневного заработка зависит от того: – отработал ли сотрудник расчетный период полностью; – предоставляют ему отпуск в календарных или рабочих днях. Если расчетный период отработан полностью и отпуск предоставлен в календарных днях, средний дневной заработок следует определить по формуле: Средний дневной заработок=Заработок, начисленный за расчетный период: 12:Среднемесячное число календарных дней (29,4) Если расчетный период отработан не полностью и отпуск предоставляют в календарных днях, средний дневной заработок рассчитается так: Средний дневной заработок=Заработок, начисленный за расчетный период 29,4×Количество полностью отработанных календарных месяцев расчетного периода+Количество календарных дней в не полностью отработанных календарных месяцах (календарном месяце) Количество календарных дней в не полностью отработанном календарном месяце рассчитается по формуле: Количество календарных дней в не полностью отработанном календарном месяце=29,4:Количество календарных дней месяца×Количество календарных дней, приходящихся на присутственное время в не полностью отработанном месяце

ст 139 ТК РФ.

Исчисление средней заработной платы Главная — ГЛАВА 21. ЗАРАБОТНАЯ ПЛАТА — ст 139 ТК РФ. Исчисление средней заработной платы Задать вопрос юристу
Для всех случаев определения размера средней заработной платы (среднего заработка), предусмотренных настоящим Кодексом, устанавливается единый порядок ее исчисления. Для расчета средней заработной платы учитываются все предусмотренные системой оплаты труда виды выплат, применяемые у соответствующего работодателя независимо от источников этих выплат. При любом режиме работы расчет средней заработной платы работника производится исходя из фактически начисленной ему заработной платы и фактически отработанного им времени за 12 календарных месяцев, предшествующих периоду, в течение которого за работником сохраняется средняя заработная плата. При этом календарным месяцем считается период с 1-го по 30-е (31-е) число соответствующего месяца включительно (в феврале — по 28-е (29-е) число включительно). Средний дневной заработок для оплаты отпусков и выплаты компенсации за неиспользованные отпуска исчисляется за последние 12 календарных месяцев путем деления суммы начисленной заработной платы на 12 и на 29,4 (среднемесячное число календарных дней). Средний дневной заработок для оплаты отпусков, предоставляемых в рабочих днях, в случаях, предусмотренных настоящим Кодексом, а также для выплаты компенсации за неиспользованные отпуска определяется путем деления суммы начисленной заработной платы на количество рабочих дней по календарю шестидневной рабочей недели. В коллективном договоре, локальном нормативном акте могут быть предусмотрены и иные периоды для расчета средней заработной платы, если это не ухудшает положение работников. Особенности порядка исчисления средней заработной платы, установленного настоящей статьей, определяются Правительством Российской Федерации с учетом мнения Российской трехсторонней комиссии по регулированию социально-трудовых отношений.

trkodeks. ru/stat/tk-glava-21/statia-139/

27.05.2015 — Максим Папанин

как узнать среднюю заработную плату в сфере ЖКХ для начисления зарплаты председателю правления ЖСК?

Ответ на вопрос дан по телефону.

---

11.07.2012 — Ксения

я отработала 11 месяцев — с 17 августа 2011 по 15 июля 2012. компенсацию за отпуск мне посчитали, поделив заработанную сумму за 11 месяцев на 366 дней.правильно ли это?

---

05.07.2011 — Татьяна

Здравствуйте! Я на настоящей работе 6 месяцев. В статье написано, что средняя заработная плата исчисляется за 12 месяцев. Как в этом случае будут делаться вычисления?
Заранее спасибо.

---

28.06.2011 — Марат

Аналогичный вопрос о разовых премиях, входят ли они в расчет среднего заработка при начисление отпускных? Заранее спасибо за ответ

---

20.04.2011 — Григорий

А если я за последние 12 месяцев работал всего 11(первый обязательный отпуск), мне все равно при начислении отпускных будут делить на 12 месяцев? И входят ли в расчет разовые премии?

Ответ на вопрос дан по телефону.

---

Статья 139. Исчисление средней заработной платы

Для всех случаев определения размера средней заработной платы (среднего заработка), предусмотренных настоящим Кодексом, устанавливается единый порядок ее исчисления.
(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

Для расчета средней заработной платы учитываются все предусмотренные системой оплаты труда виды выплат, применяемые у соответствующего работодателя независимо от источников этих выплат.
(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

При любом режиме работы расчет средней заработной платы работника производится исходя из фактически начисленной ему заработной платы и фактически отработанного им времени за 12 календарных месяцев, предшествующих периоду, в течение которого за работником сохраняется средняя заработная плата. При этом календарным месяцем считается период с 1-го по 30-е (31-е) число соответствующего месяца включительно (в феврале — по 28-е (29-е) число включительно).

(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

Средний дневной заработок для оплаты отпусков и выплаты компенсации за неиспользованные отпуска исчисляется за последние 12 календарных месяцев путем деления суммы начисленной заработной платы на 12 и на 29,4 (среднемесячное число календарных дней).
(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

Средний дневной заработок для оплаты отпусков, предоставляемых в рабочих днях, в случаях, предусмотренных настоящим Кодексом, а также для выплаты компенсации за неиспользованные отпуска определяется путем деления суммы начисленной заработной платы на количество рабочих дней по календарю шестидневной рабочей недели.

В коллективном договоре, локальном нормативном акте могут быть предусмотрены и иные периоды для расчета средней заработной платы, если это не ухудшает положение работников.
(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

Особенности порядка исчисления средней заработной платы, установленного настоящей статьей, определяются Правительством Российской Федерации с учетом мнения Российской трехсторонней комиссии по регулированию социально-трудовых отношений.

< Предыдущая		Следующая >

Статья 139. Трудового кодекса РФ, действующая редакция на 2021 год с комментариями

Для всех случаев определения размера средней заработной платы (среднего заработка), предусмотренных настоящим Кодексом, устанавливается единый порядок ее исчисления.

(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

Для расчета средней заработной платы учитываются все предусмотренные системой оплаты труда виды выплат, применяемые у соответствующего работодателя независимо от источников этих выплат.

(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

При любом режиме работы расчет средней заработной платы работника производится исходя из фактически начисленной ему заработной платы и фактически отработанного им времени за 12 календарных месяцев, предшествующих периоду, в течение которого за работником сохраняется средняя заработная плата. При этом календарным месяцем считается период с 1-го по 30-е (31-е) число соответствующего месяца включительно (в феврале — по 28-е (29-е) число включительно).

(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

Средний дневной заработок для оплаты отпусков и выплаты компенсации за неиспользованные отпуска исчисляется за последние 12 календарных месяцев путем деления суммы начисленной заработной платы на 12 и на 29,3 (среднемесячное число календарных дней).

(в ред. Федеральных законов от 30.06.2006 N 90-ФЗ, от 02.04.2014 N 55-ФЗ)

Средний дневной заработок для оплаты отпусков, предоставляемых в рабочих днях, в случаях, предусмотренных настоящим Кодексом, а также для выплаты компенсации за неиспользованные отпуска определяется путем деления суммы начисленной заработной платы на количество рабочих дней по календарю шестидневной рабочей недели.

В коллективном договоре, локальном нормативном акте могут быть предусмотрены и иные периоды для расчета средней заработной платы, если это не ухудшает положение работников.

(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)

Особенности порядка исчисления средней заработной платы, установленного настоящей статьей, определяются Правительством Российской Федерации с учетом мнения Российской трехсторонней комиссии по регулированию социально-трудовых отношений.

Поделиться с друзьями

Подпишитесь в соц сетях

Публикуем ссылку на статью, как только она выходит. Отдельно даём знать о важных изменениях в законах.

Важно знать!

Поэтому, для вас работают бесплатные эксперты-консультанты!
Расскажите о вашей проблеме, и мы поможем ее решить! Задайте вопрос прямо сейчас!

Анонимно

Профессионально

Задать вопрос юристу бесплатно

Задавайте вопрос
удобным для Вас способом

Ответим на вопрос в соц. сетях

Ответим на вопрос в мессенджерах

Ссылки по теме:

Гарантии и компенсации работникам в случае сдачи ими крови и ее компонентов, исчисление средней заработной платы (ТК РФ статья 186, статья 139)

«Трудовой кодекс Российской Федерации» от 30.12.2001 N 197-ФЗ (ред. от 05.10.2015)

Статья 186. Гарантии и компенсации работникам в случае сдачи ими крови и ее компонентов

В день сдачи крови и ее компонентов, а также в день связанного с этим медицинского осмотра работник освобождается от работы.

В случае, если по соглашению с работодателем работник в день сдачи крови и ее компонентов вышел на работу (за исключением работ с вредными и (или) опасными условиями труда, когда выход работника на работу в этот день невозможен), ему предоставляется по его желанию другой день отдыха.

В случае сдачи крови и ее компонентов в период ежегодного оплачиваемого отпуска, в выходной или нерабочий праздничный день работнику по его желанию предоставляется другой день отдыха.

После каждого дня сдачи крови и ее компонентов работнику предоставляется дополнительный день отдыха. Указанный день отдыха по желанию работника может быть присоединен к ежегодному оплачиваемому отпуску или использован в другое время в течение года после дня сдачи крови и ее компонентов.

При сдаче крови и ее компонентов работодатель сохраняет за работником его средний заработок за дни сдачи и предоставленные в связи с этим дни отдыха.

Статья 139. Исчисление средней заработной платы

Для всех случаев определения размера средней заработной платы (среднего заработка), предусмотренных настоящим Кодексом, устанавливается единый порядок ее исчисления.

Для расчета средней заработной платы учитываются все предусмотренные системой оплаты труда виды выплат, применяемые у соответствующего работодателя независимо от источников этих выплат.

При любом режиме работы расчет средней заработной платы работника производится исходя из фактически начисленной ему заработной платы и фактически отработанного им времени за 12 календарных месяцев, предшествующих периоду, в течение которого за работником сохраняется средняя заработная плата.

При этом календарным месяцем считается период с 1-го по 30-е (31-е) число соответствующего месяца включительно (в феврале — по 28-е (29-е) число включительно).

Средний дневной заработок для оплаты отпусков и выплаты компенсации за неиспользованные отпуска исчисляется за последние 12 календарных месяцев путем деления суммы начисленной заработной платы на 12 и на 29,3 (среднемесячное число календарных дней).

Средний дневной заработок для оплаты отпусков, предоставляемых в рабочих днях, в случаях, предусмотренных настоящим Кодексом, а также для выплаты компенсации за неиспользованные отпуска определяется путем деления суммы начисленной заработной платы на количество рабочих дней по календарю шестидневной рабочей недели.

В коллективном договоре, локальном нормативном акте могут быть предусмотрены и иные периоды для расчета средней заработной платы, если это не ухудшает положение работников.

Особенности порядка исчисления средней заработной платы, установленного настоящей статьей, определяются Правительством Российской Федерации с учетом мнения Российской трехсторонней комиссии по регулированию социально-трудовых отношений.

Статья 139. Исчисление средней заработной платы. ТК РФ

§ 1. С 1 февраля 2002 г. начал действовать единый порядок исчисления размера средней заработной платы.
  К числу случаев, предусмотренных Кодексом, когда возникает необходимость определения размера средней заработной платы, относятся следующие:
— при направлении работника в служебные командировки;
— при переезде на работу в другую местность;
— при исполнении государственных или общественных обязанностей;
— при совмещении работы с обучением;
— при вынужденном прекращении работы не по вине работника;
— при предоставлении ежегодного оплачиваемого отпуска;
— в некоторых случаях прекращения трудового договора;
— в связи с задержкой по вине работодателя выдачи трудовой книжки при увольнении работника;
— во всех других случаях освобождения работника от работы с сохранением за ним среднего заработка, предусмотренных Кодексом (см. комментарий к ст. 165).

§ 2. При решении вопроса о том, должна ли учитываться при расчете среднего заработка та или иная выплата, необходимо в каждом конкретном случае определять, относится ли данная выплата к числу предусмотренных системой оплаты или стимулирования труда, применяемой в данной организации, или нет. Статья дополнена указанием на то, что учитываются все выплаты, предусмотренные не только системой оплаты труда, но и системами стимулирования труда. При этом не имеет никакого значения источник данной выплаты.

§ 3. В соответствии с изменением, внесенным в данную статью, теперь учитывается фактически начисленная заработная плата за 12 календарных (а не фактических) месяцев, предшествующих периоду, в течение которого за работником сохраняется средняя заработная плата. При этом календарным месяцем считается период с 1-го по 30-е (31-е) число соответствующего месяца включительно (в феврале — по 28-е (29-е) число включительно).

§ 4. Особые правила определения среднего заработка предусмотрены для оплаты отпусков и выплаты компенсации за неиспользованные отпуска. Расчетный период в этом случае также составляет 12 календарных месяцев, предшествующих тому месяцу, в котором предоставляется отпуск. Средний дневной заработок определяется путем деления начисленной суммы заработной платы на 12 и на 29,4 (среднемесячное число календарных дней). Определение среднедневного заработка в указанном выше порядке производится в случаях, когда отпуск предоставляется в календарных днях. Иначе определяется средний дневной заработок для оплаты отпусков, предоставляемых в рабочих днях, и для выплаты компенсации за такие отпуска, когда они не использованы. Предоставление оплачиваемых отпусков в рабочих днях предусмотрено для работников, заключивших трудовой договор на срок до двух месяцев. Вместо отпуска им может быть при увольнении выплачена компенсация из расчета два рабочих дня за месяц работы (см. комментарий к ст. 291).

§ 5. Иные периоды для расчета средней заработной платы могут предусматриваться в коллективном договоре, локальном нормативном акте, если это не ухудшает положение работников. Продолжительность таких периодов, очевидно, может быть как меньшей, так и большей по сравнению с указанной в Кодексе, но сам механизм расчета среднего заработка не может быть изменен. Доказательством того, что предусмотренные в коллективном договоре или локальном нормативном акте иные по сравнению с Кодексом периоды не ухудшают положения работника, является размер среднего дневного заработка, который в этих случаях не может быть ниже исчисленного за те периоды, которые указаны в законе.

§ 6. Судебной коллегией Верховного Суда РФ признан недействующим с 1 февраля 2002 г. абз. 1 п. 7.2 Основных положений о вахтовом методе организации работ, утвержденных Постановлением Госкомтруда СССР, Секретариата ВЦСПС, Минздрава СССР от 31 декабря 1987 г., в части исчисления среднего заработка для оплаты ежегодного отпуска с учетом дней отгулов, предоставляемых в учетном периоде. Это противоречит ст. 139 ТК, устанавливающей, что при любом режиме работы расчет средней заработной платы производится исходя из фактически начисленной заработной платы и фактически проработанного времени. Оплата дней отдыха (отгулов) при этом не учитывается. Противоречит ст. 139 ТК и абз. 1 п. 7.3 Основных положений, предусматривающий исчисление часового заработка из фактического заработка за часы, проработанные в последних двух месяцах, в то время как в соответствии с ТК РФ расчетный период равен 12 месяцам (БВС РФ. 2004. N 2. С. 11).

§ 7. Постановлением Правительства РФ от 11 апреля 2003 г. N 213 утверждено Положение об особенностях исчисления средней заработной платы (СЗ РФ. 2003. N 16. Ст. 1529). В Положении, в частности, предусматриваются:
— виды выплат, учитываемые при расчете среднего заработка;
— перечень случаев, когда работник фактически не работал, исключаемых из расчетного периода;
— порядок определения среднего заработка при отсутствии у работника фактически начисленной заработной платы в расчетный период, до его наступления либо даже до наступления случая, с которым связано сохранение заработной платы;
— особенности определения среднего заработка при неполном рабочем времени, при суммированном учете рабочего времени;
— правила включения в заработок премий и вознаграждений; порядок повышения среднего заработка при повышении тарифных ставок (окладов), надбавок.

§ 8. В Постановлении Пленума Верховного Суда РФ от 17 марта 2004 г. N 2 указывается, что средний заработок для оплаты времени вынужденного прогула определяется исходя из фактически начисленной работнику заработной платы и фактически отработанного им времени за 12 месяцев, предшествующих вынужденному прогулу, кроме случаев, когда коллективным договором предусмотрен иной период для расчета средней заработной платы и при условии, что это не ухудшает положение работника (ч. 3 и 6 ст. 139 ТК, абз. 1 п. 3, п. 5 Положения об особенностях порядка исчисления средней заработной платы, утвержденного Постановлением Правительства РФ от 11 апреля 2003 г. N 213).
  Поскольку ст. 139 установлен единый порядок исчисления средней заработной платы для всех случаев определения ее размера, в таком же порядке следует определять средний заработок при взыскании денежных сумм за время вынужденного прогула, вызванного задержкой выдачи уволенному работнику трудовой книжки (ст. 234 ТК), при вынужденном прогуле в связи с неправильной формулировкой причины увольнения (ч. 6 ст. 394), при задержке исполнения решения суда о восстановлении на работе (ст. 396 ТК).
  В силу ч. 7 ст. 139 ТК исчисление подлежащего взысканию среднего заработка производится с учетом Положения об особенностях порядка исчисления средней заработной платы, утвержденного Постановлением Правительства РФ от 11 апреля 2003 г. N 213.
  При взыскании среднего заработка в пользу работника, восстановленного на прежней работе, или в случае признания его увольнения незаконным выплаченное ему выходное пособие подлежит зачету. Однако при определении размера оплаты времени вынужденного прогула средний заработок, взыскиваемый в пользу работника за это время, не подлежит уменьшению на суммы заработной платы, полученной у другого работодателя, независимо от того, работал у него работник на день увольнения или нет, пособия по временной нетрудоспособности, выплаченного истцу в пределах срока оплачиваемого прогула, а также пособия по безработице, которое он получал в период вынужденного прогула, поскольку указанные выплаты действующим законодательством не отнесены к числу выплат, подлежащих зачету при определении размера оплаты времени вынужденного прогула (п. 62).

Ст. 139 Трудовой кодекс РК Гражданская служба от 23 ноября 2015 года № 414-V ЗРК Трудовой кодекс Республики Казахстан Статья 139 Комментарий

1. Поступление на гражданскую службу осуществляется в порядке назначения либо по конкурсу.  

2. Конкурс организовывается и проводится государственным учреждением, казенным предприятием, имеющими вакантную должность. 

3. Прием на гражданскую службу осуществляется путем заключения трудового договора и издания акта работодателя. 

4. На гражданскую службу на должность, связанную с исполнением управленческих функций, не может быть принято лицо, ранее совершившее коррупционное преступление. 

5. Разработка и утверждение реестра должностей гражданских служащих производятся уполномоченными государственными органами соответствующих сфер деятельности по согласованию с уполномоченным государственным органом по труду. 

6. Гражданский служащий не вправе: 

1) использовать в неслужебных целях средства материально-технического, финансового и информационного обеспечения, другое государственное имущество и служебную информацию;  

2) участвовать в действиях, препятствующих нормальному функционированию гражданской службы и выполнению должностных обязанностей;  

3) использовать служебное положение в целях, не связанных с гражданской службой; 

4) разглашать сведения, ставшие известными в период прохождения гражданской службы, составляющие государственные секреты, служебную и иную охраняемую законом тайну. 

7. Порядок и условия проведения аттестации гражданских служащих определяются уполномоченным государственным органом соответствующей сферы деятельности. 

8. Гражданский служащий по его письменному заявлению может быть переведен на работу в другое государственное учреждение, казенное предприятие по согласованию между руководителями соответствующих организаций. 

9. Оплата труда гражданских служащих, содержащихся за счет государственного бюджета, определяется Правительством Республики Казахстан.  

Специалистам в области здравоохранения, социального обеспечения, образования, культуры, спорта, ветеринарии, лесного хозяйства и особо охраняемых природных территорий, являющимся гражданскими служащими и работающим в сельской местности, по решению местных представительных органов за счет бюджетных средств устанавливаются повышенные не менее чем на двадцать пять процентов должностные оклады и тарифные ставки по сравнению с окладами и ставками гражданских служащих, занимающихся этими видами деятельности в городских условиях, если иное не установлено законами Республики Казахстан.  

Перечень должностей специалистов в области здравоохранения, социального обеспечения, образования, культуры, спорта, ветеринарии, лесного хозяйства и особо охраняемых природных территорий, являющихся гражданскими служащими и работающих в сельской местности, определяется местным исполнительным органом по согласованию с местным представительным органом. 

10. Гражданским служащим, содержащимся за счет государственного бюджета, предоставляется основной оплачиваемый ежегодный трудовой отпуск продолжительностью не менее тридцати календарных дней с выплатой пособия на оздоровление в размере должностного оклада. 

Пособие для оздоровления гражданским служащим выплачивается один раз в календарном году при предоставлении оплачиваемого ежегодного трудового отпуска. 

Сноска. Статья 139 с изменением, внесенным Законом РК от 15.06.2017 № 73-VI (вводится в действие с 01.01.2019).

La139 и Cu63 ЯМР-исследование порядка заряда в La2CuO4 + y (Tc = 42 K) (Журнальная статья)

Имаи, Т., и Ли, Ю.С. Исследование с помощью ЯМР La139 и Cu63 зарядового порядка в La2CuO4 + y (Tc = 42 K). США: Н. П., 2018. Интернет. DOI: 10.1103 / Physrevb.97.104506.

Имаи Т. и Ли Ю.С. Исследование зарядового порядка La139 и Cu63 ЯМР в La2CuO4 + y (Tc = 42 K).Соединенные Штаты. DOI: https: //doi.org/10.1103/physrevb.97.104506

Имаи, Т., и Ли, Ю.С. Ср. «Исследование зарядового порядка в La2CuO4 + y (Tc = 42 K)» методом ЯМР La139 и Cu63 ». Соединенные Штаты. DOI: https: //doi.org/10.1103/physrevb.97.104506. https://www.osti.gov/servlets/purl/1436968.

@article {osti_1436968,
title = {Исследование зарядового порядка La139 и Cu63 ЯМР в La2CuO4 + y (Tc = 42 K)},
author = {Имаи, Т.and Lee, Y. S.},
abstractNote = {Здесь мы сообщаем об исследовании ЯМР 139La и 63Cu последовательного зарядового порядка, спинового порядка и сверхпроводящих переходов в сверхоксигенированном монокристалле La2CuO4 + y со стадией 4 избыточного порядка кислорода при Tstage T290 K. Мы показываем, что стадия - 4-й порядок вызывает наклон октаэдров CuO6 ниже Tstage, что, в свою очередь, вызывает уширение линии ЯМР 139La. Структурное искажение продолжает развиваться намного ниже Tstage и завершается при Tcharge≃60 K, где устанавливается порядок заряда.Эта последовательность напоминает переход заряд-порядок в La1.88Sr0.12CuO4, содегированной неодимом, который наступает после установления низкотемпературной тетрагональной фазы. Мы также показываем, что парамагнитные сигналы ЯМР 63Cu постепенно стираются ниже Tcharge из-за усиленных низкочастотных спиновых флуктуаций в доменах с упорядоченным зарядом, но остаточные сигналы ЯМР 63Cu продолжают демонстрировать характеристики, ожидаемые для оптимально допированных сверхпроводящих плоскостей CuO2. Это указывает на то, что порядок заряда в La2CuO4 + y неравномерно распределен в пространстве.Кроме того, в отличие от типичных магнитных фазовых переходов второго рода, низкочастотные спиновые флуктуации Cu, измеренные с помощью скорости ядерной спин-решеточной релаксации 139La, не обнаруживают критической расходимости при Tspin (≃Tc) = 42 К. Эти результаты, включая пространственные Неоднородный характер зарядово-упорядоченного состояния качественно аналогичен случаю La1,885Sr0,115CuO4, но в данном случае и зарядовый, и спиновой порядок имеют более резкое значение.},
doi = {10.1103 / Physrevb.97.104506},
journal = {Physical Review B},
число = 10,
объем = 97,
place = {United States},
год = {2018},
месяц = ​​{3}
}

Массовые изменения в ледяных шапках и ледниках Арктики: последствия регионализации изменений высот

Исследовательская статья 27 янв 2015

Исследовательская статья | 27 янв 2015

Дж.Нильссон ¹ , Л. Сандберг Соренсен ¹ , В. Р. Барлетта ^1,2 и Р. Форсберг ¹ J. Nilsson et al. Дж. Нильссон ¹ , Л. Сандберг Соренсен ¹ , В. Р. Барлетта ^1,2 и Р. Форсберг ¹

• ¹ Кафедра геодинамики, DTU Space, Технический университет Дании, Elektrovej 327, 2800 Lyngby, Дания
• ² Государственный университет Огайо, 275 Mendenhall Lab, 125 S.Овал Молл, Колумбус, Огайо, 43214, США

• ¹ Департамент геодинамики, DTU Space, Технический университет Дании, Elektrovej 327, 2800 Lyngby, Дания
• ² Государственный университет Огайо, 275 Mendenhall Lab, 125 S. Oval Mall, Columbus, Ohio, 43214, USA

Переписка : Дж. Нильссон ([email protected])

Скрыть данные об авторе Получено: 22 октября 2013 г. — Начало обсуждения: 11 декабря 2013 г. — Исправлено: 27 ноября 2014 г. — Принято: 2 декабря 2014 г. — Опубликовано: 27 января 2015 г.

Баланс массы ледников и ледяных шапок чувствителен к изменению климатических условий.Изменения массы, полученные в этом исследовании, определяются на основе изменений высоты, полученных с помощью спутника измерения высоты льда, облаков и суши (ICESat) за период 2003–2009 годов. Четыре метода, основанные на интерполяции и экстраполяции, используются для районирования этих изменений высоты в областях без спутникового покрытия. Затем применяется предположение о постоянной плотности для оценки изменения массы путем интегрирования по всей ледниковой области.

Основная цель данного исследования — изучить чувствительность регионального баланса массы арктических ледяных шапок и ледников к различным схемам районирования.Анализ чувствительности основан на изучении распространения массовых изменений и связанных с ними ошибок, а пригодность различных методов регионализации оценивается посредством перекрестной проверки.

Результаты перекрестной проверки показывают сопоставимую точность для всех методов районирования, но предполагаемое изменение массы в отдельных регионах, таких как Шпицберген и Исландия, может варьироваться до 4 Гт на ⁻¹ , что превышает расчетные ошибки примерно на 50. % для этих регионов. Это исследование также показывает, что этот разброс в балансе массы связан с величиной изменчивости изменения высоты.Это указывает на то, что следует проявлять осторожность при выборе метода районирования, особенно для районов, которые демонстрируют большую изменчивость в изменении высоты.

Тепловая структура и дренажная система небольшого долинного ледника (Теллбреен, Шпицберген), исследованная георадаром

Исследовательская статья 4 марта 2011 г.

Исследовательская статья | 4 марта 2011 г.

К.Бюлум ¹ и Д. И. Бенн ^1,2 К. Бэлум и Д. И. Бенн К. Бюлум ¹ и Д. И. Бенн ^1,2

• ¹ Департамент геологии, Университетский центр на Свальбарде (UNIS), Лонгйир, Норвегия
• ² Школа географии и наук о Земле, Университет Сент-Эндрюс, Великобритания

• ¹ Департамент геологии Университетского центра на Свальбарде (UNIS), Лонгйир, Норвегия
• ² Школа географии и наук о Земле, Университет Сент-Эндрюс, Великобритания

Скрыть сведения об авторе Получено: 13 октября 2010 г. — Начало обсуждения: 21 октября 2010 г. — Исправлено: 17 февраля 2011 г. — Принято: 18 февраля 2011 г. — Опубликовано: 4 марта 2011 г.

Прогляциальные наледи накапливаются перед многими ледниками высокой Арктики в течение зимних месяцев по мере того, как вода выходит из ледникового или подледникового накопления.Такие обледенения были интерпретированы как свидетельство наличия теплых подледниковых условий, но теперь известно, что некоторые из них возникают перед ледниками, основанными на холоде. В этом исследовании мы исследуем дренажную систему Tellbreen, ледника длиной 3,5 км в центральном Шпицбергене, где каждую зиму образуется большое прогляциальное обледенение, чтобы определить расположение и геометрию элементов хранения. Цифровые модели рельефа (ЦМР) поверхности и ложа ледника были построены с использованием карт, дифференциальной GPS и георадара (GPR).Скорость опускания поверхности указывает на то, что ледник имеет долгосрочный баланс массы -0,6 ± 0,2 м / год. Англяциальные и подледниковые дренажные каналы были нанесены на карту с помощью георадара, что показало, что Tellbreen имеет разнообразную дренажную систему, которая способна накапливать, транспортировать и выпускать воду круглый год. В верхней части ледника дренаж осуществляется в основном по надледниковым каналам. Эти переходы в неглубокие межледниковые каналы, образованные разрезом и закрытием кровли надледниковых каналов.Под тонким льдом около конечной остановки эти каналы достигают дна и содержат воду в течение зимних месяцев. Несмотря на то, что никаких признаков умеренного льда обнаружено не было, а слой пласта ниже точки плавления под давлением, Tellbreen имеет подледниковую дренажную систему с поверхностным питанием и канализацией, которая обеспечивает значительное хранение и отсроченный сброс.

Stu2p: белок, связывающий микротрубочки, который является важным компонентом тела полюса веретена дрожжей | Журнал клеточной биологии

Ранее мы выделили tub2 — 423 , чувствительный к холоду аллель гена Saccharomyces cerevisiae , кодирующего β-тубулин, который вызывает нарушение функции митотического веретена.В попытке идентифицировать дополнительные белки, которые важны для функции веретена, мы провели скрининг на супрессоры чувствительности к холоду tub2-423 и получили два аллеля нового гена STU2. STU2 является важным геном и кодирует белок, последовательность которого подобна белкам, идентифицированным у множества организмов. Stu2p локализуется преимущественно в теле полюса веретена (SPB) и в меньшей степени вдоль микротрубочек веретена. Локализация в SPB не зависит от присутствия микротрубочек, это указывает на то, что Stu2p является неотъемлемым компонентом SPB.Stu2p также связывает микротрубочки in vitro. Мы локализовали связывающий микротрубочки домен Stu2p в высокоосновной области из 100 аминокислот. Эта область содержит два несовершенных повтора; оба повтора, по-видимому, в одинаковой степени вносят вклад в связывание микротрубочек. Эти результаты подтверждают, что Stu2p может играть роль в прикреплении, организации и / или динамике концов микротрубочек на SPB.

Центр организации микротрубочек (MTOC) ¹ эукариотических клеток контролирует количество, полярность и организацию клеточных микротрубочек.В дрожжах Saccharomyces cerevisiae MTOC представляет собой тело полюса веретена (SPB), которое встроено в ядерную оболочку на протяжении всего клеточного цикла и образует ядра микротрубочек, которые простираются в ядро ​​и цитоплазму. SPB представляет собой трехламинарный диск, состоящий из центральной бляшки и фланкирующих внутренней и внешней бляшек на ядерной и цитоплазматической поверхностях, соответственно (Byers, 1981). Внутренние и внешние бляшки являются сайтами ассоциации микротрубочек in vivo и, вероятно, участвуют в зарождении полимеризации микротрубочек и в закреплении микротрубочек на SPB.

Считается, что зарождение микротрубочек осуществляется за счет действия комплекса γ-тубулин. γ-Тубулин локализован в MTOC в клетках животных (Stearns et al., 1991; Zheng et al., 1991) и грибах (Oakley et al., 1990; Horio et al., 1991; Sobel and Snyder, 1995; Marschall. et al., 1996; Spang et al., 1996). γ-Тубулин также присутствует в цитоплазме клеток животных как компонент большой кольцеобразной структуры, способной зарождать микротрубочки (Stearns and Kirschner, 1994; Zheng et al., 1995). Сходная кольцевая структура, содержащая γ-tubulin, была идентифицирована в MTOCs в основании зародышевых микротрубочек (Moritz et al., 1995). γ-Тубулин необходим для функционирования центросом in vivo (Joshi et al., 1992) и in vitro (Felix et al., 1994; Stearns and Kirschner, 1994) и необходим для жизнеспособности грибов (Oakley et al., 1990 ; Horio et al., 1991; Stearns et al., 1991; Sobel and Snyder, 1995; Marschall et al., 1996; Spang et al., 1996). Фенотипы мутантов γ-тубулина S. cerevisiae согласуются с ролью этого белка в зародышеобразовании микротрубочек (Marschall et al., 1996; Spang et al., 1996).

Взаимосвязь между зарождением микротрубочек и закреплением микротрубочек на MTOC не ясна. Микротрубочки — это динамические полимеры во время митоза. Наблюдение за направленным к полюсу потоком микротрубочек в митотических веретенах (Mitchison, 1989; Sawin and Mitchison, 1991) подразумевает, что прикрепление микротрубочек к MTOCs д. Быть организовано таким образом, чтобы позволять обмен субъединицами тубулина на концах микротрубочек.Один из способов для MTOC выполнить эту задачу — это сделать латеральные прикрепления к микротрубочкам. Такие прикрепления м. Закрепить микротрубочки на MTOC и одновременно обеспечивать обмен субъединицами на концах микротрубочек. В этом отчете мы описываем белок, Stu2p, который может играть роль в закреплении и организации микротрубочек на S. cerevisiae MTOC. Stu2p является неотъемлемым компонентом SPB и способен латерально связываться с микротрубочками.

Геномная библиотека дрожжей на основе центромер была сделана из геномной ДНК CUY1042 по протоколу Роуза и его коллег (Rose et al., 1987; Rose and Broach, 1991) со следующими модификациями. Геномную ДНК с высокой молекулярной массой выделяли и частично расщепляли с помощью Sau3A. фрагментов ДНК размером от 6 до 9 т.п.н. были выделены из препаративного агарозного геля с помощью электроэлюции и лигированы в сайт BamHI pRS315 (Sikorski and Hieter, 1989). Лигированную ДНК трансформировали в компетентные клетки ElectroMAX Dh20B ™ (GIBCO BRL, Gaithersburg, MD) электропорацией. Было выделено и объединено 66000 трансформантов. 12 из 15 исследованных плазмид имели вставки размером от 5.От 5 до 15 кб при среднем размере 8,2 кб. Общее содержание геномной ДНК в этой библиотеке в ~ 31 раз больше, чем в геноме дрожжей.

Аллель stu2-1 был клонирован путем комплементации чувствительного к холоду фенотипа мутации tub2-423 . Описанная выше геномная библиотека дрожжей была трансформирована в CUY696. Через 2 дня при 30 ° C 11500 трансформантов помещали на планшеты YPD и инкубировали при 16 ° C в течение 3 дней.Затем реплики этих клеток снова высевали на планшеты YPD и инкубировали при 16 ° C в течение 5 дней. Три трансформанта смогли расти при 16 ° C. Плазмиды, выделенные из этих штаммов, были способны подавлять фенотип tub2-423 после повторной трансформации в CUY696. Три плазмиды, обозначенные как pS2, pS20 и pS28, содержали вставки ДНК размером 6,7, 6,5 и 10,5 т.п.н. соответственно и имели перекрывающийся фрагмент размером 5 т.п.н., как показано рестрикционным картированием.

Чтобы проверить, что аутентичный локус stu2-1 был клонирован, 6.Фрагмент XhoI – XbaI размером 7 т.п.н. pS2 (см. Фиг. 2) был субклонирован в интегрирующую плазмиду pRS305 (Sikorski and Hieter, 1989), чтобы получить плазмиду pWP5. Затем pWP5 линеаризовали с помощью BamHI, который разрезает один раз внутри вставки, и трансформировали в клетки CUY696. Трансформанты Leu ⁺ скрещивали с CUY1042, и полученные диплоиды спорулировали. У всех рассеченных тетрад наблюдались только родительские генотипы; четыре споры в каждой тетраде росли при 16 ° C.

Для физического картирования гена STU2 использовали фрагмент PstI – PstI размером 3 т.п.н. из геномной вставки pS2 для зондирования клонов геномной ДНК дрожжей, содержащих фаг λ (Riles et al., 1993). Зонд гибридизировался с двумя клонами, Американская коллекция типовых культур (Роквилл, Мэриленд), номерами 6122 и 4488. Эти два клона находятся на расстоянии ~ 2 т.п.н. друг от друга на хромосоме XII около PDC1.

Для локализации гена stu2-1 внутри клонированного фрагмента ДНК была создана серия вложенных делеций, начинающихся с обоих концов вставки pS2, с использованием комбинации экзонуклеазы III и нуклеазы S1 (Heinrich, 1991).Каждую из полученных делеций трансформировали в CUY696, чтобы проверить его способность подавлять чувствительный к холоду фенотип tub2-423. Были секвенированы делеционные конструкции, охватывающие локус stu2-1 .

Аллели STU2 и stu2-2 были восстановлены с помощью репарации плазмидных разрывов (Rothstein, 1991). Чтобы получить плазмиду с разрывом, pS2 расщепляли NsiI для удаления 4.Фрагмент размером 3 т.п.н., содержащий полную кодирующую последовательность stu2-1 , ∼1,2 т.п.н. восходящей последовательности и ∼450 п.н. нижестоящей последовательности. Оставшийся фрагмент повторно лигировали для создания pWP42. pWP42 линеаризовали с помощью NsiI, дефосфорилировали, очищали в геле и трансформировали в CUY1045 ( stu2-2 ) и диплоидный штамм CUY1046 ( STU2 / stu2 -Δ 1 :: HIS3 14) для восстановления 142 stu2-2 и STU2 аллели соответственно. Плазмиды выделяли из трансформантов Leu ⁺ , трансформировали клетки Escherichia coli Dh20B ^TM с помощью электропорации и анализировали рестрикционным картированием.Были получены аллели STU2 (pWP45) и stu2-2 (pWP44). Как и ожидалось, аллель stu2 -Δ 1 :: HIS3 также был выделен из клеток CUY1046.

Чтобы сузить локализацию мутаций в супрессорных аллелях, мы заменили фрагмент SpeI размером 3,3 т.п.н. между pS2 ( stu2-1 ) и pWP45 ( STU2 ). Этот фрагмент содержит 1,4 т.п.н. карбоксиконцевой кодирующей последовательности STU2. Такой же эксперимент с заменой последовательностей был проведен между pWP44 ( stu2-2 ) и pWP45 ( STU2 ). Полученные гибридные плазмиды трансформировали в CUY696 и тестировали на их способность подавлять фенотип tub2-423 . Этот эксперимент показал, что как для аллелей stu2-1 , так и для аллелей stu2-2 супрессорные мутации находятся во фрагменте SpeI размером 3,3 т.п.н. Карбоксиконцевые кодирующие области размером 1,4 т.п.н. как STU2 , так и stu2-2 секвенировали из обеих цепей с помощью синтетических праймеров для секвенирования.Полная последовательность STU2 дикого типа была отправлена ​​в EMBL / GenBank / базу данных (номер доступа U35247).

Сайт BclI был сконструирован непосредственно перед стоп-кодоном в STU2 с помощью ПЦР со следующими двумя праймерами: 5′-ACGATTTCATCATACTCC-3 ‘и 5’-GGAGGCTACCCT TTA TTGATCAGTCCTGGTTGTCCC-3′ (стоп-кодон , а вставленный сайт BclI подчеркнут).Фрагмент размером 384 п.н., амплифицированный из pWP45 с указанными выше праймерами, был субклонирован в вектор клонирования ТА pCR ™ II (Invitrogen, Carlsbad, CA), чтобы получить pWP59. EcoRV-EcoRV-фрагмент pWP59 длиной 171 п.н. был субклонирован в сайт EcoRV pWP58, который содержит фрагмент BamHI-SphI размером 2,6 т.п.н. pWP45 в плазмиде pTZ18U (Bio Rad, Ричмонд, Калифорния), что привело к pWP61 с правой вставкой ориентация.

Для создания слитой конструкции STU2 – GFP мутантная версия зеленого флуоресцентного белка (GFP) S65T была высвобождена из pRSET _B -S65T (Heim et al., 1995) путем расщепления BamHI и клонировали в сконструированный сайт BclI pWP61, давая pWP87. Фрагмент BamHI-SphI размером 3,3 т.п.н. из pWP87 использовали для замены фрагмента BamHI-SphI размером 2,6 т.п.н. из pWP45 и pWP81. pWP81 имеет ту же вставку stu2-1 , что и pS2 в векторе YEp pRS426 (Sikorski and Hieter, 1989). Полученные плазмиды, содержащие слияния STU2-GFP , обозначаются как pWP89 (YCp) и pWP90 (YEp). STU2 – GFP также использовался для замены хромосомной копии STU2. Фрагмент 1,2 т.п.н., содержащий ген URA3 , был клонирован в сайт SphI pWP89 для получения pXC277. Фрагмент SpeI – SpeI размером 5,5 т.п.н. pXC277 трансформировали в гаплоидный штамм дикого типа.

ДНК

, кодирующая три тандемные копии эпитопа гемагглютинина (НА), была амплифицирована с помощью ПЦР из плазмиды GTEPI (подарок Б. Футчера, Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, штат Нью-Йорк) со следующими двумя праймерами: 5′-GAAGATCTTGGCCGCATCTTTTACCCA -3 ‘и 5′-GAAGATCTCCGCACTGAGCAGCGTAAT-3’.ПЦР-амплифицированная ДНК НА ₃ имеет сайт BglII на каждом конце (подчеркнут). Продукт ПЦР с ограничением BglII длиной 120 п.н. лигировали в сайт BclI pWP61 для получения pWP67. Фрагмент SpeI-SphI размером 1,81 т.п.н. pWP67 был субклонирован в сайт SpeI-SphI pWP20. Полученная плазмида YCp, содержащая STU2-HA ₃ , обозначена как pWP70.

Чтобы выяснить, являются ли меченые конструкции Stu2p функциональными, pWP70, pWP89 и pWP90 независимо трансформировали в CUY1046 ( STU2 / stu2 -Δ 1 :: HIS3 ).Трансформанты Leu ⁺ спорулировали и препарировали тетрады. В каждом случае жизнеспособные споры His ⁺ всегда были Leu ⁺ , демонстрируя, что меченые конструкции STU2 дополняют разрушение stu2 -Δ 1 :: HIS3 .

GFP визуализировали либо в живых клетках, либо в клетках, которые были зафиксированы формальдегидом, как описано ниже. Зеленая флуоресценция Stu2p-GFP чувствительна к фиксации, но восстанавливает флуоресценцию с пониженной интенсивностью после удаления формальдегида.Клетки выращивали в среде SD в присутствии 1 мкг / мл 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI) в течение от 2 до 4 часов для визуализации ядерной ДНК в живых клетках.

Иммунофлуоресцентное окрашивание дрожжевых клеток выполняли, как описано ранее (Pasqualone and Huffaker, 1994). Для визуализации только микротрубочек клетки фиксировали, добавляя формальдегид до конечной концентрации 3,7% и инкубируя при 30 ° C в течение 1 часа. Для визуализации HA- или GFP-меченного Stu2p или γ-тубулина клетки фиксировали в течение 25 мин.Крысиное моноклональное антитело против дрожжевого α-тубулина, YOL1 / 34 (Kilmartin et al., 1982), было подарком J. Kilmartin (Совет медицинских исследований, Кембридж, Великобритания). Мышиное моноклональное антитело 12CA5, которое распознает эпитоп HA, было приобретено у Berkeley Antibody Co. (Беркли, Калифорния). Кроличьи антитела против дрожжевого γ-тубулина, TUB4-1-4 (Marschall et al., 1996), были подарком T. Stearns (Стэнфордский университет, Стэнфорд, Калифорния). Конъюгированные с родамином вторичные антитела козы против кролика и козы против крысы и конъюгированные с флуоресцеином козлиные антитела против мыши были получены от Cappel Research Products (Дарем, Северная Каролина).Перед использованием их для визуализации метки НА как 12CA5, так и конъюгированные с флуоресцеином козьи антимышиные антитела были предварительно абсорбированы фиксированными дрожжевыми сферопластами дикого типа в течение ночи при 4 ° C.

Транскрипцию и трансляцию in vitro всех конструкций STU2 проводили с использованием набора для системы лизата ретикулоцитов, связанного с TNT T7 (Promega, Madison, WI). Реакцию проводили путем объединения следующих реагентов: 25 мкл лизата кроличьих ретикулоцитов TNT, 2 мкл реакционного буфера TNT, 1 мкл РНК-полимеразы TNT T7, 1 мкл смеси аминокислот TNT без метионина, 1 мкл (40 U) ингибитора рибонуклеазы RNasin (Promega ), 5 мкл (50 мкКи) метионина [ ³⁵ S] метионина «маркирующего клетки» (Amersham Intl., Arlington Heights, IL), 15 мкл H ₂ O и 1 мкл (1 мкг) плазмидной ДНК. Реакционную смесь инкубировали при 30 ° C от 60 до 80 мин. В зависимости от эффективности транскрипции и трансляции, 2–10 объемов буфера PEM-TDTG (0,1 M Pipes, 2 мМ EGTA, 1 мМ MgSO ₄ , 0,1% Triton X-100, 4 мМ DTT, 20 мкМ таксол, 1 мМ GTP) добавляли к каждой реакции, и реакции очищали центрифугированием при 57000 g в течение 20 минут при 30 ° C. Супернатанты удаляли и использовали для анализа совместимости микротрубочек.

tub2-423 является чувствительным к холоду аллелем дрожжевого гена, кодирующего β-тубулин, и вызывает специфический дефект функции веретена при 16 ° C (Reijo et al., 1994). Спонтанные супрессоры этой мутации были выделены путем высевания клеток tub2-423 при 16 ° C. Холодоустойчивые колонии возникали с частотой ∼10 ⁻⁷ . Мы получили 29 независимых мутантов, которые росли со скоростью дикого типа при 16 ° C.Для 15 из этих мутантов супрессия разделилась как мутация одного гена при обратных скрещиваниях со штаммом tub2-423 . 10 из этих последних мутаций были тесно связаны с TUB2 и предположительно являются внутригенными супрессорами. Три из пяти экстрагенных супрессоров были прочно сцеплены с локусом STU1 (Pasqualone and Huffaker, 1994). Остальные две мутации были тесно связаны друг с другом и доминировали для подавления (рис. 1). Мы назвали ген, идентифицированный этими двумя мутациями, , STU2, (супрессор тубулина).Ни stu2-1 , ни stu2-2 не придают условно-летальный фенотип на фоне tub2-423 или TUB2 .

Чтобы проверить генетические взаимодействия между аллелями stu2 ^sup и другими аллелями tub2 , мы сконструировали гаплоидные штаммы, содержащие stu2-1 и один из девяти чувствительных к холоду аллелей tub2 (120, 209 и 401 –407) и гаплоидные штаммы, содержащие stu2-2 и один из семи различных чувствительных к холоду аллелей tub2 (418, 421, 429, 434, 438, 445 и 451).Мы наблюдали, что stu2-2 также подавлял чувствительность к холоду tub2-418 , но ни один из других протестированных аллелей tub2 не подавлялся ни одним из супрессоров stu2 . Следовательно, подавление с помощью stu2-1 и stu2-2 является аллель-специфичным. Кроме того, штамм с двойным мутантом, содержащий stu2-1 и tub2-404 , был неактивным при 30 ° C. При этой температуре дрожжевые штаммы, несущие одну из этих мутаций, растут со скоростью дикого типа.Таким образом, летальность возникает в результате комбинации двух несвязанных мутаций — феномена, называемого синтетической летальностью (Huffaker et al., 1987).

Мы клонировали доминантный супрессорный аллель stu2-1 по его способности подавлять мутацию tub2-423 . Мы получили три независимых клона, которые содержат перекрывающийся фрагмент размером ~ 5 т.п.н. Геномная ДНК из вставки одной из этих плазмид направляла интеграцию маркера LEU2 в локус STU2 , демонстрируя, что плазмида содержит аллель stu2-1 .Ген STU2 отображается на хромосоме XII, рядом с PDC1 (см. Материалы и методы).

Наименьший фрагмент протестированной ДНК, который все еще содержит супрессивную активность, — это вставка размером 4,8 т.п.н., содержащаяся в плазмиде pWP9 (рис. 2). Анализ последовательности показал, что этот фрагмент содержит ORF длиной 2664 п.н. pWP9 также содержит ORF из 812 пар оснований, YLR406c, перед большей ORF. Поскольку pWP2, который содержит весь ген YLR406c, не подавляет аллель tub2-423 , мы заключаем, что большая ORF должна кодировать Stu2p . Ген STU2 дикого типа и аллель stu2-2 клонировали посредством репарации плазмидных разрывов и секвенировали. STU2 кодирует основной белок из 888 аминокислот и 101 кДа (изоэлектрическая точка = 8,6). Предполагается, что Stu2p имеет область спиральной спирали (Lupas et al., 1991) от остатков 658 до 764. Два потенциальных сайта фосфорилирования для киназы Cdc28 (консенсусная последовательность S / TP [X] R / K) обнаружены в высокоосновной область в позициях 603 и 645.

Stu2p показывает умеренный уровень сходства с несколькими другими белками (рис.3). Stu2p на 22% идентичен S. pombe p93 ^dis1 (Nabeshima et al., 1995). Он также похож на человеческий ch-TOG (Charrasse et al., 1995) и C. elegans ZYG-9 (Matthews, 1997). Оба эти белка примерно в два раза больше Stu2p. Stu2p сходен с аминоконцевыми половинами ch-TOG и ZYG-9 (22% и 27% соответственно). Геном S. cerevisiae не содержит никакой последовательности, которая могла бы кодировать белок со значительным сходством с карбоксиконцевыми половинами этих белков.

Сравнение последовательностей между STU2 и двумя супрессорными аллелями выявило различия в двух парах оснований как у stu2-1 (A1540G, C2561T), так и у stu2-2 (G1537T, C2561T). Появление T в положении 2561 в аллелях stu2-1 и stu2-2 предполагает, что это нуклеотидное различие может быть связано с полиморфизмом между CUY696, от которого произошли обе супрессорные мутации, и CUY1046, из которого был клонирован STU2 .Мы секвенировали ген STU2 из CUY696 и обнаружили, что этот штамм действительно содержит T в положении 2561. Следовательно, мутации, ответственные за подавляющую активность stu2-1 и stu2-2 , представляют собой A1540G и G1537T, соответственно. Эти мутации вызывают замену аминокислоты T514A в stu2-1 и замену аминокислоты D513Y в stu2-2.

Чтобы определить, требуется ли STU2 для митотического роста, мы заменили последовательность stu2-1 , кодирующую аминокислоты 57-235, на фрагмент ДНК, несущий маркер HIS3 (рис.2, B , stu2 -Δ 1 :: HIS3 ). Полученная конструкция была трансформирована в диплоид His ^— дикого типа. Трансформант His ⁺ с помощью ПЦР показал, что он содержит одну копию разрушенного гена STU2 (данные не показаны). Трансформант His ⁺ спорулировали и рассекали тетрады. Каждая из 20 тетрад содержала две споры His ^–, которые были способны образовывать колонии, и две споры, которые не могли образовывать колонии, демонстрируя, что ген STU2 необходим для жизнеспособности.Аналогичные результаты были получены с использованием точной делеции всей кодирующей области STU2 (фиг. 2 B , stu2 -Δ 2 :: HIS3 ). Споры stu2 -Δ 1 :: HIS3 прорастали на среде YPD, и каждая ( n = 6) давала в среднем 12 клеток-потомков. Способность клеток stu2 -Δ 1 :: HIS3 претерпевать три или четыре клеточных деления может быть связана с поступлением Stu2p дикого типа, унаследованного от их диплоидного родителя.

Слияние между STU2 и кодирующей областью GFP было создано, чтобы сделать возможным визуализацию Stu2p. Эта конструкция на плазмиде YCp, плазмиде YEp или интегрированная в единственной копии в геном дрожжей была способна комплементировать делецию STU2 . GFP-меченый Stu2p был визуализирован в stu2 -Δ 1 :: HIS3 клетках, несущих плазмидные STU2 – GFP , или в клетках с хромосомной копией STU2 , замененной на STU2 – GFP. Картина флуоресценции, наблюдаемая в каждой из этих ситуаций, была сходной, но интенсивность окрашивания была несколько больше при STU2 – GFP на плазмидах. В живых клетках одна яркая флуоресцентная точка наблюдалась в клетках без почки, а две точки обычно наблюдались в почкующихся клетках (рис. 4). В небольших почкующихся клетках две точки были либо смежными, либо разделенными на ~ 1 мкм. В больших почкующихся клетках две флуоресцентные точки часто были разделены на каждое клеточное тело. По-видимому, интенсивность окрашивания не менялась в течение клеточного цикла.Когда клетки выращивали в присутствии DAPI, мы наблюдали, что точки Stu2p-GFP располагались на периферии ядерной ДНК.

Мы также исследовали локализацию HA ₃ с тегом Stu2p. Эта конструкция была способна дополнять делецию STU2 , и Stu2p-HA ₃ был визуализирован в stu2 -Δ 1 :: HIS3 клетках, несущих плазмидные STU2-HA ₃ .Паттерн локализации Stu2p-HA ₃ был таким же, как наблюдаемый для Stu2p-GFP; он располагался в одной или двух точках на периферии ядра клеток (фиг. 5, C ). Этот паттерн локализации предполагал, что Stu2p, вероятно, был компонентом SPB. Чтобы подтвердить эту гипотезу, мы сравнили локализацию Stu2p-GFP с локализацией γ-tubulin, известного компонента SPB (Sobel and Snyder, 1995; Marschall et al., 1996; Spang et al., 1996). Мы наблюдали, что Stu2p-GFP колокализуется с γ-тубулином (рис.5 А ).

Помимо присутствия в SPBs, небольшие количества Stu2p, по-видимому, также локализуются вдоль микротрубочек. Слабое окрашивание Stu2p-GFP часто наблюдалось как прямая линия между SPBs в анафазных клетках, указывая на некоторое количество Stu2p вдоль микротрубочек веретена (Fig. 4, нижний ряд ). Перед анафазой Stu2p также, по-видимому, простирался от SPB к центру веретена, но это было трудно отличить от одного окрашивания SPB из-за относительно большого размера флуоресцентной точки на SPB и относительно небольшого расстояния между полюсами. .Наконец, мы иногда наблюдали слабое окрашивание Stu2p вдоль цитоплазматических волокон, которые отходят от SPBs, что согласуется с некоторыми Stu2p, локализованными вдоль цитоплазматических микротрубочек. Однако подавляющее большинство Stu2p, по-видимому, связано с SPB на протяжении всего клеточного цикла.

Чтобы определить, зависит ли ассоциация Stu2p с SPB от присутствия микротрубочек, клетки, содержащие STU2-GFP , обрабатывали деполимеризующим микротрубочки лекарством, нокодазолом.После этой обработки 90% клеток не содержали микротрубочек, которые можно было бы обнаружить с помощью иммунофлуоресценции. Обработка нокодазолом не повлияла на количество клеток, содержащих окрашивание Stu2p-GFP (> 95%), или заметно не изменила интенсивность окрашивания по сравнению с необработанными клетками (рис. 5 B ).

Две линии доказательств предполагают, что Stu2p может напрямую взаимодействовать с микротрубочками. Во-первых, мутации в STU2 демонстрируют аллель-специфическое подавление tub2-423 ; во-вторых, Stu2p локализуется в SPB, где располагаются концы микротрубочек, и в меньшей степени по длине микротрубочек.Чтобы определить, связывается ли Stu2p напрямую с микротрубочками, мы выполнили in vitro анализ микротрубочек-коседиментации. ³⁵ S-меченный Stu2p синтезировали транскрипцией и трансляцией in vitro и инкубировали с большим избытком стабилизированных таксолом микротрубочек головного мозга быка (тубулин / Stu2p> 100: 1). Когда микротрубочки затем осаждали центрифугированием, почти весь Stu2p был осажден микротрубочками (фиг. 6, A , последняя дорожка). С другой стороны, большая часть Stu2p оставалась в супернатанте в отсутствие микротрубочек (рис.6 A , первая полоса ). Связывающая активность может быть отменена обработкой 0,4 М NaCl (данные не показаны).

Для определения аффинности связывания микротрубочек Stu2p постоянное количество ³⁵ S-меченного Stu2p смешивали с различными количествами микротрубочек. Как видно на фиг. 6, A и B , связывание Stu2p с микротрубочками зависит от концентрации и является насыщаемым.Кажущаяся константа диссоциации, K _d , равная концентрации полимеризованного тубулина, необходимой для осаждения половины Stu2p в реакции, составляет 5,4 × 10 ^-7 M.

Локализация Stu2p в SPB повышает вероятность того, что Stu2p может связываться с концами микротрубочек, как это делает γ-tubulin. Чтобы изучить эту возможность, мы разрезали микротрубочки, чтобы получить больше полимерных концов для данной концентрации тубулина.Срезанные микротрубочки со средней длиной 3,4 ± 1,2 мкм были почти в три раза короче, чем микротрубочки без надрезов со средней длиной 9,3 ± 5,2 мкм (рис. 7, A ). Если Stu2p связывается исключительно с концами микротрубочек, мы могли бы ожидать примерно трехкратного уменьшения значения K _d , измеренного для срезанных микротрубочек. Как показано на фиг.7 B , значение K _d , измеренное для срезанных микротрубочек (0,56 ± 0,07 мкМ), было почти идентично таковому с микротрубочками без среза (0.54 ± 0,19 мкМ). Т.о., сродство Stu2p к микротрубочкам не зависит от концентрации концов микротрубочек, указывая тем самым, что Stu2p связывается латерально с микротрубочками.

Чтобы определить домен связывания микротрубочек Stu2p, мы измерили относительную аффинность связывания микротрубочек ряда конструкций усечения на амино- и карбокси-конце (Рис. 8). Первоначально мы измерили фракцию Stu2p, которая совмещалась с микротрубочками при одной концентрации микротрубочек (16.5 мкМ тубулина). Усечения, в которых отсутствует до 231 аминокислоты от карбоксиконца Stu2p (фиг. 8, C846 , C730 и C657 ), связываются с микротрубочками почти так же, как полноразмерный Stu2p. Дальнейшая делеция 100 аминокислот до остатка 557 (C557) отменяет большую часть связывающей активности. Усечения, в которых отсутствует до 557 аминокислот от N-конца Stu2p (N485 и N558), обладают активностью связывания микротрубочек, сравнимой с активностью полноразмерного Stu2p. Однако конструкция, лишенная дополнительных 100 аминокислот от аминоконца (N658), обладает только остаточной активностью связывания микротрубочек.Эти результаты локализуют связывающий микротрубочки домен Stu2p в области из 100 аминокислот между аминокислотами 557 и 658.

Чтобы получить более количественные данные о связывании для некоторых из этих конструкций, мы измерили долю полипептида, связанного с микротрубочками в диапазоне концентраций микротрубочек, и рассчитали кажущееся значение K _d , как описано выше для полноразмерного Stu2p (фиг. 9 B). ).Значения K _d для полипептидов C657 и N558 только в 1,6 и 1,4 раза соответственно выше, чем значения K _d для полноразмерного белка, подтверждая, что 231 карбоксиконцевая и 557 амино-концевая аминокислоты не вносят значительного вклада в аффинность связывания микротрубочек Stu2p. Однако значения K _d для полипептидов C557 и N658 в ~ 30 раз и> 50 раз выше, чем у полноразмерного белка.

Связывающий домен 558–657 является очень основным с предсказанной изоэлектрической точкой 10.7 и богат серином (18%), треонином (8%), пролином (7%) и основными аминокислотами (16%). Кроме того, эта область состоит из двух несовершенных повторов, которые мы назвали R1 (558–607) и R2 (612–657) (Fig. 9 A ). Первые 20 аминокислот R1 и R2 идентичны на 40% (области R1a и R2a), а последние 20 аминокислот R1 и R2 идентичны на 40% (области R1b и R2b). Последовательности между областями a и b различаются по длине и не обнаруживают какого-либо аминокислотного сходства. Интересно, что существует один предполагаемый сайт фосфорилирования Cdc28 в каждом из b-повторов.

Мы сообщаем об идентификации Stu2p, дрожжевого белка, связывающего микротрубочки, который расположен в SPB. Оба слитых белка Stu2p-HA ₃ и -GFP локализуются в основном в SPB в вегетативных клетках на всех стадиях клеточного цикла и в меньшей степени по длине микротрубочек. Мы считаем, что эти гибридные белки имитируют подлинный Stu2p, потому что оба спасают нулевую мутацию stu2 .Локализация SPB не зависит от присутствия обнаруживаемых микротрубочек, это указывает на то, что Stu2p является неотъемлемым компонентом SPB и должен связывать по крайней мере один др. Компонент SPB. В этом эксперименте есть предостережение о том, что небольшое количество полимера, не обнаруживаемого иммунофлуоресценцией, может оставаться рядом с SPB после обработки клеток нокодазолом.

Как генетические, так и биохимические данные указывают на то, что Stu2p взаимодействует непосредственно с микротрубочками.Аллели STU2 были идентифицированы как супрессоры tub2-423 , чувствительной к холоду мутации в гене β-тубулина дрожжей. Таким образом, аллели stu2 ^sup компенсируют дефект микротрубочек, вызванный мутацией tub2-423 . Простейшее объяснение этого результата состоит в том, что мутация tub2-423 ставит под угрозу способность Stu2p связываться с микротрубочками, и эта ситуация исправляется соответствующими изменениями в Stu2p.Эта гипотеза подтверждается наблюдением, что супрессия специфична для аллелей; только одна из 16 других протестированных мутаций tub2 могла быть подавлена ​​одним из аллелей stu2 ^sup . Кроме того, аллели stu2 ^sup являются доминантными супрессорами, как и ожидалось для такого реципрокного взаимодействия. Наконец, синтетическая летальность, наблюдаемая между stu2-1 и tub2-404 , также указывает на то, что продукты этих генов взаимодействуют.

В соответствии с нашими генетическими данными мы показали, что Stu2p связывает микротрубочки in vitro. Мы выполнили эти анализы с использованием микротрубочек головного мозга крупного рогатого скота, поскольку дрожжевые микротрубочки трудно получить в больших количествах и не могут быть стабилизированы таксолом (Barnes et al., 1992). Дрожжевые и бычьи тубулины имеют> 70% идентичности и, как было показано, связывают один и тот же профиль белков из дрожжевых экстрактов (Barnes et al., 1992). Следовательно, мы предполагаем, что связывающие свойства Stu2p с микротрубочками головного мозга быка отражают связывающие свойства Stu2p с дрожжевыми микротрубочками. Stu2p связывается с микротрубочками с кажущимся K _d 0,54 мкМ тубулина. Это значение примерно в три раза больше, чем полученное для нейронального белка, связанного с микротрубочками, тау, с использованием того же анализа (Goode and Feinstein, 1994). Таким образом, сродство Stu2p к микротрубочкам находится в пределах диапазона, ожидаемого для истинного белка, ассоциированного с микротрубочками.

Анализы связывания in vitro с использованием усечения Stu2p определили участок из 100 аминокислот, который необходим для связывания микротрубочек. Эта область не имеет какого-либо значительного сходства последовательностей с родственными доменами связывания микротрубочек тау, MAP2 и MAP4 (Lee et al., 1988; Lewis et al., 1988; Chapin and Bulinski, 1991) или неродственными связывающими микротрубочки домен MAP1B (Noble et al., 1989). Однако, как и эти домены, он заряжен положительно и содержит повторяющиеся элементы.Выравнивание последовательностей Stu2p и его гомолога S. pombe p93 ^dis1 показывает, что область связывания микротрубочек Stu2p соответствует области p93 ^dis1 , которая хорошо укладывается в указанный домен связывания микротрубочек (Nakaseko et al. , 1996). Однако участки связывания микротрубочек этих белков не обнаруживают большего сходства последовательностей, чем остальные белки, а домен связывания микротрубочек p93 ^dis1 не содержит повторяющихся элементов.Тот факт, что область связывания микротрубочек Stu2p является высокоосновной, а карбоксиконцевая часть тубулинов является кислой, указывает на то, что Stu2p может взаимодействовать с микротрубочками посредством электростатических взаимодействий. Эта модель подтверждается открытием, что связывание Stu2p с микротрубочками, подобно тому, как это связано с др. Ассоциированными с микротрубочками белками (Vallee, 1986), чувствительно к соли. Аминокислотные замены в stu2-1 и stu2-2 не лежат в пределах домена связывания микротрубочек Stu2p, как можно было бы ожидать.Однако эти остатки очень близки к домену связывания микротрубочек и могут играть роль в изменении конформации Stu2p, позволяя ему более эффективно взаимодействовать с микротрубочками tub2-423 .

Область связывания микротрубочек Stu2p имеет два несовершенных двудольных повтора. Усечения Stu2p, лишенные какого-либо повтора, связывают микротрубочки примерно с пятикратным снижением аффинности, что указывает на то, что каждый повтор способен независимо связывать микротрубочки.Это указывает на то, что Stu2p может связываться с двумя соседними субъединицами тубулина в микротрубочках. Существует один потенциальный сайт фосфорилирования для киназы Cdc28 в каждом повторе, что позволяет предположить, что Stu2p может фосфорилироваться зависимым от клеточного цикла способом. Известно, что фосфорилирование тау снижает его активность связывания микротрубочек in vitro (Biernat et al., 1993; Bramblett et al., 1993). По аналогии, фосфорилирование Stu2p может регулировать его способность связывать микротрубочки.

В дополнение к Stu2p, было показано, что три других белка со способностью связывать микротрубочки расположены в SPB.Два из них, кинезин-родственный белок Kar3p (Meluh and Rose, 1990; Page et al., 1994; Saunders et al., 1997) и белок тяжелой цепи динеина Dhc1p (Yeh et al., 1995), являются двигателями микротрубочек. . Ассоциация Dhc1p с SPB зависит от присутствия микротрубочек; неизвестно, зависит ли локализация Kar3p в SPB от микротрубочек. Третий — это S. cerevisiae γ-тубулин Tub4p (Sobel and Snyder, 1995; Marschall et al., 1996; Spang et al., 1996). Подобно Stu2p, локализация Tub4p в SPB не зависит от присутствия микротрубочек.Однако, в отличие от Stu2p, γ-tubulin от человека и Xenopus , как было показано, специфически связывается с минус-концами микротрубочек (Li and Joshi, 1995; Zheng et al., 1995). Таким образом, Stu2p может быть уникальным как неотъемлемый компонент SPB, который латерально ассоциирует с микротрубочками.

Одна потенциальная роль Stu2p заключается в прикреплении микротрубочек к SPB. Минус-концы микротрубочек в клетках животных, как было показано, обменивают субъединицы тубулина во время процесса потока микротрубочек, направленного к полюсу (Mitchison, 1989; Sawin and Mitchison, 1991).Поскольку Stu2p латерально связывается с микротрубочками, он может поддерживать прикрепление микротрубочек к полюсу даже во время обмена субъединицами на концах. Кроме того, Stu2p может участвовать в организации концов микротрубочек в SPB. У нас есть доказательства с помощью двухгибридной системы, что Stu2p может димеризоваться (Chen, P.X. и T.C. Huffaker, неопубликованные наблюдения), что может позволить ему сшивать микротрубочки. Т.о., Stu2p может связывать микротрубочки рядом с SPB, чтобы помочь генерировать параллельный массив микротрубочек, наблюдаемый в веретенах дрожжей.Наконец, Stu2p может влиять на динамику микротрубочек посредством связывания около минус-концов. Эти роли для Stu2p не исключают друг друга, и Stu2p может действовать как структурный и регуляторный компонент митотического веретена дрожжей.

Гомологи Stu2p обнаружены у множества организмов, что указывает на то, что Stu2p имеет эволюционно законсервированные функции. Помимо S. pombe p93 ^dis1 (Nabeshima et al., 1995), C. elegans, ZYG-9 (Matthews, 1997) и человеческий ch-TOG (Charrasse et al., 1995), белок Xenopus XMAP215 (Gard and Kirschner, 1987) также кажется член этой семьи. Частичное секвенирование XMAP215 показывает, что он похож на ch-TOG (Charrasse, S., M. Schroeder, C. Gauthier-Rouviere, L. Cassimeris, DL Garrd, and C. Larroque. 1996. Mol. Biol. Cell. 7: 222a). Подобно Stu2p, p93 ^dis1 (Nabeshima et al., 1995), ZYG-9 (Matthews, 1997), ch-TOG (Charrasse, S., М. Шредер, К. Готье-Рувьер, Л. Кассимерис, Д.Л. Гаррд и К. Ларрок. 1996. Mol. Биол. Клетка. 7: 222a) и XMAP215 (Gard et al., 1995) локализуются на полюсах веретена и вдоль микротрубочек веретена во время митоза. Однако во время интерфазы p93 ^dis1 локализуется вдоль цитоплазматических микротрубочек, а ch-TOG колокализуется с маркерами эндоплазматического ретикулума. p93 ^dis1 (Nakaseko et al., 1996), ch-TOG (Charrasse, S., M. Schroeder, C. Gauthier-Rouviere, L. Cassimeris, D.Л. Гаррд и К. Ларрок. 1996. Mol. Биол. Ячейка . 7: 222a) и XMAP215 (Gard and Kirschner, 1987) все способны связывать микротрубочки in vitro, и было показано, что XMAP215 способствует сборке и обновлению микротрубочек (Vasquez et al., 1994). Следовательно, кажется разумным заключить, что белки этого семейства выполняют некоторые перекрывающиеся функции. Дальнейшее изучение этих гомологов должно дать понимание специфических ролей, которые они играют в функции веретена.

% PDF-1.5 % 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj > поток

Ваше имя

EL3

конечный поток эндобдж 3 0 obj > / PageMode / UseNone / Metadata 2 0 R >> эндобдж 4 0 obj > эндобдж 6 0 obj > / XObject> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageB / ImageC / ImageI] >> / MediaBox [0 0 595.HHA1u @ bQ9ƿhBB5Ϙ]} R \ Mdja {j + fe4GX @: RJoI`% d ف mg {KD 鋮], fswhx t3rs5] c-BR «yQU) R + Cg1tewOIv1Od} K [» N >, 74 $ qTd +] uІU

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

.