128 ст нк рф: НК РФ Статья 128. Ответственность свидетеля / КонсультантПлюс

Содержание

Статья 128 НК РФ 2016-2019. Ответственность свидетеля. ЮрИнспекция

В соответствии c пунктом 1 статьи 689 Гражданского кодекса по договору безвозмездного пользования (договору ссуды) одна сторона (ссудодатель) обязуется передать или передает вещь в безвозмездное временное пользование другой стороне (ссудополучателю) , а последняя обязуется вернуть ту же вещь в том состоянии, в каком она ее получила, c учетом нормального износа или в состоянии, обусловленном договором. Таким образом, договор безвозмездного пользования по сути близок к договору аренды. Поэтому к подобным договорам применяются отдельные правила, установленные для арендных отношений. Основное отличие договора ссуды от договора аренды — его безвозмездность, ведь договор аренды предусматривает предоставление вещи во временное пользование и владение за плату. В пункте 8 статьи 250 Налогового кодекса указано следующее. При безвозмездном получении имущества (работ, услуг) или имущественных прав (включая право пользования имуществом) , за исключением случаев, указанных в статье 251 НК РФ, у организации-получателя возникает внереализационный доход, который необходимо учитывать при формировании налоговой базы по налогу на прибыль согласно статьям 247 и 248 НК РФ. Если имущество получено от учредителей. Согласно пункту 2 статьи 38 НК РФ (в отличие от статьи 128 ГК РФ) имущественные права не относятся к имуществу. Поэтому льгота, предусмотренная подпунктом 1 пункта 1 статьи 251 НК РФ, не распространяется на доходы в виде полученных имущественных прав. Напомним, что на основании указанной нормы главы 25 НК РФ не учитываются в целях налогообложения прибыли доходы в виде имущества, полученного российской организацией безвозмездно от организации: если уставный (складочный) капитал (фонд) получающей стороны более чем на 50% состоит из вклада (доли) передающей организации; уставный (складочный) капитал (фонд) передающей стороны более чем на 50% состоит из вклада (доли) получающей организации. Следовательно, организации, получившие в безвозмездное пользование имущество от своих учредителей (акционеров) , независимо от размера их доли в уставном капитале должны включить в состав внереализационных доходов доход в виде безвозмездно полученного права пользования имуществом, определяемый исходя из рыночных цен на аренду идентичного имущества. При получении имущества (работ, услуг) безвозмездно оценка доходов осуществляется исходя из рыночных цен, определяемых c учетом положений статьи 40 НК РФ, но не ниже определяемой в соответствии c главой 25 НК РФ остаточной стоимости — по амортизируемому имуществу и не ниже затрат на производство (приобретение) — по иному имуществу (выполненным работам, оказанным услугам) . Информация о ценах должна быть подтверждена налогоплательщиком — получателем имущества (работ, услуг) документально или путем проведения независимой оценки. Таким образом, налогоплательщик, получивший по договору в безвозмездное пользование имущество, отражает в налоговом учете внереализационный доход в виде безвозмездно полученного права пользования имуществом, величина которого определяется исходя из рыночных цен на аренду идентичного имущества. Правомерность применения положений статьи 40 НК РФ к имущественным правам также подтверждается указанной выше судебной практикой.

Статья 128 Налогового кодекса РФ: какие могут быть последствия?

Налоговая служба обладает многими компетенциями. Одна из них – вызывать лиц, имеющих возможность предоставить полезную информацию. Свидетель является важной фигурой в деле, он может подтвердить либо опровергнуть какой-то факт. Это справедливо по отношению к статье 128 Налогового кодекса РФ первой части.

Что важно знать об ответственности свидетеля за неявку по НК РФ

Налоговая имеет право приглашать свидетелей при изучении дела. Делается это для того, чтобы узнать нарушителя и получить информацию о его связях.

Налоговая может привлечь партнёров по бизнесу, контрагентов организации и других лиц, которые непосредственно связаны друг с другом и имеют полезные сведения. ИФНС может официально пригласить для дачи показаний с помощью направления повестки.

Если лицо не получило какие-либо бумаги, тогда оно не обязано посещать налоговую службу. Это не повлечёт за собой наказание.

При доставке повестки по адресу лица налоговое законодательство устанавливает ответственность лицу, которое отказалось прийти и проигнорировало данное требование. Существует 2 типа документов, направляемых инспекторами, они определят цель этого требования.

При отправке повестки только для проведения допроса, тогда данная бумага устанавливает необходимость посетить для ответов на поставленных вопросов.

Все остальные методы приглашения не обладают юридической силой. Например, при вызове от ИФНС по телефону без применения приказа ФНС ММ-33/06 лицо может проигнорировать такое приглашение. Это справедливо по отношению к форме записи показаний.

Внимание! Если показания не оформлены в соответствии с правилами, данное свидетельствование не обладает юридической силой. Оно не может использоваться в деле в роли доказательственной базы.

Подобных требований и писем можно не бояться, поскольку чаще всего вопросы в них относятся к НДС либо прочим недоразумениям.

Требования законодательства

Налоговый кодекс РФ в статье 90 части 1 определяет компетенцию для вызова лиц по сомнительным делам. Это могут быть руководители, контрагенты, работники организаций и бухгалтера. Все они должны иметь связь с подозреваемым лицом.

Статье определяет, что право предоставляется по вызову любого физического лица, имеющего возможность выступать в качестве свидетеля. Статья 90 в пункте 2 перечисляет группы граждан, имеющих право не давать показания по требованиям. К ним принадлежат адвокаты, сотрудники, которые подписали соглашение о несении коммерческой тайны, и т.п.

Действующее законодательство предусматривает отказ от показаний лишь в том случае, если это не противоречит российскому законодательству.

Налоговые органы не имеют права вызывать на допрос детей, людей, чьё психическое состояние является неадекватным, а также несовершеннолетних лиц.

Статья 128 Налогового кодекса РФ часть 1 определяет ответственность допрашиваемого за предоставление ложных показаний, а также за неявку либо отказ давать свидетельство.

Внимание! Законодательство определяет 2 ситуации, в которых лицо может быть привлечено к штрафу – уклонение либо неявка по требованию налоговой инспекции.

Статья 128 Налогового кодекса РФ в 2020 году устанавливает увеличенный штраф для лиц, неправомерно отказавших в помощи по требованию налогового органа либо давших ложные сведения.

В Налоговом кодексе РФ в статье 51 регламентируются права лиц, которые вызваны для свидетельствования, не давать сведений против себя, собственных друзей и родных людей. Данные причины могут считаться уважительными и задействоваться для отказа в требованиях.

Для чего вызывать свидетеля в налоговую

Повестка может быть отправлена для прояснения различных вопросов, поэтому при её получении не нужно нервничать. Чаще всего это связано с тем, что имеются определённые сомнения в отношении контрагента, партнёра по бизнесу, поставщика либо других лиц. Инспектор приглашает свидетеля, чтобы получить информацию, которая ему не известна.

Вызов в налоговую может быть связан со стандартной проверкой сведений, отражением отчётов и сопоставлением деятельности и финансовых показателей организации.

Важно! Свидетель должен точно и честно отвечать на вопросы. Если его слова будут поняты неправильно, тогда может быть выписан штраф за ложные показания.

В случае посещения налоговой по требованию стоит быть готовым отвечать на различные вопросы в отношении своей деятельности либо тех, с кем лицо сотрудничает.

Налоговая имеет право попросить представить данные о какой-то организации, указать её счета, данные, а свидетель должен их предоставить. Исключением выступают случаи, когда есть весомая причина отказаться со ссылкой на определённый закон РФ.

Какие вопросы чаще всего задают свидетелю при вызове в налоговую

  • Как и в течение какого срока лицо сотрудничало с подозреваемым?
  • Как с ним познакомились?
  • Кто привлекался при подписании контрактов либо соглашений?
  • Как проходило сотрудничество?
  • Какие услуги были предоставлены?
  • Реквизиты, контакты и адрес подозреваемого?
  • Это лишь часто встречающиеся вопросы. Существуют и другие. Поэтому подготовиться ко всему не получится.

    Особенности привлечения лиц

    ФНС занимается контролем налогов, служба обязана постоянно удостоверяться в правильности и достоверности поданных отчётов. Особое внимание уделяется изучению документов с несоответствием либо вызывающим подозрения.

    Внимание! Законодательство предоставляет право вызывать всех полезных для дачи дополнительных сведений лиц.

    Главным образом, вызывают соседние организации, которые ведут свою деятельность неподалёку, поскольку соседи чаще всего хорошо знакомы.

    В некоторых случаях, чтобы убедить либо подтвердить информацию в допросе могут принимать участие сотрудники подозреваемого, поскольку они ежедневно имеют дело со сведениями и многое знают. Исключением являются ситуации, когда они подписали соглашение о неразглашении тайны.

    Для вызова для дачи показаний направляется официальная повестка. Если её просто положили в почтовый ящик, в таком случае лицо может полностью проигнорировать документ. Он должен быть вручён непосредственно в руки.

    Повестка должна иметь определённую форму и отвечать установленным требованиям. При явке на освидетельствование важно быть абсолютно честным и давать чёткие ответы на задаваемые вопросы. В конце допрашиваемый читает собственные показания, если ничего не напутано и он со всем согласен, тогда нужно их подписать. Форма протокола должна соответствовать действующему законодательству.

    Внимание! Сведения передаются на бумагу со слов, не должно быть искажений и преувеличений. Если в процессе принимает участие несколько лиц, тогда это должно быть отмечено в документе.

    Бизнес-портал investtalk.ru предоставляет много полезной информации о налогообложении. Например, на странице https://investtalk.ru/nalogi/spisok-mashin-nalog-na-roskosh-2019 можно прочитать о том, для каких автомобилей действует налог на роскошь. А здесь идёт речь о том, как рассчитывается транспортный налог. Уверены, эта и другая информация поможет лучше разобраться в российском законодательстве.

    Другие статьи на нашем сайте

    В НК предлагается конкретизировать видовую принадлежность безналичных денежных средств и бездокументарных ценных бумаг

    В комментарии «АГ» один из экспертов отметил, что при отсутствии рассматриваемых поправок операции с безналичными денежными средствами и бездокументарными ценными бумагами нельзя было бы рассматривать как операции с имуществом в целях налогообложения, поскольку ст. 38 НК РФ исключает из состава имущества имущественные права. Второй назвал логичным придание изменениям обратную силу с 1 октября 2019 г., заметив, что этот аспект законодательной инициативы необходимо внимательно соотнести с правилами ст. 5 НК РФ о действии актов во времени.

    1 апреля Госдума приняла в первом чтении законопроект № 903584-7, которым предлагается внести изменения в п. 2 ст. 38 «Объект налогообложения» Налогового кодекса и указать, что если иное не предусмотрено настоящим пунктом, под имуществом в НК понимаются виды объектов гражданских прав, относящихся к имуществу в соответствии с ГК РФ. Для целей настоящего Кодекса не признаются имуществом имущественные права, за исключением безналичных денежных средств и бездокументарных ценных бумаг.

    В пояснительной записке указывается, что необходимость внесения законопроекта возникла в связи с принятием Закона о внесении изменений в ч. 1, 2 и ст. 1124 ч. 3 Гражданского кодекса в части изменения видовой принадлежности таких объектов гражданских прав, как безналичные денежные средства и бездокументарные ценные бумаги.

    Читайте также

    В российском гражданском законодательстве закреплено понятие «цифровые права»

    Подписанный президентом закон о внесении соответствующих изменений в ГК вступит в силу с 1 октября

    19 Марта 2019

    Так, в ст. 128 ГК указывается, что к объектам гражданских прав относятся вещи (включая наличные деньги и документарные ценные бумаги), иное имущество, в том числе имущественные права (включая безналичные денежные средства, бездокументарные ценные бумаги, цифровые права).

    Авторы законопроекта посчитали, что налоговые последствия операций с денежными средствами не могут зависеть от их формы (наличные или безналичные). По их мнению, налоговые последствия операций с ценными бумагами тоже должны быть одинаковые вне зависимости от того, имеют они документарную форму или нет. В связи с этим они предлагают сохранить действующие правила налогообложения таких операций.

    Кроме того, отмечается в пояснительной записке, налогообложение операций с имущественными правами имеет некоторые особенности по сравнению с налогообложением операций с имуществом, поэтому «автоматическое» (без внесения изменений в Налоговый кодекс) признание безналичных денежных средств и бездокументарных ценных бумаг имущественными правами и непризнание их имуществом для целей налогообложения приведут к путанице, новым вопросам и необоснованным спорам в правоприменении.

    Изменениям в п. 2 ст. 38 НК РФ предлагается придать обратную силу с 1 октября 2019 г., т.е. со дня вступления в силу новой редакции ст. 128 ГК.

    В комментарии «АГ» юрист компании «Центр правовых стратегий “Лексфорт”», UBL Group Марина Момзикова отметила, что пояснительная записка к законопроекту содержит верный посыл: на данный момент налогообложение операций с одними и теми же, по сути, объектами (денежными средствами и ценными бумагами) зависит от формы их выражения (существования), что недопустимо. Она указала, что на практике уже появились вопросы в части необходимости уплаты НДС при реализации бездокументарных ценных бумаг и безналичных денежных средств.

    «Отрадно, что законопроект сохраняет положение вещей без громоздких изменений в Кодекс, – поправки в ст. 38 НК РФ лаконичны и конкретны. Придать изменениям обратную силу весьма логично – сохранятся единые правила налогообложения с 1 октября 2019 г.», – подчеркнула Марина Момзикова. Однако, заметила она, этот аспект законодательной инициативы необходимо внимательно соотнести с правилами ст. 5 НК РФ о действии актов во времени.

    Адвокат, руководитель налоговой практики Адвокатского бюро «Инфралекс» Иван Шиенок отметил, что при отсутствии рассматриваемых поправок операции с безналичными денежными средствами и бездокументарными ценными бумагами нельзя было бы рассматривать как операции с имуществом в целях налогообложения, поскольку ст. 38 НК РФ исключает из состава имущества имущественные права. «По этой причине законодатель, считая целесообразным продолжать рассматривать данные объекты гражданских прав как имущество в целях налогообложения, вносит в ст. 38 НК РФ изменения, исключающие безналичные денежные средства и бездокументарные ценные бумаги из состава имущественных прав. Таким образом, в целях НК РФ они будут продолжать рассматриваться как имущество и облагаться в прежнем порядке», – указал адвокат.

    Обжалование решений налоговых инспекций. Практика применения обязательной досудебной процедуры

    Обжалование по желанию компании в административном порядке решения налогового органа о привлечении либо об отказе в привлечении к ответственности за совершение налогового правонарушения с 2009 года стала обязательной процедурой досудебного урегулирования споров (п. 5 ст. 101.2 НК РФ). Обращение компании в суд за защитой своих прав без соблюдения такого порядка  служит основанием для оставления заявления без движения (ч. 1 ст. 128 АПК РФ), а в случае, если это обстоятельство будет установлено после принятия заявления к производству - для оставления его без рассмотрения (ч. 2 ст. 148 АПК РФ).

    В настоящей статье мы разберем основные вопросы практического применения п. 5 ст. 101.2 НК РФ.

    Досудебное обжалование обязательно не для всех решений

    Обязательному досудебному порядку обжалования подлежат не все ненормативные акты налоговых органов. Такой порядок распространяется только на два вида решений, а именно – решение о привлечении либо об отказе в привлечении к ответственности за совершение налогового правонарушения. Специалисты сходятся во мнении, что досудебной процедуре обжалования подлежат только такие решения, в которых отражены нарушения, установленные статьями 120, 122, 123 НК РФ[1].

    Поскольку выявление предусмотренных указанными статьями нарушений возможно в ходе налоговых проверок, то можно заключить, что рассматриваемый порядок применятся только к решениям о привлечении или об отказе в привлечении к ответственности, выносимым по результатам проверок. О правомерность данного вывода также свидетельствуют взаимосвязь положений п.9 ст. 101 и п. 2 ст. 101.2 НК РФ об апелляционном порядке обжалования актов налоговых органов.

    Следует отметить, что нарушения налогового законодательства могут быть выявлены налоговым органом и зафиксированы в соответствующем решении также вне рамок проверок. Такие нарушения не связаны с правильностью исчисления налоговой базы и уплаты налогов, но препятствуют осуществлению налогового контроля. Например, нарушение установленных сроков для представления сведений об открытии и закрытии банковского счета или неподача декларации (ст. 118, 119 НК РФ соответственно). По решениям о таких нарушениях апелляционный порядок обжалования не установлен и применяется иной специальный порядок производства (ст. 101.4 НК РФ)

    Таким образом, по-прежнему без предварительного административного обжалования компания может обращаться в суд за защитой своих прав, нарушенных следующими ненормативными актами налоговых органов:

    • решением о привлечении к ответственности по ст.ст. 116-119, 124-129, 129.1, 129.2 НК РФ;
    • решением об отказе в возмещении НДС;
    • решением об отказе в зачете или возврате излишне уплаченного (взысканного) налога;
    • решением о наложении ареста на имущество налогоплательщика;
    • решением о взыскании налога, пеней и штрафа за счет денежных средств на счетах в банке, а также за счет имущества налогоплательщика;
    • решением о приостановлении операций по банковским счетам.
       
    Варианты обжалования решений

    Существует две возможности административного обжалования решений: в порядке апелляционного производства или в общем порядке. Применение того или иного варианта зависит от того, вступило решение в законную силу или нет. При этом будут различаться процедура и последствия обжалования.

    Решение, принятое по результатам проверки вступает в законную силу по истечении 10 рабочих дней со дня его вручения компании (п. 9 ст. 101, п.6 ст. 6.1 НК РФ). В течение указанного периода времени решение считается невступившим в силу и может быть обжаловано в апелляционном порядке (п. 2 ст. 101.2, п. 2 ст. 139 НК РФ).

    Жалоба на вступившее в законную силу решение, которое не было обжаловано в апелляционном порядке, может быть подана в течение одного года с момента вынесения обжалуемого решения (п. 2 ст. 139 НК РФ).

    Преимущества обжалования невступивших в силу решений (апелляционное обжалование)

    При подаче апелляционной жалобы вступление в силу обжалованного решения откладывается  до дня принятия вышестоящим налоговым органом решения по жалобе (п.9 ст. 101, п.2 ст. 101.2 НК РФ).  По общему правилу такое решение принимается в течение месяца со дня подачи жалобы, но указный срок может быть продлен не более чем на 15 дней (п. 3 ст. 140 НК РФ). Такая отсрочка вступления решения в силу означает отсрочку возможного принудительного взыскания доначисленых сумм.

    Дело в том, что решение подлежит исполнению со дня вступления в силу (пп.1ст. 101.3 НК РФ). Это означает, что в течение 10 дней с этой даты налоговый орган обязан направить компании требование об уплате налога, пеней, а также штрафов в случае привлечения компании к ответственности за налоговое правонарушение (п. 3 ст. 101.3, п. 2 ст. 70 НК РФ). В этом требовании компании будет предложено уплатить в добровольном порядке доначисленные решением суммы, при этом уплата должна быть произведена в течение 10 календарных дней с даты получения требования, если в нем не указан более продолжительный период времени для уплаты (п.4 ст. 69 НК РФ). В случае неуплаты денежных средств в установленный срок, налоговый орган инициирует процедуру принудительного взыскания доначислений (ст. 46 НК РФ).

    Таким образом, можно сказать, что апелляционное обжалование переносит момент необходимости уплаты денежных средств или их возможного списания с банковского счета компании как минимум на месяц. К тому же у компании появляется достаточно времени для подготовки качественного заявления в суд.

    Процедура обжалования

    Апелляционная жалоба в вышестоящий налоговый орган подается через налоговый орган, решение которого обжалуется (п. 3 ст.139 НК РФ). Жалобы, направленные непосредственно в вышестоящий налоговый орган, как показывает практика, возвращаются налогоплательщику без рассмотрения. В результате такой «технической» ошибки компания может пропустить срок для апелляционного обжалования, и решение вступит в силу.

    В отличие от процедуры рассмотрения результатов налоговой проверки, налоговым законодательством не предусмотрено участие представителей компании при рассмотрении доводов жалобы. В связи с таким процедурным отстранением компании можно сказать, что рассмотрение жалобы носит формальный заочный характер. Об итогах рассмотрения жалобы компанию письменно уведомят (п. 3 ст. 140 НК РФ).

    Итоги апелляционного обжалования

    По итогам рассмотрения апелляционной жалобы вышестоящий налоговый орган вправе (1) оставить решение без изменения, а жалобу без удовлетворения, (2) отменить или изменить решение полностью или в части и принять по делу новое решение, (3) отменить решение и прекратить производство по делу (п. 2 ст. 140 НК РФ). Принятие любого из  указанных вариантов решения свидетельствует о завершении процедуры административного обжалования решения, вынесенного по результатам налоговой проверки.

    Иначе говоря, принятие по результатам рассмотрения жалобы вышестоящим налоговым органом нового решения, не является обстоятельством, препятствующим обращению компании в суд. Это связано с тем, что такое решение выносится не по результатам налоговой проверки, а в связи с рассмотрением жалобы на решение, вынесенное нижестоящим налоговым органом. Конечно, при желании компания может обжаловать это новое решение в следующий вышестоящий налоговый орган, однако такое обжалование уже не является условием для обращения в суд.

    Исчисление срока для обращения в суд

    Процессуальный трехмесячный срок на подачу заявления в суд, установленный п. 4 ст. 198 АПК РФ,  исчисляется с учетом положений п. 5 ст. 101.2 НК РФ[2], то есть срок для обращения в суд исчисляется со дня, когда лицу, в отношении которого вынесено это решение, стало известно о вступлении его в силу.

    При апелляционном обжаловании решение вступает в силу в день принятия вышестоящим налоговым органом решения по жалобе. При этом такое решение по общему правилу должно быть вынесено в течение месяца  (п.9 ст. 101, п.2 ст. 101.2, п. 3 ст. 140 НК РФ).

    В случае, если в нарушение ст. 140 НК РФ вышестоящий налоговый орган не даст письменный ответ на жалобу в течение месяца, то трехмесячный срок, предусмотренный п. 4 ст. 198 АПК РФ должен исчисляться с момента истечения срока для рассмотрения жалобы вышестоящим налоговым органом.

    О таком порядке соотношения норм и исчислении сроков, установленных налоговым и арбитражно-процессуальным законодательством, компании были сориентированы Постановлением Президиума ВАС РФ от 20.11.2007 N 8815/07 по делу № А41-К2-19605/06, выводы которого были дополнены Определением ВАС от 30.01.2009 № ВАС-15592/08 по делу № А27-3697/2008-2. При этом суд отметил, что нормы Арбитражного процессуального кодекса РФ, устанавливающие срок для обращения в суд за защитой нарушенного права не должны рассматриваться как препятствующие реализации права на использование внесудебных процедур разрешения налоговых споров, которые являются предпочтительными в налоговых правоотношениях с точки зрения оперативности защиты нарушенных прав налогоплательщиков.

    Учитывая правовое толкование норм высшим судебным органом, представляется, что в случае нарушения вышестоящим налоговым органом установленного месячного срока на вынесение решения у компании возникают объективные риски, связанные с пропуском срока на судебное обжалование.

    С другой стороны, если компания посчитает целесообразным все-таки дождаться решения по жалобе и пропустит срок на подачу заявления в суд[3], то она сможет обратиться в суд с ходатайством о восстановлении пропущенного срока на обжалование ненормативного акта государственного органа (ст. 117 АПК РФ). Суды, признавая принятие мер для урегулирования спора в административном порядке уважительной причиной пропуска срока, такие ходатайства удовлетворяют[4]. Учитывая практику федеральных арбитражных судов, а также правовую позицию, выраженную высшим судебным органом, в настоящее время нет оснований полагать, что в случае обращения в суд при пропуске срока компании будет отказано в судебной защите.

    Обжалование вступивших в силу решений

    Вступившее в силу решение может быть обжаловано в течение года с момента его вынесения путем подачи жалобы в вышестоящий налоговый орган (п. 3 ст. 101.2, п.2 ст. 139 НК РФ).

    В случае обжалования вступившего в силу решения процедура взыскания автоматически приостанавливаться не будет, но положения п. 4 ст. 101.2 НК РФ предусматривают право вышестоящего налогового органа удовлетворить ходатайство компании о приостановлении обжалуемого решения. В настоящее время отсутствует практика обращения компаний с подобными ходатайствами, не налажено взаимодействие налогоплательщика и налогового органа, повышающее вероятность положительного для компании разрешения вопроса, в связи с чем риск принудительного списания спорных средств с банковских счетов налогоплательщика является высоким.

    Исчисление срока для обращения в суд

    В случае распространения логики исчисления сроков на судебное обращение, примененной в случае апелляционного обжалования, на случай обжалования решения в общем порядке, получалось бы, что трехмесячный срок на подачу заявления в суд начинает исчисляться по истечении месяца со дня подачи жалобы, которая в свою очередь может быть подана в течение одного года с даты вынесения обжалуемого решения.

    Однако, данный приём противоречит положениям Налогового кодекса РФ. В связи с чем компании необходимо внимательно отнестись к правилам исчисления сроков для обращения в суд при обжаловании решения в общем порядке, чтобы, в случае необходимости, не лишиться права на судебную защиту.

    Как было отмечено выше, процессуальный срок на обращение в суд применяется с учетом положений налогового законодательства, а именно п. 5 ст. 101.2 НК РФ, предусматривающих, что в случае обжалования решений в судебном порядке срок для обращения в суд исчисляется со дня, когда лицу, в отношении которого вынесено это решение, стало известно о вступлении его в силу. 

    Если решение не было обжаловано в апелляционном порядке в вышестоящий орган, то оно вступает в силу на следующий день после истечения десятидневного срока на подачу апелляционной жалобы (п. 9 ст. 101 НК РФ). Следовательно, для сохранения права на судебную защиту и одновременного соблюдения обязательной досудебной процедуры обжалования решения, установленного п. 5 ст. 101.2 НК РФ, компании следует подать жалобу в вышестоящий налоговый орган не позднее полутора месяцев со дня вступления решения в силу.

    Таким образом, если налогоплательщик ожидает отрицательного результата по рассмотрению жалобы и планирует защищать свои права в суде, то реальный срок на подачу жалобы в вышестоящий налоговый орган существенно сокращается.

    Представляется, что противоречие между установленным в законе годичным сроком на административное обжалование (п.2 ст. 139 НК РФ) и его существенным сокращением с целью сохранения права на судебную защиту до полутора месяцев (п. 5 ст. 101.2 НК РФ) является «технической» недоработкой законодателя.

    Коллизия порядка исчисления сроков на судебное обращение, по нашему мнению, будет преодолеваться путем обращения компаний в арбитражные суды с просьбой о восстановлении пропущенного срока на обжалование ненормативного акта государственного органа по уважительной причине.

    Обозначенные в настоящей статье спорные вопросы практического применения п. 5 ст. 101.2 НК РФ[5] в настоящее время стали дискуссионными, в связи с чем, можно полагать, в ближайшее время они найдут свое разрешение в виде разъяснений компетентных органов.

    Куда подавать жалобу

    Согласно п. 1 ст.139 НК РФ жалобу на решение о привлечении либо об отказе в привлечении к ответственности нужно подавать в вышестоящий налоговый орган.

    Структура налоговых органов разделена на три уровня: территориальные инспекции, управления ФНС РФ по субъектам Российской Федерации и центральный аппарат ФНС РФ (приложение № 1 к приказу Минфина России от 09.08.05 № 101н).

    К территориальным инспекциям относятся инспекции по району, району в городе, городу без районного деления, а также межрайонные инспекции. Их решения нужно обжаловать в управление ФНС РФ соответствующего субъекта Российской Федерации (области, края, республики, города Москвы или Санкт-Петербурга).

    Если решение принято управлением ФНС РФ по субъекту Российской Федерации, то жалобу надо подавать непосредственно в ФНС РФ.

    Крупнейшие налогоплательщики состоят на учете в специальных межрегиональных инспекциях. Их решения нужно обжаловать сразу в ФНС РФ (приложение № 2 к приказу Минфина России от 09.08.05 № 101н).

    Повторные проверки проводят также межрегиональные инспекции по федеральным округам. Их решения нужно обжаловать в ФНС РФ (приложение № 4 к приказу Минфина России от 09.08.05 № 101н).

    Что может предпринять инспекция в связи с решением, не вступившим в законную силу

    До вступления в силу решения, принятого по результатам проверки, налоговая инспекция, в качестве обеспечительных мер может вынести постановление о запрете компании распоряжаться определенным имуществом стоимостью не меньше недоимки, пени и штрафа. Если совокупная стоимость имущества компании по данным бухгалтерского учета меньше доначисленных согласно решению сумм, то на сумму разницы инспекция вправе также арестовать банковский счет налогоплательщика (п. 10 ст. 101 НК РФ).

    При аресте счета деньги не списываются с него, как при взыскании, а лишь «замораживаются», то есть компания не может ими распоряжаться.

    Решение об аресте счета, как и о запрете распоряжаться имуществом, можно сразу же оспорить в суде. У налоговиков есть право на такие обеспечительные меры только при достаточных основаниях полагать, что без них  будет трудно или вообще невозможно исполнить обжалуемое решение, принятое по результатам проверки, и (или) взыскать указанные в нем недоимку, пени и штрафы. Налоговики обычно игнорируют эту оговорку и не могут доказать, что у них были основания для подобных предположений. В таких случаях суды отменяют обеспечительные меры (определение ВАС РФ от 26.09.08 № 12266/08, Постановление ФАС ВСО от 20.05.08 № А33-13063/07-Ф02-1987/08, Постановление ДО от 20.01.09  Ф03-6280/2008)

    В чем смысл обжалования решения об отказе в привлечении к ответственности?

    Формулировка «об отказе в привлечении к ответственности» означает лишь то, что инспекция не нашла оснований для штрафа за совершение налогового правонарушения. Таким решением инспекция тоже может доначислить компании налоги и пени.

    В какой форме составляется жалоба в вышестоящий налоговый орган?

    Форма жалобы в вышестоящий налоговый орган законодательно не установлена. В связи с чем она может быть составлена в произвольной форме.

    При подаче жалобы в вышестоящий налоговый орган надо уплачивать госпошлину?

    Нет, плата за административное обжалование решений налогового органа не взимается.

    --------------------------------------------------------------------------------

    [1] Статья 120 «Грубое нарушение правил учета доходов и расходов и объектов налогообложения», ст. 122 «Неуплата или неполная уплата сумм налогов (сборов)», ст. 123 «Невыполнение налоговым агентом обязанности по удержанию и (или) неперечислению налогов» Налогового кодекса РФ.

    [2] Заявление об оспаривании ненормативного акта налогового органа может быть подано в арбитражный суд в течение трех месяцев со дня, когда компании стало известно о нарушении её прав и законных интересов, если иное не установлено федеральным законом. Пропущенный по уважительной причине срок подачи заявления может быть восстановлен судом (п. 4 ст. 198 АПК РФ). Обязательность обжалования решений налоговых органов в административном порядке как условие возможности обращения за судебной защитой установлена в п. 5 ст. 101.2 НК РФ. Указанной нормой права прямо предусмотрено, что в случае обжалования решений налогового органа в судебном порядке срок для обращения в суд исчисляется со дня, когда лицу, в отношении которого вынесено это решение, стало известно о вступлении его в силу.

    [3] Трехмесячный срок на подачу искового заявления начинает исчисляться по истечении месяца со дня подачи апелляционной жалобы. При превышении указанного срока срок на подачу заявления в суд будет считаться пропущенным.

    [4] См. Решение АС г. Москвы от 12.05.2008 по делу №А40-16101/08-118-65, оставленному без изменения Постановлением 9ААС от 21.07.2008 N 09АП-8048/2008-АК,  Постановление ФАС МО от 08.07.2008 № КА-А40/5853-08, Постановление ФАС ЗСО от 24.09.2004 № А56-8471/04.

    [5] Статья В. Стрельникова «Досудебный беспорядок», ЭЖ-Юрист № 14, 2009.

    Что не так с законом «О ЦФА». Все про регулирование криптовалют в России :: РБК.Крипто

    Как власти планируют контролировать майнинг, какие хотят взимать налоги за сделки с биткоином и другие детали нового документа. Подробный разбор федерального закона о цифровых финансовых активах и замечания к нему от юристов

    1 января 2021 года в России вступит в силу закон «О цифровых финансовых активах» (ЦФА). В Госдуме его рассматривали более 2,5 лет, он был принят и подписан президентом Владимиром Путиным летом нынешнего года. Moscow Digital School опубликовала подробный анализ федерального закона.

    Последняя версия закона «О ЦФА» существенно отличается от принятой в первом чтении. Документ был представлен с пакетом актов — проектами трех федеральных законов, касающихся непосредственного регулирования рынка криптовалют, а также уголовной и административной ответственности за нарушения новых правил. Последние акты были направлены на доработку после резко негативной реакции сообщества и бизнеса.

    Пробелы в регулировании

    Юристы Moscow Digital School подчеркнули, что из-за ряда пробелов в регулировании, для многих сторон криптобизнеса ситуация осталась без изменений. Многие термины, используемые криптосообществом, уже были изобретены и успешно используются в мировой практике, однако в законе о ЦФА вместо них применяются свои собственные, которые вводят новые правовые институты и создают неопределенность.

    В отличие от ряда зарубежных стран, в законе нет регулирования для некоторых типов токенов и криптовалют с разным функционалом и сущностью. При этом под определение цифровой валюты в соответствии с документом «О ЦФА» могут подпадать, например, бонусы, а также используемые в электронной коммерции сертификаты. За рамками понятий остались многие виды деятельности, прежде всего, майнинг.

    «Тогда как от Закона о ЦФА ожидали введения единого аппарата и понятийной правовой базы для всего криптовалютного рынка в целом, в результате он стал основой исключительно для цифровизации российских активов, выпуска цифровых дубликатов ценных бумаг по российскому праву — которые сложно выводить на международный рынок», — говорится в отчете.

    В документе присутствуют противоречащие друг другу нормы. Например, согласно определению, данному в законе «О ЦФА», цифровая валюта признается средством платежа и может являться инвестицией. Однако в соответствии со ст.14, российские юридические и физические лица не вправе принимать цифровую валюту в качестве встречного предоставления за передаваемые товары, услуги или в качестве оплаты иным образом. Это противоречит признанию криптовалюты средством платежа и значительно ограничивает ее использование на территории России, а также снижает экономическую целесообразность владения криптовалютой.

    Специалисты уверены, что авторам закона так и не удалось выработать адекватное определение цифровой валюты. В документе говорится: «криптовалюта — это токены, по которым отсутствует обязанная сторона». Такое определение от противного позволяет отнести к криптовалюте большое количество различных электронных записей (аккаунты, электронную валюту и так далее). Поэтому авторы дополнили, что криптовалюта — это не любые записи, а те, что могут быть либо средством платежа, либо инвестирования.

    По новому закону судебная защита прав на цифровую валюту возможна лишь в случае, если она специальным образом декларировалась и с нее выплачивались налоги (п. 6 ст. 14). Неясно, как это будет проверяться — в декларации доходы от продажи цифровой валюты могут указываться совершенно по-разному, а хранение цифровой валюты (без извлечения дохода) никогда не требовалось отдельно декларировать. Вероятно, ФНС или Минфин позднее дадут разъяснения по этому поводу.

    «Также, разумеется, чрезвычайно сомнительна сама идея, что для получения судебной защиты собственник цифровой валюты должен подтверждать выполнение неких публичных обязанностей — почему уплата или неуплата налогов влияет на наличие судебной защиты, то есть, по существу, на само право собственности?», — задаются вопросом в Moscow Digital School.

    Пока в законе «О ЦФА» нет норм, посвященных майнингу. В конце августа Минфином был разослан в профильные ведомства пакет законопроектов о внесении поправок в еще не вступивший в силу документ. В нем косвенно упоминается добыча криптовалюты и написание софта. Однако в том же пункте установлен запрет на получение оплаты за такие действия в цифровой валюте.

    На практике майнеры, как правило, получают вознаграждение именно в виде криптовалюты. Если предлагаемый пакет законопроектов будет принят, российским предпринимателям, занимающимся добычей криптовалюты, придется искать обходные пути, чтобы не попасть под административную и уголовную ответственность, которую также предлагает ввести Минфин, предупредили юристы.

    Биржи и обменники

    Закон о цифровых финансовых активах вводит новый субъект российского крипторынка — операторы обмена цифровых финансовых активов. Они по сути являются криптобиржами, но только для обмена токенов, которые признаются по российскому законодательству цифровыми правами. На сегодняшний день такими специальными законами являются ФЗ об инвестиционных платформах и ФЗ о ЦФА. Операторы обмена могут организовывать торговлю утилитарных цифровых прав и цифровых финансовых активов.

    Существующие криптобиржи, торгующие криптовалютами, например, биткоином и Ethereum, не подпадают под определение нового субъекта и остаются неурегулированными. Закон о ЦФА прямо допускает возможность организации на территории России площадки для обмена криптовалют.

    Закон устанавливает требования «деловой репутации» к исполнительным органам информационной системы, оператора обмена ЦФА. Такие требования включают отсутствие неснятой и непогашенной судимости, отсутствие за последние годы фактов привлечения к административной или уголовной ответственности в связи с банкротством, в связи с деятельностью финансовой организации, сведений о причастности лиц к экстремистской деятельности или терроризму и др.

    Оператор обмена ЦФА обязан хранить информацию о сделках с ЦФА не менее 5 лет. Банк России вправе установить дополнительные требования к деятельности информационных систем и операторов обмена ЦФА, например, к операционной надежности и к предоставлению отчетности. Подобные требования могут усилить транспарентность, а также повысить безопасность.

    «Однако при установлении требований должен учитываться принцип технологической нейтральности, то есть возможность использовать любые технологии безопасности, а не только те, которые разработаны или установлены государством», — подчеркнули юристы.

    Закон устанавливает требования к рекламе ЦФА, в частности, необходимость предупреждать инвесторов, что предлагаемые активы являются высокорисковыми, и их приобретение может привести к потере внесенных денежных средств в полном объеме. Такое требование о предупреждении инвесторов о возможных рисках покупки ЦФА распространено во многих странах (Франция, Швейцария, США).

    Установлено, что реклама не должна содержать обещание выплаты дохода по ЦФА, за исключением дохода, обязанность выплаты которого предусмотрена решением о выпуске. Реклама не должна содержать прогнозы роста курсовой стоимости выпускаемых ЦФА, что также является мерой защиты от введения инвестора в заблуждение, чрезмерных ожиданий в отношении инвестиций и обеспечения достоверной оценки инвестором таких инвестиций.

    Налогообложение

    Закон о ЦФА не регламентирует вопросы, связанные с налогообложением цифровых финансовых активов. Вопрос налоговых последствий совершения сделок с криптовалютой остается открытым. В мире вопросы налогообложения чаще всего решаются за счет профильных разъяснений органов налоговой службы по системам уплаты налогов с операций с цифровыми активами.

    «Оборот криптоактивов будет подчиняться общим правилам налогообложения, что может привести к ряду затруднений и противоречий и, очевидно, будет работать против развития нового рынка», — пояснили эксперты.

    В настоящее время в России не определен подход к косвенному налогообложению криптоактивов. В мае 2018 года Минфин выразил свое мнение о налогообложении криптовалютных операций для физических лиц.

    «... особый порядок налогообложения доходов физлиц при совершении операций с криптовалютами не установлен, физические лица должны самостоятельно исчислить налог и подать декларацию в инспекцию; налоговая база по операциям купли-продажи криптовалют определяется в рублях как превышение общей суммы доходов от продажи криптовалюты над общей суммой документально подтвержденных расходов на ее приобретение; до законодательного урегулирования вопросов, связанных с обращением и налогообложением криптовалют, при определении налоговой базы необходимо исходить из ст. 220 НК РФ», — говорится в письме Минфина.

    Касательно корпоративного налогообложения в министерстве подчеркивали, что согласно статье 247 НК РФ объектом налогообложения по налогу на прибыль организаций признается прибыль, полученная налогоплательщиком, определяемая для российских организаций в общем случае как разница между полученными доходами и произведенными расходами, квалифицируемыми в соответствии с положениями главы 25 НК РФ.

    «Логика положений главы 25 НК РФ подразумевает налогообложение всех доходов, полученных налогоплательщиком при осуществлении деятельности, за исключением поименованных в ст. 251 НК РФ. При этом особый порядок налогообложения доходов при совершении операций с криптовалютой главой 25 НК РФ не установлен», — объяснили в Moscow Digital School.

    Руководитель Российского центра компетенций и анализа стандартов ОЭСР РАНХиГС при президенте РФ Антонина Левашенко предупредила, что с 1 января 2021 года криптобизнес, по сути, не сможет использовать криптовалюту для своих операций. Это значит, что ему будет невыгодно работать на территории России.

    «На данный момент по смыслу закона запрещены будут именно операции по оплате в криптовалюте, теоретически операции по обмену криптовалюты на фиатные средства или другие криптовалюты (как конвертация) не ограничены. Не запрещено также и получение, например, зарплаты в криптовалютах. Смена юрисдикции крупного и не очень криптобизнеса — это то, что ожидает криптоэкономику в России, ведь ни одна из развитых стран не вводит запретов на использование криптовалют», — предупредила Левашенко.

    По ее словам, поправки, предложенные Минфином, могут еще больше усугубить ситуацию. Например, ограничить возможность покупки криптовалюты, а также получения зарплаты в криптовалюте. Подобный запрет не только обесценивает криптовалюту, но и влечет отток бизнеса и капитала из России.

    — Штрафы и уголовное дело. Как инициатива Минфина повлияет на криптобизнес

    — ЦБ не поддержал проект по майнингу криптовалют из своей «песочницы»

    — На фестивале в России впервые напитки продали за биткоины. Законно ли это

    Больше новостей о криптовалютах вы найдете в нашем телеграм-канале РБК-Крипто.

    «Ведомости» — ведущее деловое издание России

    Решение Федеральной службы по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) от 27 ноября 2020 г. ЭЛ № ФС 77-79546

    Учредитель: АО «Бизнес Ньюс Медиа»

    И.о. главного редактора: Казьмина Ирина Сергеевна

    Рекламно-информационное приложение к газете «Ведомости». Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) за номером ПИ № ФС 77 – 77720 от 17 января 2020 г.

    Любое использование материалов допускается только при соблюдении правил перепечатки и при наличии гиперссылки на vedomosti.ru

    Новости, аналитика, прогнозы и другие материалы, представленные на данном сайте, не являются офертой или рекомендацией к покупке или продаже каких-либо активов.

    Сайт использует IP адреса, cookie и данные геолокации Пользователей сайта, условия использования содержатся в Политике по защите персональных данных

    Все права защищены © АО Бизнес Ньюс Медиа, 1999—2021

    Любое использование материалов допускается только при соблюдении правил перепечатки и при наличии гиперссылки на vedomosti.ru

    Новости, аналитика, прогнозы и другие материалы, представленные на данном сайте, не являются офертой или рекомендацией к покупке или продаже каких-либо активов.

    Все права защищены © АО Бизнес Ньюс Медиа, 1999—2021

    Решение Федеральной службы по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) от 27 ноября 2020 г. ЭЛ № ФС 77-79546

    Учредитель: АО «Бизнес Ньюс Медиа»

    И.о. главного редактора: Казьмина Ирина Сергеевна

    Рекламно-информационное приложение к газете «Ведомости». Зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) за номером ПИ № ФС 77 – 77720 от 17 января 2020 г.

    Сайт использует IP адреса, cookie и данные геолокации Пользователей сайта, условия использования содержатся в Политике по защите персональных данных

    Экспрессия NKRF при раке поджелудочной железы

    РАК поджелудочной железы - Интерактивный график разброса выживаемости i

    График разброса выживаемости показывает клинический статус (т. Пациенты, которые в последний раз были живы для последующего наблюдения, показаны синим цветом, а пациенты, умершие во время исследования, показаны красным.

    На оси абсцисс показаны уровни экспрессии (FPKM) исследуемого гена в опухолевой ткани на момент постановки диагноза. По оси ординат показано время наблюдения после постановки диагноза (годы). Обе оси дополнены кривыми плотности ядра, демонстрирующими плотность данных по осям. На верхнем графике плотности показано распределение уровней экспрессии (FPKM) среди мертвых (красный) и живых пациентов (синий). Правый график плотности показывает плотность данных за годы выживания умерших пациентов с высоким и низким уровнем экспрессии соответственно, стратифицированные с использованием порогового значения, обозначенного вертикальной пунктирной линией на графике разброса выживаемости.Это пороговое значение определяется автоматически на основе порогового значения FPKM, которое минимизирует p-оценку. Отсечку можно изменить, перетащив вертикальную линию или введя значение отсечки в квадрат с надписью «Текущее отсечение».

    Под графиком разброса выживаемости показан ландшафт p-оценки (черная кривая; левая ось) вместе с разделением мертвой медианы (красная кривая; правая ось). Разделение мертвой медианы - это разница в средней экспрессии мРНК между пациентами, которые умерли с высокой и низкой экспрессией, соответственно.Он рассчитывается следующим образом: медиана экспрессии FPKM у мертвых пациентов с высокой экспрессией - медиана экспрессии FPKM у мертвых пациентов с низкой экспрессией. Это предназначено для помощи пользователю в визуальном изучении настраиваемых пороговых значений и связанных с ними p-оценок и разделения мертвой медианы.

    Отображаются индивидуальные данные пациента, которые можно отфильтровать, нажав одну или несколько кнопок категорий в верхней части страницы. Категории, описывающие уровень экспрессии и информацию о пациенте, включают: высокий, низкий, живой, мертвый, женский, мужской и стадии опухоли.Масштаб оси x можно переключать между линейным и логарифмическим масштабом, нажимая кнопку «x log». Функция наведения указателя мыши показывает идентификатор TCGA, информацию о пациенте и экспрессию мРНК (FPKM) для каждого пациента.

    и анализ выживаемости и Графики Каплана-Мейера обобщают результаты анализа корреляции между уровнем экспрессии мРНК и выживаемостью пациентов. Пациенты были разделены в зависимости от уровня экспрессии на одну из двух групп: «низкий» (ниже порогового значения) или «высокий» (сверх пороговый уровень). Ось X показывает время выживания (в годах), а ось Y показывает вероятность выживания, где 1.0 соответствует 100 процентам.

    Подробнее

    NKRF не является прогностическим средством при раке поджелудочной железы
    Жив (n = 84) Погибшие (n = 92) Женщины (n = 80) Мужчины (n = 96)
    Стадия:
    i (n = 1) ia (n = 5) ib (n = 15) iia (n = 28) iib (n = 117)
    iii (n = 3) iv (n = 4) n / a (n = 3)

    Анализ выживаемости

    Отключение по току i

    Отключение по току показывает текущее значение отключения (FPKM).Его можно изменить вручную. Когда текущее пороговое значение изменяется, вертикальная пунктирная линия, обозначающая порог, интерактивный график разброса выживаемости и кривая Каплана-Мейера будут автоматически скорректированы для отображения результатов соответственно.

    :
    Отсечка наилучшей экспрессии i

    На основании значения FPKM каждого гена пациенты были разделены на две группы и изучена связь между прогнозом (выживаемостью) и экспрессией гена (FPKM). Лучшее пороговое значение экспрессии относится к значению FPKM, которое дает максимальную разницу в выживаемости между двумя группами при самом низком логарифмическом значении Р.На основе анализа выживаемости было выбрано лучшее отсечение экспрессии.

    При щелчке по этому номеру вертикальная пунктирная линия, обозначающая границу, интерактивный график выживаемости и кривая Каплана-Мейера будут скорректированы для отображения результатов, основанных на отсечении наилучшего выражения.

    Подробнее

    : 2.36
    Медиана экспрессии i Медианная экспрессия относится к среднему значению FPKM, рассчитанному на основе данных экспрессии генов (FPKM) для всех пациентов в этом наборе данных. При нажатии на этот номер вертикальная пунктирная линия, обозначающая пороговое значение, интерактивный график выживаемости и кривая Каплана-Мейера будут скорректированы для отображения результатов, основанных на медианном выражении.

    Подробнее

    : нет данных
    Среднее время наблюдения i

    Среднее время наблюдения - это среднее время (в годах) после постановки диагноза этого типа рака, основанное на клинических данных всех пациентов в этом наборе данных.

    : N / A
    P score i

    Лог-ранговое значение P для графика Каплана-Мейера, показывающего результаты анализа корреляции между уровнем экспрессии мРНК и выживаемостью пациента.

    N / A
    5-летняя выживаемость высокая i

    5-летняя выживаемость для пациентов с более высокой экспрессией, чем предел экспрессии.

    Для меланомы и глиомы показана 3-летняя выживаемость.

    N / A
    5-летняя выживаемость низкая i

    5-летняя выживаемость для пациентов с более низкой экспрессией, чем предел экспрессии.

    Для меланомы и глиомы показана 3-летняя выживаемость.

    НЕТ
    образцов РНК TCGA i

    Данные последовательности РНК представлены как медиана FPKM (количество фрагментов на килобазу экзона на миллион считываний), сгенерированная Атласом генома рака (TCGA).

    Нормальное распределение по набору данных визуализируется с помощью прямоугольных диаграмм, показанных как медиана и 25-й и 75-й процентили. Точки отображаются как выбросы, если они выше или ниже 1,5 межквартильного размаха. Значения FPKM для отдельных образцов представлены рядом с прямоугольной диаграммой.

    Среднее значение ФПКМ 2,8
    Количество образцов 176
    Образцы
    Образец Описание ФПКМ
    TCGA-3A-A9IR-01A 64 года, сука, белая, стадия: ib, жива, 1542 дня 6.1
    TCGA-Z5-AAPL-01A Женщина, 74 года, белая, стадия: iia, жива, 467 дней 5,5
    TCGA-IB-A7LX-01A 57 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 250 дней 4,6
    TCGA-HZ-8637-01A 76 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 517 дней 4,4
    TCGA-3A-A9IZ-01A 47 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 308 дней 4.4
    TCGA-IB-7646-01A 60 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 145 дней 4,3
    TCGA-FB-AAQ6-01A 85 лет, кобель, белый, стадия: ia, умерла, 244 дня 4,2
    TCGA-3A-A9IJ-01A 65 лет, кобель, белый, стадия: ib, жив, 1854 дней 4,2
    TCGA-FB-AAQ2-01A 81 год, сука, белая, стадия: миб, мертва, 153 дня 4.2
    TCGA-S4-A8RO-01A 75 лет, сука, белая, стадия: миб, жива, 525 дней 4,1
    TCGA-2J-AABI-01A 55 лет, сука, белая, стадия: iia, жива, 969 дней 4,1
    TCGA-IB-7886-01A 80 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 123 дня 4,0
    TCGA-IB-A6UG-01A 65 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 41 день 3.9
    TCGA-YY-A8LH-01A 61 год, сука, белая, стадия: миб, жива, 2016 дней 3,9
    TCGA-2L-AAQA-01A 76 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 143 дня 3,8
    TCGA-XN-A8T5-01A 53 года, сука, белая, стадия: ib, жива, 720 дней 3,8
    TCGA-IB-AAUR-01A 67 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 338 дней 3.7
    TCGA-3A-A9IV-01A 59 лет, сука, белая, стадия: ib, жива, 1103 дн. 3,7
    TCGA-Q3-A5QY-01A 58 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 416 дней 3,7
    TCGA-IB-7651-01A 64 года, сука, белая, стадия: миб, мертва, 603 дня 3,6
    TCGA-2L-AAQM-01A 52 года, кобель, белый, стадия: миб, жив, 1383 дня 3.6
    TCGA-IB-7644-01A женщина, 65 лет, белая, стадия: iv, умерла, 394 дня 3,6
    TCGA-Q3-AA2A-01A 64 года, сука, белая, стадия: ib, жива, 95 дней 3,5
    TCGA-XD-AAUH-01A 57 лет, сука, белая, стадия: миб, жива, 395 дней 3,5
    TCGA-IB-7897-01A женщина, 54 года, белая, стадия: миб, умерла, 486 дней 3.5
    TCGA-FB-AAQ0-01A 68 лет, мужчина, белый, стадия: iia, мертв, 473 дня 3,5
    TCGA-2J-AABK-01A 71 год, кобель, белый, стадия: миб, жива, 484 дн. 3,5
    TCGA-LB-A7SX-01A 74 года, женщина, темнокожая или афроамериканка, стадия: iib, мертва, 393 дня 3,4
    TCGA-S4-A8RM-01A 67 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 737 дней 3.4
    TCGA-2J-AABP-01A 58 лет, сука, белая, стадия: миб, жива, 463 дн. 3,4
    TCGA-F2-A44G-01A 79 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 233 дня 3,4
    TCGA-IB-AAUP-01A 68 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 431 дн. 3,4
    TCGA-HZ-7920-01A 71 год, мужчина, белый, стадия: ib, мертв, 236 дней 3.4
    TCGA-HZ-7926-01A 57 лет, мужчина, темнокожий или афроамериканец, стадия: iib, мертв, 518 дней 3,4
    TCGA-L1-A7W4-01A 48 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 278 дней 3,4
    TCGA-3A-A9I5-01A 58 лет, мужчина, белый, жив, 1794 дней 3,3
    TCGA-F2-A7TX-01A 77 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 95 дней 3.3
    TCGA-IB-7645-01A Женщина, 44 года, стадия: миб, мертва, 1502 дня 3,3
    TCGA-IB-A5ST-01A 64 года, сука, белая, стадия: миб, жива, 635 дней 3,2
    TCGA-FB-A4P5-01A 69 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 179 дней 3,2
    TCGA-IB-7649-01A женщина 73 года, стадия: миб, умерла, 467 дней 3.2
    TCGA-IB-7652-01A 49 лет, женщина, азиатка, стадия: миб, жива, 1116 дней 3,2
    TCGA-2L-AAQE-01A 56 лет, кобель, белый, стадия: миб, умер, 684 дней 3,2
    TCGA-HZ-A9TJ-01A 70 лет, кобель, белый, стадия: iv, жив, 603 дн. 3,2
    TCGA-IB-7889-01A 86 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 481 день 3.2
    TCGA-IB-A5SP-01A 77 лет, кобель, белый, стадия: iia, жив, 482 дн. 3,2
    TCGA-HZ-A8P1-01A 81 год, кобель, белый, стадия: ib, жив, 7 дней 3,2
    TCGA-FB-AAQ3-01A женщина, 65 лет, белая, стадия: миб, мертва, 31 день 3,1
    TCGA-3A-A9IC-01A 61 год, сука, белая, стадия: миб, мертва, 738 дней 3.1
    TCGA-F2-6879-01A 57 лет, кобель, белый, стадия: миб, умер, 334 дня 3,1
    TCGA-2J-AAB4-01A 48 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 729 дней 3,1
    TCGA-F2-7276-01A 64 года, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 216 дней 3,1
    TCGA-IB-AAUW-01A 63 года, сука, белая, стадия: миб, мертва, 230 дней 3.1
    TCGA-IB-7888-01A 66 лет, женщина, темнокожая или афроамериканка, стадия: iia, мертва, 1332 дня 3,1
    TCGA-IB-A7M4-01A 81 год, кобель, белый, стадия: миб, жива, 483 дн. 3,1
    TCGA-HZ-7919-01A 52 года, сука, белая, стадия: миб, мертва, 593 дня 3,0
    TCGA-FB-AAPP-01A 71 год, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 485 дней 3.0
    TCGA-3A-A9IX-01A 40 лет, кобель, белый, стадия: ia, жив, 1037 дней 3,0
    TCGA-HZ-8519-01A 73 года, кобель, белый, стадия: ia, жив, 454 дн. 3,0
    TCGA-IB-8127-01A 59 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 522 дн. 3,0
    TCGA-3E-AAAY-01A 67 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 2285 дней 3.0
    TCGA-HZ-A4BH-01A 75 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 194 дня 3,0
    TCGA-IB-AAUO-01A 64 года, сука, белая, стадия: миб, мертва, 239 дней 3,0
    TCGA-FB-AAQ1-01A 49 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 123 дня 3,0
    TCGA-XD-AAUI-01A 50 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 366 дней 3.0
    TCGA-HV-A5A6-01A женщина, азиатка, 65 лет, стадия: миб, мертва, 2036 дней 3,0
    TCGA-3E-AAAZ-01A 71 год, мужчина, белый, стадия: iia, мертв, 2182 дней 3,0
    TCGA-IB-AAUU-01A 35 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 245 дней 3,0
    TCGA-2J-AABF-01A 73 года, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 691 день 2.9
    TCGA-HZ-8315-01A женщина, 54 года, белая, стадия: iia, умерла, 299 дней 2,9
    TCGA-2J-AABA-01A 55 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 607 дней 2,9
    TCGA-US-A77J-01A 81 год, сука, белая, стадия: миб, мертва, 568 дней 2,9
    TCGA-FB-AAPU-01A 41 год, женщина, азиатка, стадия: iia, умерла, 381 день 2.9
    TCGA-HZ-8001-01A 69 лет, кобель, белый, стадия: iii, жив, 706 дней 2,9
    TCGA-US-A77G-01A 64 года, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 12 дней 2,9
    TCGA-H6-8124-01A 56 лет, сука, белая, стадия: миб, жива, 392 дн. 2,9
    TCGA-HV-A5A5-01A Женщина, азиатка, 61 год, стадия: миб, жива, 289 дней 2.9
    TCGA-RB-AA9M-01A 43 года, кобель, белый, стадия: миб, жива, 286 дней 2,9
    TCGA-HZ-7918-01A 72 года, кобель, белый, стадия: миб, жив, 969 дней 2,9
    TCGA-2J-AAB8-01A 71 год, кобель, белый, стадия: миб, жива, 80 дней 2,9
    TCGA-HZ-7923-01A 65 лет, кобель, белый, стадия: iia, жив, 314 дней 2.9
    TCGA-HZ-7925-01A 66 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 614 дней 2,8
    TCGA-HZ-8002-01A 61 год, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 366 дней 2,8
    TCGA-FB-A5VM-01A 74 года, мужчина, белый, стадия: ib, мертв, 498 дней 2,8
    TCGA-S4-A8RP-01A 77 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 702 дня 2.8
    TCGA-HZ-8636-01A 58 лет, сука, белая, стадия: iv, умерла, 545 дней 2,8
    TCGA-H8-A6C1-01A 53 года, кобель, белый, стадия: iia, жив, 671 дн. 2,8
    TCGA-2L-AAQI-01A 66 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 103 дня 2,8
    TCGA-HZ-7924-01A 60 лет, сука, белая, стадия: iia, жива, 840 дней 2.8
    TCGA-FB-A78T-01A 71 год, сука, белая, стадия: миб, мертва, 375 дней 2,8
    TCGA-XD-AAUG-01A 66 лет, сука, белая, стадия: iv, жива, 420 дней 2,8
    TCGA-US-A779-01A женщина, 54 года, белая, стадия: миб, мертва, 511 дней 2,8
    TCGA-3A-A9IB-01A 69 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 224 дня 2.7
    TCGA-3A-A9IL-01A 39 лет, сука, белая, стадия: я, жива, 2741 дней 2,7
    TCGA-F2-7273-01A 54 года, мужчина, темнокожий или афроамериканец, стадия: iib, мертв, 592 дня 2,7
    TCGA-IB-7890-01A 73 года, мужчина, стадия: ib, мертв, 598 дней 2,7
    TCGA-IB-7891-01A 49 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 913 дней 2.7
    TCGA-HZ-A49H-01A 68 лет, сука, белая, стадия: миб, жива, 491 дн. 2,7
    TCGA-IB-A5SQ-01A 56 лет, женщина, белая, стадия: ib, мертва, 219 дней 2,7
    TCGA-3A-A9IH-01A 66 лет, сука, белая, стадия: ia, жива, 1021 дн. 2,7
    TCGA-3A-A9IO-01A 56 лет, мужчина, белый, жив, 1942 дней 2.6
    TCGA-IB-AAUS-01A 84 года, сука, белая, стадия: миб, жива, 225 дней 2,6
    TCGA-HZ-A4BK-01A 72 года, кобель, белый, стадия: миб, жива, 657 дней 2,6
    TCGA-IB-AAUQ-01A 50 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 183 дня 2,6
    TCGA-HZ-8005-01A 81 год, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 120 дней 2.6
    TCGA-XN-A8T3-01A 67 лет, кобель, белый, стадия: ib, жив, 951 дней 2,6
    TCGA-2J-AABR-01A 60 лет, женщина, белая, стадия: iia, жива, 438 дней 2,6
    TCGA-US-A776-01A 61 год, мужчина, белый, стадия: iia, жив, 1216 дней 2,6
    TCGA-IB-7885-01A 78 лет, сука, белая, стадия: миб, жива, 1257 дней 2.5
    TCGA-FB-AAPZ-01A 54 года, кобель, белый, стадия: миб, жива, 716 дней 2,5
    TCGA-M8-A5N4-01A Женщина 48 лет, стадия: iia, жива, 584 сут. 2,5
    TCGA-FB-A7DR-01A 48 лет, мужчина, азиат, стадия: iia, мертв, 353 дня 2,5
    TCGA-US-A774-01A 76 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 695 дней 2.5
    TCGA-HV-A7OP-01A 72 года, мужчина, азиат, стадия: миб, жив, 978 дней 2,5
    TCGA-IB-AAUV-01A 49 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 404 дн. 2,5
    TCGA-YH-A8SY-01A 73 года, женщина, белая, жива, 388 дней 2,5
    TCGA-HZ-A49I-01A 77 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 308 дней 2.5
    TCGA-2J-AABO-01A 43 года, кобель, белый, стадия: миб, жива, 440 дней 2,5
    TCGA-HZ-A77Q-01A 55 лет, сука, белая, стадия: миб, жива, 33 дня 2,5
    TCGA-2J-AAB9-01A 71 год, сука, белая, стадия: миб, мертва, 627 дней 2,5
    TCGA-IB-A6UF-01A 63 года, кобель, белый, стадия: миб, жива, 666 дней 2.5
    TCGA-YB-A89D-01A 59 лет, кобель, белый, стадия: миб, жив, 350 дней 2,5
    TCGA-2J-AABH-01A 61 год, кобель, белый, стадия: iia, жив, 1287 дней 2,5
    TCGA-HV-A7OL-01A 70 лет, мужчина, азиат, этап: iia, жив, 252 дня 2,5
    TCGA-3A-A9I7-01A 45 лет, мужчина, темнокожий или афроамериканец, стадия: iib, жив, 1323 дня 2.5
    TCGA-FB-A4P6-01A 54 года, кобель, белый, стадия: миб, жива, 767 дней 2,5
    TCGA-HZ-7922-01A 61 год, сука, белая, стадия: миб, жива, 4 дня 2,5
    TCGA-PZ-A5RE-01A Женщина, 44 года, белая, стадия: миб, мертва, 470 дней 2,4
    TCGA-3A-A9IN-01A 62 года, сука, белая, стадия: ib, жива, 2084 дня 2.4
    TCGA-2J-AABU-01A 56 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 277 дней 2,4
    TCGA-HZ-A49G-01A 58 лет, сука, белая, стадия: миб, жива, 660 дней 2,4
    TCGA-IB-7887-01A 62 года, сука, белая, стадия: миб, мертва, 110 дней 2,4
    TCGA-HV-AA8X-01A женщина, азиатка, 75 лет, стадия: миб, мертва, 532 дня 2.4
    TCGA-3A-A9IU-01A 65 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 458 дней 2,4
    TCGA-3A-A9IS-01A 67 лет, мужчина, белый, стадия: ib, жив, 998 дней 2,4
    TCGA-F2-A44H-01A 65 лет, кобель, белый, стадия: iia, жив, 586 дней 2,4
    TCGA-OE-A75W-01A 75 лет, мужчина, белый, стадия: iia, мертв, 267 дней 2.4
    TCGA-H6-A45N-01A 88 лет, женщина, белая, стадия: миб, мертва, 421 день 2,4
    TCGA-2J-AAB1-01A 65 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 66 дней 2,3
    TCGA-IB-A5SS-01A 64 года, сука, белая, стадия: миб, мертва, 460 дней 2,3
    TCGA-HZ-8638-01A 84 года, сука, белая, стадия: ia, мертвая, 151 день 2.3
    TCGA-HV-A5A4-01A Женщина, азиатка, 72 года, стадия: iia, жива, 232 дня 2,3
    TCGA-RL-AAAS-01A 60 лет, сука, белая, стадия: ib, жива, 9 дней 2,3
    TCGA-2J-AABT-01A 72 года, сука, белая, стадия: миб, жива, 319 дней 2,3
    TCGA-FB-AAPY-01A 71 год, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 1059 дней 2.3
    TCGA-HZ-7289-01A 77 лет, кобель, белый, стадия: миб, умерла, 661 дней 2,3
    TCGA-FB-AAPQ-01A 65 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 1130 дней 2,3
    TCGA-IB-AAUN-01A 74 года, женщина, белая, стадия: ib, мертвая, 144 дня 2,3
    TCGA-FB-AAPS-01A 62 года, сука, белая, стадия: миб, жива, 228 дней 2.2
    TCGA-US-A77E-01A 73 года, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 430 дней 2,2
    TCGA-IB-7893-01A 64 года, кобель, белый, стадия: iia, мертв, 117 дней 2,2
    TCGA-IB-A5SO-01A 71 год, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 365 дней 2,2
    TCGA-HZ-A77O-01A 77 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 160 дней 2.2
    TCGA-LB-A8F3-01A 64 года, женщина, темнокожая или афроамериканка, стадия: iia, жива, 379 дней 2,2
    TCGA-2L-AAQJ-01A 49 лет, женщина, белая, стадия: iii, умерла, 394 дня 2,1
    TCGA-3A-A9I9-01A 67 лет, мужчина, белый, стадия: iia, мертв, 634 дня 2,1
    TCGA-F2-A8YN-01A 76 лет, кобель, белый, стадия: iia, жив, 517 дней 2.1
    TCGA-XD-AAUL-01A 56 лет, кобель, белый, стадия: iia, жив, 498 дней 2,1
    TCGA-IB-AAUT-01A 65 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 287 дней 2,1
    TCGA-HZ-A77P-01A 77 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 330 дней 2,1
    TCGA-HV-A5A3-01A 50 лет, мужчина, азиат, стадия: iia, мертв, 128 дней 2.0
    TCGA-HV-AA8V-01A 50 лет, мужчина, азиат, стадия: миб, жив, 920 дней 2,0
    TCGA-2L-AAQL-01A 82 года, кобель, белый, стадия: миб, погиб, 292 дня 2,0
    TCGA-HZ-8317-01A 69 лет, сука, белая, стадия: миб, мертва, 378 дней 2,0
    TCGA-IB-7654-01A 80 лет, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 476 дней 2.0
    TCGA-RB-A7B8-01A 81 год, сука, белая, стадия: миб, мертва, 466 дней 1,9
    TCGA-FB-A545-01A 72 года, сука, белая, стадия: миб, мертва, 732 дня 1,9
    TCGA-2J-AAB6-01A 75 лет, кобель, белый, стадия: iia, мертв, 293 дня 1,8
    TCGA-2J-AABE-01A 73 года, кобель, белый, стадия: iia, жив, 676 дней 1.8
    TCGA-IB-8126-01A 80 лет, сука, белая, стадия: iii, жива, 462 дн. 1,7
    TCGA-IB-AAUM-01A 76 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 8 дней 1,6
    TCGA-HZ-8003-01A женщина, 65 лет, белая, стадия: миб, мертва, 596 дней 1,6
    TCGA-3A-A9J0-01A 75 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 743 дн. 1.6
    TCGA-LB-A9Q5-01A 63 года, сука, белая, стадия: миб, мертва, 313 дней 1,2
    TCGA-2J-AABV-01A 74 года, кобель, белый, стадия: миб, мертв, 652 дня 0,9
    TCGA-F2-6880-01A 70 лет, кобель, белый, стадия: миб, жива, 289 дней 0,8
    Показать всеПоказать меньше
    ПАНКРЕАТИЧЕСКИЙ РАК - экспрессия белка i

    При наведении курсора мыши отображается информация об образце и аннотации.Щелкните изображение, чтобы просмотреть его в полноэкранном режиме. Образцы можно фильтровать на основе уровня окрашивания антител, выбрав одну или несколько из следующих категорий: высокий, средний, низкий и не обнаружено. Здесь описаны анализ и аннотация.

    Обратите внимание, что образцы, используемые для иммуногистохимии в Атласе белков человека, не соответствуют образцам в наборе данных TCGA.

    Ожидается анализ ткани на рак

    Исследование разорванной аневризмы Барроу: результаты за 6 лет

    Объект: Авторы сообщают о 6-летних результатах исследования разорванной аневризмы Барроу (BRAT).В этом продолжающемся рандомизированном исследовании с конечной целью наблюдения в течение 10 лет сравнивается безопасность и эффективность окклюзии хирургического зажима и эндоваскулярной эмболизации спиральной спиралью у пациентов с субарахноидальным кровоизлиянием (САК) из разорванной аневризмы. Результаты этого исследования за 1 и 3 года были опубликованы ранее.

    Методы: В общей сложности 500 пациентов с САК соответствовали критериям включения и были включены в исследование.Из этих пациентов 471 случайным образом был назначен на лечение: 238 - на хирургическое клипирование и 233 - на эндоваскулярную спиральную намотку. Шесть пациентов, которые умерли до лечения, и 57 пациентов с неаневризматическими САК были исключены, в результате чего 408 пациентов подверглись клипированию (209 назначенных) или спирали (199 назначенным). Лечить ли пациентов в рамках назначенной группы или переводить пациентов в другую группу оставалось на усмотрение лечащего врача; 38% (75/199) пациентов, которым была назначена намотка, были переведены на клипирование и 1.9% (4/209), отнесенных к отсечению, перешли к намотке. Данные о результатах были собраны специализированной практикующей медсестрой. Первичный анализ результатов был основан на назначенной группе лечения; Плохой результат был определен как оценка по модифицированной шкале Рэнкина (mRS)> 2 и оценивался независимо. Через шесть лет после рандомизации 336 (82%) из 408 пациентов, прошедших лечение, были доступны для обследования.

    Полученные результаты: На основании оценки mRS> 2, аналогичной результатам 3-летнего наблюдения, нет значимой разницы в результатах (p = 0.24) был обнаружен между двумя группами лечения. Полная облитерация аневризмы через 6 лет была достигнута в 96% (111/116) в группе клипирования и в 48% (23/48) в группе спиральной фиксации (p <0,0001). В период между 3- и 6-летними периодами наблюдения еще 3 пациента, которым была назначена спиральная намотка, и никому не назначено клипирование, получили повторное лечение, общая частота повторного лечения составила 4,6% (13/280) для клипирования и 16,4% (21/128). ) для намотки (p <0,0001). Когда рассматривалось местоположение аневризмы, 6-летние результаты продолжали соответствовать ранее сообщенным результатам, без разницы в результатах для аневризм переднего кровообращения в большинстве временных точек.Из аневризм передних отделов кровообращения, назначенных для лечения намоткой, 42% (70/168) были перенесены на лечение клипированием. Результаты лечения аневризм заднего отдела кровообращения по-прежнему благоприятствовали образованию спиралей. Процесс рандомизации был неожиданно искажен: 18 из 21 обработанной аневризмы задней нижней мозжечковой артерии (PICA) были назначены на клипирование, но даже когда аневризмы PICA были удалены из анализа, результаты для аневризм заднего отдела кровообращения по-прежнему благоприятствовали свертыванию.

    Выводы: Хотя BRAT был статистически недостаточен для выявления небольших различий, эти результаты предполагают небольшую разницу в результатах между двумя видами лечения аневризм переднего кровообращения.Этого не было в случае аневризм заднего отдела кровообращения, где спиральная эмболизация, по-видимому, давала устойчивое преимущество перед клипированием. Частота облитерации аневризмы в BRAT была значительно ниже, а частота повторного лечения значительно выше у пациентов, перенесших наматывание, чем у пациентов, перенесших клипирование. Однако, несмотря на то, что частота повторного лечения была выше после наматывания, не было известно о повторных кровотечениях у пациентов, перенесших наматывание в BRAT, которые наблюдались в течение 6 лет.Остается достаточно вопросов об относительной пользе двух методов лечения, чтобы требовать проведения дальнейших хорошо спланированных рандомизированных исследований.

    Ключевые слова: BRAT; BRAT = Исследование разорванной аневризмы Барроу; Я СИДЕЛ; ISAT = Международное исследование субарахноидальной аневризмы; PICA = задняя нижняя мозжечковая артерия; САК = субарахноидальное кровоизлияние; клипса окклюзия; спиральная эмболизация; внутричерепная аневризма; mRS = модифицированная шкала Рэнкина; рандомизированное исследование; субарахноидальное кровоизлияние; сосудистые нарушения.

    Интегрины β1 необходимы для опосредованного уничтожения NK-клеток Cryptococcus neoformans

    Abstract

    Cryptococcus neoformans - грибковый патоген, вызывающий менингит и пневмонию со смертельным исходом. Во время защиты хозяина от Cryptococcus NK-клетки непосредственно распознают и убивают C. neoformans , используя цитолитическую дегрануляцию, аналогичную уничтожению опухолевых клеток. Это уничтожение грибов требует независимой активации киназы семейства Src (SFK) и путей, опосредованных Rac1.Для распознавания C. neoformans требуется рецептор естественной цитотоксичности, NKp30; однако неизвестно, активирует ли NKp30 оба пути передачи сигнала или второй рецептор участвует в активации одного из путей. Мы использовали первичные NK-клетки человека и линию NK-клеток человека и обнаружили, что NKp30 активирует SFK → PI3K, но не цитотоксический сигнал Rac1, что привело к поиску рецептора, ведущего к активации Rac1. Мы обнаружили, что NK-клеткам требуется интегрин-связанная киназа (ILK) для активации Rac1 для эффективного уничтожения грибков.Это наблюдение привело к нашей идентификации интегрина β1 как важного антикриптококкового рецептора. Эти данные демонстрируют, что для распознавания Cryptococcus , который активирует центральный цитолитический антимикробный путь, ведущий к уничтожению грибов, необходимы множественные рецепторы, включая интегрины β1 и NKp30, а также их проксимальные сигнальные пути.

    Введение

    Cryptococcus neoformans - это повсеместный грибковый патоген, который вызывает более 220 000 случаев менингита в год и более 180 000 случаев смерти ежегодно (1). C. neoformans в первую очередь заражает больных СПИДом. Современные противогрибковые препараты имеют ограниченную эффективность и непомерно дорого обходятся в этой популяции, и, к сожалению, 10-недельная смертность у лиц с симптомами составляет 57% (2). Эта неприемлемая заболеваемость и смертность привели к поиску механизмов защиты хозяина от Cryptococcus с целью улучшения терапии.

    NK-клетки - это клетки врожденного иммунитета, которые наиболее известны своей ролью в уничтожении злокачественных и инфицированных вирусом клеток.Однако NK-клетки также способны убивать микробы, такие как грибы (3). Опосредованное NK-клетками уничтожение опухолей зависит от лигирования множества рецепторов, которые запускают высвобождение цитолитических белков. Когда преобладают сигналы от активирующих рецепторов и интегринов, NK-клетка и опухолевая клетка-мишень образуют конъюгат, который создает NK-иммунный синапс (рассмотрено в ссылке 4). Синапс обеспечивает платформу, которая приводит к внутриклеточной передаче сигналов и транспортировке секреторных лизосом, что приводит к направленному высвобождению цитолитических белков в направлении клетки-мишени.Однако неизвестно, как неопухолевые лиганды, такие как лиганды грибковых патогенов, запускают внутриклеточные цитотоксические пути NK-клеток.

    Было показано, что NK-клетки человека и мыши непосредственно убивают C. neoformans (5-7). NK-клетки рекрутируются в легкие в ответ на легочный Cryptococcus (8), и мыши, лишенные NK-клеток, более восприимчивы к криптококковым инфекциям (9). При контакте C. neoformans связывается с рецептором естественной цитотоксичности (NCR) NKp30 и инициирует цитотоксический сигнальный каскад PI3K → Erk1 / 2 (10).Однако NKp30 не взаимодействует напрямую с PI3K. Вместо этого криптококковая стимуляция активирует киназу семейства Rac1 и Src (SFK) выше PI3K. Активация Rac1 и SFK не зависит друг от друга, но оба класса белков необходимы для активации нижележащего цитотоксического пути PI3K → Erk1 / 2 (11, 12). Эти наблюдения вызвали важные вопросы, на которые не было ответа. Активирует ли NKp30 два отдельных пути (SFK и Rac1), и сходятся ли эти два отдельных пути, чтобы активировать PI3K, или NKp30 активирует один путь и взаимодействует с другими рецепторами, чтобы активировать этот другой путь?

    В процессе уничтожения опухоли, опосредованного NK-клетками, задействовано более одного рецептора.И активирующие рецепторы, и передача сигналов интегрина взаимодействуют друг с другом для достижения цитотоксичности (13-15). Передача сигналов через рецепторы активации приводит к слиянию цитолитических гранул с плазматической мембраной (дегрануляция), тогда как передача сигналов через интегрины β2 облегчает движение гранул к иммунному синапсу (поляризация гранул) (15). И интегрин-опосредованная поляризация гранул, и активация опосредованной рецептором дегрануляции важны для эффективного лизиса опухоли.

    Хотя интегрины β2 играют решающую роль в уничтожении опухолей, они не играют роли в антикриптококковой активности (16).Хотя интегрины β2 играют основную роль, интегрины β1 участвуют в уничтожении опухолей, поскольку перекрестное связывание интегринов β1 усиливает противоопухолевую активность NK-клеток (17, 18). Интересно, что интегрины β1 на нейтрофилах связываются и активируются β-глюканами, которые представляют собой консервативный молекулярный паттерн на грибковых патогенах (19). Поскольку Cryptococcus также экспрессирует аналогичные β-глюканы, вполне вероятно, что интегрины β1 могут быть молекулой антикриптококковой адгезии.

    Чтобы определить, какой сигнальный путь активировал NKp30, мы использовали блокирование Abs по отношению к NKp30 и фосфоиммуноблоты, чтобы определить, активируется ли SFK или Rac этим NCR.Продемонстрировав, что Rac активируется независимо от NKp30, мы использовали иммуноблоттинг после нокдауна малой интерферирующей РНК (siRNA) или фармакологических ингибиторов, чтобы изучить роль интегрин-связанной киназы (ILK) перед Rac. Затем для исследования роли интегринов β2 и β1 в активации ILK → Rac и уничтожении криптококков использовали блокирование Abs и нокдаун siRNA. Наши результаты показали, что NK-клетки нуждаются в двух независимых сигнальных путях от интегринов NKp30 и β1. NKp30 активирует SFK, а интегрины β1 активируют ILK.Пути SFK и ILK затем сходятся в центральный путь передачи сигналов PI3K.

    Материалы и методы

    Химические вещества и низкомолекулярные ингибиторы

    FITC был приобретен у Sigma-Aldrich (каталожный номер 3326-32-7; Сент-Луис, Миссури), CPD 22 был приобретен у EMD Millipore (каталожный номер 407331) ; Этобико, Онтарио, Канада). СМИФх3 был приобретен у Calbiochem (каталожный номер 344092). ДМСО был получен от Sigma-Aldrich (номер в каталоге 472301). Метил-β-циклодекстран (МБЦД) был получен от Sigma-Aldrich (каталожный номер.C4555). CFSE был получен от Millipore (каталожный номер 4500-0270). Окрашивание трипановым синим 0,4% было приобретено у Life Technologies (каталожный номер 15250; Берлингтон, Онтарио, Канада).

    Abs

    Белки в иммуноблотах были обнаружены со специфическими Abs: кроличьи антифосфо-SFK (Y416) (2101S; Cell Signaling Technology, Whitby, ON, Canada), кроличьи антифосфо-Erk1 / 2 (T202 / Y204) (9101S; Cell Signaling Technology), кроличьи анти-p-ILK (AB1076; Millipore), мышиные анти-Fyn (610163; BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния), мышиные анти-Rac1 (1862341; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA ), кроличий β1 интегрин (4706S; Cell Signaling Technology), инфракрасный краситель козьих антител против кроличьих IgG 700DX (611-130-002; Rockland Immunochemicals, Лимерик, Пенсильвания) и инфракрасный краситель против козьих антител против IgG мыши 800 (923-32210; LI-COR Biosciences, Линкольн, Невада).Клетки для проточной цитометрии метили специфическими Ат для мышиных анти-CD11a PE-Cy5 (551131; BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния), кроличьих анти-CD29 (4706; Cell Signaling Technology) и мышиных анти-CD29, конъюгированных с Alexa Fluor. 488 (303015; BioLegend, Сан-Диего, Калифорния). Клетки

    и

    Cryptococcus

    YT-клетки представляют собой NK-подобную клеточную линию, выделенную из перикардиальной жидкости 15-летнего мальчика с острым лимфолейкозом (20). Клетки YT обладали цитотоксической активностью NK против группы клеток-мишеней, включая линии K562, T и B (20).Наши клетки YT были подарком К. Клейбергера, почетного факультета Стэнфордского университета, Стэнфорд, Калифорния. Клетки YT подтверждались экспрессией NKp30 и NKp44 и отсутствием CD3. Клетки YT поддерживали в полной среде, содержащей RPMI 1640 с добавлением 10% FBS (Invitrogen Life Technologies), 1% заменимых аминокислот (номер по каталогу 11140; Invitrogen Life Technologies), 1% пирувата натрия (номер по каталогу 11360; Invitrogen Life Technologies). ) и 1% пенициллин-стрептомицин в инкубаторе 37 ° C с 5% CO 2 .

    Клетки K562 были получены из Американской коллекции типовых культур (АТСС) (каталожный номер CCL243; Манассас, Вирджиния). 721,221 клетки были приобретены в АТСС (каталожный номер CRL1855). Клетки K562 и 721.221 поддерживали в полной среде в инкубаторе с 5% CO 2 при 37 ° C. Первичные NK-клетки выделяли от здоровых доноров с использованием набора для выделения NK (№ по каталогу 130-092-657; Miltenyi Biotec, San Diego, CA) в соответствии с инструкциями производителя. Выделенные клетки обычно составляли> 92% CD56 + и <0.5% CD3 + . C. neoformans штамм B3501 (номер по каталогу 34873; ATCC) выращивали до логарифмической фазы в бульоне с декстрозой Sabouraud (номер по каталогу 238230; Becton Dickinson, Mississauga, ON, Canada) на шейкере с 32 ° C в течение ночи.

    Иммуноблоттинг

    Клетки YT (3 × 10 5 –3 × 10 6 ) предварительно инкубировали с различными ингибиторами и их контролями в течение 1 ч в инкубаторе с CO 2 при 37 ° C. Затем клетки YT совмещали с C. neoformans штаммом B3501 при соотношении E: T 1: 100 для различных временных точек на водяной бане при 37 ° C.Клетки лизировали в буфере для лизиса Nonidet P-40, содержащем 50 мМ Трис (pH 7,4), 250 мМ NaCl, 5 мМ EDTA, 50 мМ NaF, 1 мМ Na 3 VO 4 , 1% Nonidet P-40 и 0,02% NaN 3 . В буфер для лизиса добавляли фосфатазу (Roche, Mississauga, ON, Canada) и ингибиторы протеаз (Roche). Лизаты разделяли на градиентном геле 4–12% Bis-Tris NuPAGE (каталожный номер NP0335BOX; Invitrogen). После разделения образцы переносили на нитроцеллюлозную мембрану и выявляли указанные Abs.Полосы были записаны с использованием системы инфракрасного изображения Odyssey (LI-COR Biosciences). Денситометрию выполняли путем измерения площади под графиком интенсивности с помощью ImageJ (версия 1.48; Национальные институты здравоохранения). Кратное увеличение передачи сигналов по сравнению с нестимулированными клетками рассчитывали как (интенсивность стимулированного состояния, нормализованная к контролю нагрузки) / (интенсивность нестимулированного состояния, нормализованная к контролю нагрузки) - 1.

    NK-антикриптококковый анализ уничтожения

    клеток YT были совместно культивированы с С.neoformans при соотношении Е: Т 200: 1 в 96-луночных планшетах с круглым дном (номер по каталогу 163320; Thermo Fisher Scientific). КОЕ определяли через 24 и 48 ч после инокуляции. Антикриптококковую активность первичных NK-клеток определяли путем сокультивирования с C. neoformans при соотношении E: T 100–400: 1 в 96-луночных планшетах с плоским дном. Планшеты центрифугировали при 400 × g в течение 5 минут для приведения в контакт NK и Cryptococcus . КОЕ определяли через 24 ч после прививки.В экспериментах, в которых использовался CPD 22, ингибитор добавляли к YT или первичным NK-клеткам одновременно с добавлением Cryptococcus . Жизнеспособность первичных NK-клеток и YT-клеток определяли путем окрашивания трипановым синим. Процент жизнеспособности рассчитывали следующим образом: (количество клеток, положительных по трипановому синему) / (общее количество клеток) × 100%. Концентрации CPD 22 оказывали минимальное влияние на жизнеспособность YT и первичных NK-клеток.

    Анализ конъюгата

    C. neoformans Штамм B3501 был помечен в соответствии с процедурой для C.gattii , как описано ранее Huston et al. (21). Вкратце, C. neoformans культивировали в течение ночи до экспоненциальной фазы пролиферации и метили 2,5 мкг / мл FITC на 10 8 клеток при 22 ° C в течение 10 мин. C. neoformans затем трижды промывали PBS. Клетки YT метили 5 мкл анти-CD11a PE-Cy5 Ab в течение 30 минут в инкубаторе CO 2 при 37 ° C. Для анализа конъюгата с участием МБЦД непосредственно перед инкубацией добавляли 2 мМ МБЦД или контроль PBS.Затем клетки YT и Cryptococcus инкубировали вместе в течение 10 мин при 37 ° C в 200 мкл полной среды. Клетки YT и Cryptococcus перемешивали пипеткой. Конъюгаты были обнаружены с помощью проточного цитометра Guava easyCyte (Cytosoft, версия 5.3; Guava Technologies, Millipore, Danvers, MA), и данные были проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Ashland, OR). Процент NK-клеток в конъюгатах с C. neoformans определяли следующим образом: (количество зеленых и красных событий) / (общее количество красных событий) × 100%.

    Осаждение Rac-GTP

    Клетки YT не стимулировали или стимулировали C. neoformans в течение 4 минут на водяной бане при 37 ° C. Клетки YT центрифугировали при 6000 × g в течение 30 с, и супернатант декантировали. Затем клетки YT лизировали, и Cryptococcus добавляли к нестимулированным условиям для контроля дополнительного объема Cryptococcus в стимулированных условиях. Затем Rac-GTP экстрагировали в соответствии с инструкциями производителя с двумя модификациями (17-10394; Millipore).Ингибитор протеазы (Roche) был заменен на лейпептин, и было использовано 5 мкл магнитных шариков, конъюгированных с p21-связывающим доменом (PBD) p21-активированной киназы (PAK). Аликвоты лизата целых клеток сохраняли перед добавлением шариков, покрытых PBD, чтобы можно было определить общие уровни Rac1. Активный Rac, который имел связанные шарики, покрытые PBD, измеряли с помощью иммуноблоттинга.

    siRNA knockdown

    siRNA, специфичная против β-цепи интегрина β1 (CD29) (5'-GGAACCCUUGCACAAGUGA-3 ') была приобретена у Invitrogen Life Technologies и Thermo Fisher Scientific.миРНК против интегрина β2 была приобретена у Thermo Fisher Scientific. Ненаправляющая миРНК была приобретена у Cell Signaling Technology. Клетки YT трансфицировали 2 мкг миРНК, специфичной против интегрина β1, интегрина β2 или контроля. Набор Nucleofector Kit V (Amaxa, Walkersville, MD) и Nucleofector II (Amaxa) использовали для проведения трансфекции с использованием программы Nucleofector O-017. Клетки YT после трансфекции переносили в 500 мкл предварительно нагретой полной среды, а затем помещали в инкубатор при 37 ° C на 10 мин.Затем клетки переносили в шестилуночные планшеты и оставляли для восстановления в течение 24 часов в инкубаторе с CO 2 при 37 ° C. Затем клетки использовали в анализе киллинга, как описано выше.

    Статистика

    GraphPad Prism (Ла-Хойя, Калифорния) использовалась для оценки статистики. Планки погрешностей представляют собой SEM. Данные были проанализированы односторонним дисперсионным анализом с поправкой Бонферрони. Значение p <0,05 считалось статистически значимым различием. Процентное снижение конъюгатов по сравнению с H 2 O или ДМСО анализировали с помощью программы статистики колонок в GraphPad Prism.В разные дни проводились разные эксперименты с использованием клеток от разных доноров.

    Этика

    Протоколы экспериментов были утверждены и выполнялись в соответствии с рекомендациями Совета по этике совместных медицинских исследований Университета Калгари (номер протокола REB15-0600).

    Результаты

    Cryptococcus активирует NKp30 и передает сигналы через SFK, но не через Rac1

    Предыдущие исследования показали, что SFK и Rac1 активируются в NK-клетках независимо и неизбыточно выше PI3K в ответ на Cryptococcus (12).Кроме того, NKp30 требовался для активации PI3K и уничтожения криптококков (10). Однако было неизвестно, вносит ли SFK или Rac1 вклад в NKp30-зависимую активацию PI3K. Чтобы определить, активируется ли SFK ниже NKp30, клетки YT совместно культивировали с Cryptococcus в присутствии ингибирующего Ab к NKp30 (клон 1C01) (10), а передачу сигналов SFK тестировали после криптококковой стимуляции (рис. 1A, 1B). . Иммуноблоттинг показал, что клетки YT, стимулированные C. neoformans , имели повышенное фосфорилирование SFK.Однако обработка 1C01 вызвала заметное снижение активации SFK в ответ на Cryptococcus по сравнению с Ab изотипа контроля, показывая, что NKp30 распознает Cryptococcus и активирует путь SFK (рис. 1A, 1B). Коинкубация NK-клеток с анти-CD56 не ингибирует активацию SFK (дополнительный рис. 1), предполагая, что путь активации SFK специфичен для NKp30. CD56 был выбран в качестве контроля, поскольку он является каноническим рецептором NK, который также приводит к активации SFK (22, 23).Чтобы определить, активируется ли Rac ниже NKp30, эксперимент повторяли, но активацию Rac оценивали по преципитации PAK с помощью PBD. Rac активировался в ответ на C. neoformans ; однако, в отличие от SFK, индуцированная Cryptococcus активация Rac1 не ингибировалась добавлением ингибирующих анти-NKp30 (рис. 1С). Это показывает, что NKp30 не стимулирует Rac1-опосредованный путь, и предполагает, что неидентифицированный рецептор NK активирует Rac1.

    РИСУНОК 1.

    Криптококк активирует SFK через NKp30. ( A ) Клетки YT предварительно инкубировали с различными концентрациями антител против NKp30 или контрольных антител, соответствующих изотипу. Клетки YT стимулировали Cryptococcus , и лизаты разделяли с помощью SDS-PAGE. Иммуноблоттинг был проведен для активированных SFK и Fyn. Fyn измеряли, чтобы гарантировать, что равные количества клеточного лизата были загружены в каждую лунку. Показан репрезентативный иммуноблот. ( B ) Денситометрия трех независимых иммуноблотов, выполненных в (A).( C ) Клетки YT обрабатывали антителами, ингибирующими против NKp30, или изотипическим контролем и стимулировали Cryptococcus . Клетки YT лизировали и активный Rac-GTP осаждали с использованием PBD PAK. (C) Активный Rac измеряли иммуноблоттингом. ( D ) Денситометрия данных в (C). Данные представляют собой среднее значение трех независимых экспериментов. Столбцы - это среднее значение ± стандартная ошибка среднего. * p <0,05. ISO, изотипический контроль Ab; Stim YT, клетки YT, стимулированные Cryptococcus .

    ILK требуется для Rac1-зависимого антикриптококкового ответа NK-клеток.

    Уничтожение опухоли NK-клеток зависит от активирующих рецепторов, таких как NKp30, и интегринов для оптимизации уничтожения.Поскольку интегрины могут активировать Rac1 в NK-клетках, мы исследовали, участвует ли передача сигналов интегрина в уничтожении криптококков (17, 24). Поскольку на NK-клетках присутствует большое количество интегринов, мы исследовали ILK как индикатор передачи сигналов интегрина. Мы стимулировали клетки YT с помощью Cryptococcus и исследовали активацию ILK с помощью иммуноблоттинга. Иммуноблоттинг для фосфорилированных ILK показал, что стимуляция C. neoformans индуцировала активацию ILK в клетках YT (фиг. 2A, 2B).Для определения пути ниже ILK использовали низкомолекулярный ингибитор CPD 22 для ингибирования активности ILK. CPD 22 ингибирует активацию ILK и фосфорилирование мишеней ILK. CPD 22 был описан как специфический ингибитор ILK, потому что фосфорилирование нижестоящих мишеней было восстановлено с введением конститутивно активной ILK, и при тестировании в высоких концентрациях против панели из 20 киназ CPD 22 не оказывал значительного влияния на активность 19 из этих киназ были эффективны против P70S6K только на 60% и не влияли на киназу фокальной адгезии (FAK) (25).CPD 22 был также специально выбран, поскольку было показано, что он ингибирует путь ILK → PI3K (25, 26). Клетки YT, обработанные CPD 22 и стимулированные Cryptococcus , показали пониженную активацию Rac1 по сравнению с контролем (фиг. 2C, 2D). Это показывает, что активность ILK необходима для активации пути Rac1.

    РИСУНОК 2.

    Cryptococcus индуцирует активность Rac1 посредством ILK-зависимого механизма. ( A ) Клетки YT стимулировали Cryptococcus в различные моменты времени, а затем лизировали.Лизаты подвергали иммуноблоттингу на p-ILK и β-актин. ( B ) Денситометрия, показывающая среднее значение трех независимых экспериментов. ( C ) Клетки YT предварительно инкубировали с 2 мкМ CPD 22 или контролем ДМСО в течение 1 часа. Затем клетки YT лизировали, и уровни активного Rac1 измеряли с помощью анализа PBD и иммуноблоттинга. ( D ) Денситометрия иммуноблотов, тестирующих активацию Rac1 в присутствии CPD 22. Столбцы представляют собой среднее значение трех независимых экспериментов ± SEM. * p <0,05, ** p <0.01. C + YT, клетки YT, стимулированные Cryptococcus ; n.s., не имеет значения.

    Активность ILK необходима для опосредованной NK-клетками криптококковой цитотоксичности

    Поскольку Rac1 участвует в уничтожении криптококков (12), а ILK активирует Rac1 (рис. 2), мы хотели проверить, требуется ли ILK для уничтожения криптококков. Мы предварительно инкубировали клетки YT или первичные NK-клетки с CPD 22 и измерили антикриптококковую активность, оценивая КОЕ. Мы обнаружили, что клетки YT и первичные NK-клетки, обработанные CPD 22, показали сниженную антикриптококковую активность (рис.3А, 3Б). Взятые вместе, эти данные показывают, что ILK и его сигнальный путь играют решающую роль в NK-опосредованном уничтожении антикриптококков.

    РИСУНОК 3. Активность

    ILK необходима для NK-опосредованного уничтожения криптококков. ( A ) Клетки YT культивировали совместно с Cryptococcus в присутствии CPD 22 или контроля. ( B ) Первичные NK-клетки совместно культивировали с Cryptococcus в присутствии CPD 22 или контроля. Столбцы - это средние значения для четырех экземпляров лунок в одном эксперименте ± SEM.Данные представляют из трех независимых экспериментов. ** p <0,01. CA, Cryptococcus, только ; CNK, первичные NK-клетки, стимулированные Cryptococcus ; Клетки CYT, YT, стимулированные Cryptococcus .

    Интегрины β1, но не интегрины β2 необходимы для NK-опосредованного уничтожения криптококков

    NK-клетки экспрессируют интегрины β1 и β2, хотя интегрины β2 являются преобладающими интегринами на NK-клетках, которые участвуют в передаче противоопухолевых цитотоксических сигналов (14, 27).Также известно, что интегрины β1 активируют передачу сигналов ILK (28). Поскольку интегрины β2 не участвуют в антикриптококковой активности, мы исследовали, подавляет ли ингибирование интегринов β1 антикриптококковую активность. Чтобы определить, участвуют ли интегрины β1 и не β2 в цитотоксичности, мы снизили экспрессию интегринов β1 и β2 с помощью siRNA (рис. 4A, 4B). Мы обнаружили, что клетки YT со сниженной экспрессией интегринов β1 имели пониженную антикриптококковую активность, тогда как клетки YT с пониженными интегринами β2 не испытывали изменений в антикриптококковой активности (рис.4С). Отсутствие вовлечения интегрина β2 согласуется с предыдущими литературными данными, которые показали, что блокирование Abs и siRNA LFA-1 (CD11a / CD18) не ингибирует убийство криптококков (16). Чтобы исключить потенциальные нецелевые эффекты нокдауна миРНК, мы повторили тест на киллинг криптококков с другой последовательностью миРНК интегрина β1 (рис. 4D, 4E), который дал аналогичные результаты. Мы также провели анализ антикриптококковой цитотоксичности в присутствии блокирующих антител против интегринов β1 (анти-CD29).Мы обнаружили, что блокирование интегринов β1 также снижает антикриптококковую активность YT-клеток и первичных NK-клеток по сравнению с контрольными Ab (рис. 4F, 4G). Эти находки показывают, что интегрины β1 необходимы для опосредованного NK клетками уничтожения антикриптококков, а интегрины β2 - нет.

    РИСУНОК 4.

    интегринов β1, но не β2 необходимы для уничтожения криптококков. ( A ) Клетки YT трансфицировали миРНК в интегрин β1, не нацеливающую миРНК, или ложно трансфицировали. Перед лизированием клетки оставляли на 24 часа.Лизаты разделяли с помощью SDS-PAGE и проводили иммуноблоттинг с mAb для интегрина β1. Иммуноблоттинг был выбран потому, что антитело интегрина β1 не рекомендовалось для проточной цитометрии. ( B ) Клетки YT трансфицировали миРНК в интегрин 2 или интегрин 1, не нацеливающую миРНК, или ложно трансфицировали. Клетки метили антителами против интегрина β2, конъюгированными с PE-Cy5. Поверхностную экспрессию интегрина β2 оценивали с помощью проточной цитометрии (показана средняя интенсивность флуоресценции). ( C ) Трансфицированные клетки YT совмещали с Cryptococcus в течение 48 часов, и антикриптококковую активность оценивали, высевая Cryptococcus на чашки с агаром Сабуро с декстрозой и подсчитывая КОЕ.Данные представляют из трех независимых экспериментов. Столбцы - это средние значения для четырех экземпляров лунок в одном эксперименте ± SEM. ( D ) Клетки YT трансфицировали siРНК другого интегрина β1, нацеленной на другую последовательность. Затем клетки YT выдерживали в течение 24 часов, как описано выше. Через 24 ч трансфицированные клетки YT метили антителами к интегрину β1, конъюгированными с PE-Cy5, которые подходят для проточной цитометрии. Поверхностную экспрессию интегрина β1 оценивали с помощью проточной цитометрии. ( E ) Клетки YT, которые были трансфицированы второй последовательностью миРНК против интегрина β1, совпадали с Cryptococcus в течение 48 часов, и антикриптококковая активность оценивалась путем посева Cryptococcus на чашки с агаром с декстрозой Сабуро и подсчета КОЕ.Данные являются репрезентативными для трех независимых трансфекций siRNA. Столбцы - это средние значения для четырех экземпляров лунок в одном эксперименте ± SEM. ( F ) Клетки YT совместно культивировали с Cryptococcus в присутствии ингибирующего антитела против интегрина β1 (CD29) или изотипического контроля в течение 48 часов. Cryptococcus затем высевали на чашки с агаром с декстрозой Сабуро и подсчитывали КОЕ. ( G ) Первичные NK-клетки совместно культивировали с Cryptococcus в присутствии ингибирующих антител к интегрину β1 или изотипического контроля.Данные представляют из трех независимых экспериментов. Столбцы - это средние значения для четырех экземпляров лунок в одном эксперименте ± SEM. * p <0,05, ** p <0,01. CA, Cryptococcus, только ; CNK, первичные NK-клетки, стимулированные Cryptococcus ; CYT, клетки YT, стимулированные Cryptococcus ; NT, не нацеливающая миРНК.

    Интегрины β1 необходимы для активации ILK в ответ на криптококковую стимуляцию

    Поскольку интегрин β1 и ILK участвуют в антикриптококковой активности, а интегрины β1, как известно, активируют ILK (28), мы исследовали, активируют ли интегрины β1 ILK в ответ на криптококковую стимуляцию. .Используя подавление siRNA интегрина β1, мы обнаружили, что снижение экспрессии CD29 вызывает снижение активации ILK в ответ на криптококковую стимуляцию (фиг. 5A, 5B). Это показывает, что Cryptococcus активирует интегрины β1, чтобы инициировать сигнальный путь ILK → Rac1.

    РИСУНОК 5. Интегрин

    β1 необходим для активации ILK. Клетки YT трансфицировали нецелевой миРНК или миРНК интегрина β1 или ложно трансфицировали. Обработанные клетки YT отдыхали в течение 24 часов. Затем клетки YT стимулировали Cryptococcus в течение 5 минут и лизировали.( A ) Лизаты разделяли с помощью SDS-PAGE и проводили иммуноблоттинг для p-ILK и β-актина. ( B ) Денситометрия представляет собой среднее значение трех независимых экспериментов ± SEM. ** p <0,01.

    β1 интегрины не требуются для образования конъюгата

    β1 интегрины в NK-клетках могут функционировать как рецепторы адгезии, так и усилители цитотоксических сигнальных путей (17, 29). Наши выводы о том, что ингибирование интегринов β1 ингибирует активацию ILK, может быть связано с активацией ILK интегрином β1 и увеличением пути цитотоксичности Rac1, или интегрины β1 могут усиливать адгезию между Cryptococcus и NK-клетками и способствовать связыванию другого рецептора с Cryptococcus , который затем отвечает за активацию ILK.Адгезия, опосредованная интегринами β1, зависит от липидных рафтов (30), и мы обнаружили, что разрушение липидных рафтов с помощью MBCD снижает образование конъюгатов NK-клеток Cryptococcus (Fig. 6A). Затем мы приступили к исследованию, ингибирует ли нокдаун интегринов β1 образование конъюгата. Нокдаун интегринов β1 снижал интенсивность флуоресценции антител к интегрину β1 на 90%. Мы обнаружили, что клетки YT со сниженной экспрессией интегрина β1 не имели сниженного образования конъюгата по сравнению с нецелевыми миРНК или ложно трансфицированными клетками (рис.6Б). Это предполагает, что интегрины β1 не являются основным фактором прилипания между NK-клетками и Cryptococcus . Следовательно, ингибирование передачи сигналов ILK, вероятно, является результатом нарушения передачи сигналов интегрина β1, а не снижения приверженности. Это согласуется с другими исследованиями, которые показали, что перекрестное связывание интегринов β1 на NK-клетках усиливает их цитотоксичность (17).

    РИСУНОК 6.

    Нокдаун интегринов β1 не влияет на образование криптококкового конъюгата NK. Клетки YT и Cryptococcus были помечены анти-CD11a и FITC соответственно.Затем клетки YT и Cryptococcus совместно культивировали в течение 25 минут при комнатной температуре. ( A ) Клетки YT предварительно инкубировали с MBCD, а затем сокультивировали с Cryptococcus . Конъюгаты анализировали методом проточной цитометрии. Столбики представляют собой среднее сопряженное образование трех независимых экспериментов ± SEM. ( B ) Клетки YT трансфицировали siRNA, не нацеливающей или нацеливающую на интегрин β1, а затем сокультивировали с Cryptococcus . Среднее образование конъюгата из трех независимых экспериментов ± SEM.* p <0,05. n.s., не имеет значения.

    Обсуждение

    В этой статье мы показали, что 1) антикриптококковый рецептор NKp30 активирует путь SFK, но не сигнальный путь Rac1, 2) интегрины β1 необходимы для опосредованного NK-клетками уничтожения криптококков, 3) интегрины β1 индуцируют ILK. → Путь передачи сигналов Rac1, необходимый для антикриптококковой активности, и 4) интегрины β1 не требуются для образования конъюгата между NK-клетками и Cryptococcus .Вместе эти результаты описывают новую роль интегринов β1 в активации антикриптококковой цитотоксичности, опосредованной NK-клетками.

    Мы обнаружили сходство, но также и важные различия между уничтожением грибков и уничтожением опухолей. Было показано, что для уничтожения антикриптококков необходимы сигнальные пути как SFK, так и Rac1 (11, 12). Мы обнаружили, что NKp30 отвечает за активацию SFK (рис. 1), а интегрины β1, как было обнаружено, активируют сигнальный путь ILK → Rac1 (рис. 2, 5).Это наблюдение напоминает убийство опухоли, поскольку требуются как активирующие NK рецепторы, так и передача сигналов интегрина. Однако активация Rac1 интегринами β1 представляет собой неканонический путь передачи сигналов интегрина.

    Предыдущие исследования предложили модель того, как передача сигналов приводит к активации Rac1. β1 интегрин-опосредованная активация ILK, вероятно, происходит через цитоплазматические части их β-цепей (rev. Ref. 31). Затем ILK действует как каркасный белок, который содержит анкириновые повторы, домены гомологии плекстреина и домены гомологии кальпонина (28).Парвины представляют собой семейство белков, которые взаимодействуют с ILK путем связывания с доменом гомологии кальпонина ILK и участвуют в сокращении гладких мышц, прикреплении актиновых микротрубочек, поляризации клеток и выживании клеток (32, 33). Интересно, что β-парвин взаимодействует с фактором обмена гуаниновых нуклеотидов α-PIX, который является активатором Rac1 (34). Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, участвует ли этот или какой-либо другой путь в уничтожении NK-клеток грибов.

    Различные классы интегринов по-разному передают сигнал при уничтожении криптококков, опосредованном NK-клетками, по сравнению с уничтожением опухолей.При уничтожении опухолей интегрины β2, в частности LFA-1, служат молекулами адгезии и сигнальными белками, которые приводят к поляризации гранул (15). Влияние LFA-1 на поляризацию гранул не зависит от передачи сигналов рецептора активации, например от FcγR или NKp30 (15). При уничтожении криптококков NKp30 активирует SFK (рис. 1), а интегрины β1 активируют передачу сигналов Rac1 (рис. 2, 5). SFK и Rac1 необходимы, чтобы независимо инициировать общий цитотоксический путь PI3K → Erk. Конвергенция рецепторных сигналов демонстрирует, как активирующие рецепторы и сигналы интегрина могут синергетически усиливать единственный антимикробный путь.Это отличается от уничтожения опухолей, когда рецепторы активации и интегрины контролируют независимые компоненты цитотоксичности. LFA-1 также усиливает адгезию NK-клеток к опухолевым мишеням (35), но во время уничтожения криптококков интегрины β1 не требуются для адгезии, поскольку потеря интегринов β1 не влияет на образование конъюгатов (рис. 6). Эти данные демонстрируют новую роль интегринов β1 в цитотоксичности NK.

    Отсутствие участия интегринов β1 и β2 в образовании конъюгата с C.neoformans (16) может объяснить, почему конъюгат между Cryptococcus и NK-клетками слабее и его образование задерживается по сравнению с уничтожением опухоли (36). Это отсутствие адгезии, опосредованной интегрином, может препятствовать передаче цитотоксических сигналов, потому что было бы легче преждевременно разрушить конъюгат.

    Интегрины β1 не являются каноническими прямыми цитотоксическими рецепторами. Скорее, они обычно участвуют в адгезии NK-клеток к внеклеточному матриксу (37). Однако перекрестное сшивание интегринов β1 увеличивает продукцию NK-клетками IFN-γ (38) и IL-8 (27).Также было показано, что сшивание интегринов β1 усиливает Ab-зависимую клеточную цитотоксичность (17). В этой статье мы продемонстрировали, что активация интегринов β1 криптококковыми мишенями необходима для антикриптококковой активности, инициированной NCR, которая аналогична функции LFA-1 в уничтожении опухолей. Поскольку интегрины LFA-1 и β2 не участвуют в уничтожении криптококков, заманчиво полагать, что интегрины β1 и β2 обладают избыточностью цитотоксичности NK-клеток. В будущих экспериментах можно будет изучить эффективность цитотоксической передачи сигналов интегрина β1 по сравнению с интегринами β2.Поскольку противогрибковая активность NK медленнее, чем уничтожение опухолей, цитотоксический сигнал интегрина β1 может быть менее эффективным, чем интегрины β2.

    Наше исследование показало, что криптококковая стимуляция активирует передачу сигналов интегрина β1; однако ответственный лиганд неясен. Лиганды интегрина β1 в основном представляют собой матричные белки, такие как фибронектин, и молекулы адгезии, такие как VCAM1 (39). Однако одно исследование показало, что интегрины β1 на полиморфно-ядерных лейкоцитах могут связываться с грибковым β-глюканом PGG-глюканом (40).Другая возможность заключается в том, что криптококковая стимуляция изменяет другую молекулу поверхности NK-клеток, которая, в свою очередь, стимулирует интегрины β1 во взаимодействии cis . В этом случае нокдаун интегринов β1 не повлияет на образование криптококкового конъюгата NK, поскольку интегрины β1 не связываются с криптококковым лигандом. Интегрины β1 продемонстрировали способность к образованию цис- взаимодействий (41, 42), а цитотоксичность NK-клеток может регулироваться цис- взаимодействиями (43). Следовательно, в будущем потребуются исследования для изучения криптококковых лигандов или цис- взаимодействий, которые необходимы для активации интегринов β1.

    В заключение, интегрин β1 активирует Rac-опосредованный путь цитотоксичности, необходимый для опосредованного NK-клетками уничтожения Cryptococcus . Обнаружение того, что интегрин β1 обеспечивает сигнал активации, а не усиливает адгезию, подчеркивает его новую роль в уничтожении грибков: он функционирует как рецептор молекулярного паттерна, ассоциированный с патогенами, а не как молекула адгезии.

    Раскрытие информации

    У авторов нет финансового конфликта интересов.

    Сноски

    • Эта работа была поддержана стипендией Ассоциации легких, Альберта и Северо-Западный Запад (Р.F.X.). C.H.M. был поддержан профессором Джесси Боуден Ллойд. Эта работа также была поддержана Канадским институтом исследований в области здравоохранения, грант 365812 (C.H.M.).

    • Онлайн-версия статьи содержит дополнительные материалы.

    • Сокращения, использованные в этой статье:

      ATCC
      Американская коллекция типовых культур
      ILK
      киназа, связанная с интегрином
      MBCD
      метил-β-циклодекстран
      NCR
      PA
      p21-активированная киназа
      PBD
      p21-связывающий домен
      SFK
      киназа семейства Src
      siRNA
      малая интерферирующая РНК.
    • Получено 2 января 2018 г.
    • Принято 8 августа 2018 г.
    • Авторское право © 2018 Американская ассоциация иммунологов, Inc.

    Иммунотерапия злокачественных заболеваний на основе NK-клеток

  • 1

    Borghaei H, Smith MR, Campbell KS. Иммунотерапия рака. Eur J Pharmacol 2009; 625 : 41–54.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 2

    Беккер Ю.Молекулярные иммунологические подходы к биотерапии рака человека - обзор, гипотеза и последствия. Anticancer Res 2006; 26 : 1113–1134.

    CAS PubMed Google ученый

  • 3

    Catchpole B, Gould SM, Kellett-Gregory LM, Dobson JM. Иммуносупрессивные цитокины в регионарном лимфатическом узле собаки, страдающей злокачественной меланомой полости рта. J Small Anim Pract 2002; 43 : 464–467.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 4

    Zagury D, Gallo RC. Иммунная терапия против цитокиновых антител: современное состояние и перспективы. Drug Discov Today 2004; 9 : 72–81.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 5

    Morse MA, Mosca PJ, Clay TM, Lyerly HK. Созревание дендритных клеток в стратегиях активной иммунотерапии. Экспертное мнение Biol Ther 2002; 2 : 35–43.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 6

    Ямагути Т., Сакагучи С. Регуляторные Т-клетки в иммунном надзоре и лечении рака. Semin Cancer Biol 2006; 16 : 115–123.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 7

    Salih HR, Goehlsdorf D, Steinle A.Высвобождение молекул MICB опухолевыми клетками: механизм и растворимый MICB в сыворотках больных раком. Hum Immunol 2006; 67 : 188–195.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 8

    Salih HR, Rammensee HG, Steinle A. Передний край: подавление MICA в опухолях человека с помощью протеолитического шеддинга. J Immunol 2002; 169 : 4098–4102.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 9

    Waldhauer I, Steinle A.Протеолитическое высвобождение растворимого UL16-связывающего белка 2 из опухолевых клеток. Cancer Res 2006; 66 : 2520–2526.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 10

    Green DR, Bissonnette RP, Glynn JM, Shi Y. Индуцированный активацией апоптоз лимфоидной системы. Semin Immunol 1992; 4 : 379–388.

    CAS PubMed Google ученый

  • 11

    Saff RR, Spanjaard ES, Hohlbaum AM, Marshak-Rothstein A.Вызванная активацией гибель клеток ограничивает эффекторную функцию опухолеспецифических Т-лимфоцитов CD4. J Immunol 2004; 172 : 6598–6606.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 12

    Baxevanis CN, Perez SA, Papamichail M. Иммунотерапия рака. Crit Rev Clin Lab Sci 2009; 46 : 167–189.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 13

    Zhao E, Xu H, Wang L, Kryczek I, Wu K, Hu Y et al .Костный мозг и контроль иммунитета. Cell Mol Immunol 2012; 9 : 11–19.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 14

    Херберман РБ, Нанн М.Э., Лаврин Д.Х. Естественная цитотоксическая реактивность лимфоидных клеток мыши против аллогенных опухолей сингенной кислоты. I. Распределение реактивности и специфичности. Int J Cancer 1975; 16 : 216–229.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 15

    Kiessling R, Klein E, Wigzell H.«Естественные» клетки-киллеры у мышей. I. Цитотоксические клетки со специфичностью в отношении клеток лейкемии Молони мышей. Специфичность и распределение по генотипу. Eur J Immunol 1975; 5 : 112–117.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 16

    Цзян X, Чен Y, Пэн Х, Тянь З. Одна линия или параллельные линии: дифференцировка NK-клеток, вызванная T-bet и Eomes. Cell Mol Immunol 2012; 9 : 193–194.

    PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 17

    di Santo JP. Пути развития естественных клеток-киллеров: вопрос баланса. Annu Rev Immunol 2006; 24 : 257–286.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 18

    Gregoire C, Chasson L, Luci C, Tomasello E, Geissmann F, Vivier E et al .Торговля естественными клетками-киллерами. Immunol Rev 2007; 220 : 169–182.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 19

    Купер М.А., Фенигер Т.А., Калиджури Массачусетс. Биология естественных подмножеств клеток-киллеров человека. Trends Immunol 2001; 22 : 633–640.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 20

    Anfossi N, Andre P, Guia S, Falk CS, Roetynck S, Stewart CA et al .Образование человеческих NK-клеток ингибирующими рецепторами для MHC класса I. Иммунитет 2006; 25 : 331–342.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 21

    Ferlazzo G, Munz C. Компартменты NK-клеток и их активация дендритными клетками. J Immunol 2004; 172 : 1333–1339.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 22

    Roder JC, Pross HF.Биология естественной клетки-убийцы человека. J Clin Immunol 1982; 2 : 249–263.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 23

    Cerwenka A, Lanier LL. Естественные клетки-убийцы, вирусы и рак. Nat Rev Immunol 2001; 1 : 41–49.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 24

    Миллер Дж.Биология естественных клеток-киллеров при раке, инфекциях и беременности. Exp Hematol 2001; 29 : 1157–1168.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 25

    Vitale M, Sivori S, Pende D, Augugliaro R, di Donato C, Amoroso A et al . Физическая и функциональная независимость рецепторов естественных киллеров (NK) p70 и p58 для HLA класса I: их роль в определении различных групп аллореактивных клонов NK-клеток. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93 : 1453–1457.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 26

    Вивье Э, Томаселло Э, Баратин М, Вальцер Т., Уголини С. Функции естественных клеток-киллеров. Nat Immunol 2008; 9 : 503–510.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 27

    Кумар В., Макнерни МЭ.Новое «я»: независимая от MHC-класса I самотолерантность естественных клеток-киллеров. Nat Rev Immunol 2005; 5 : 363–374.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 28

    Karlhofer FM, Ribaudo RK, Yokoyama WM. Аллоантигенная специфичность MHC класса I для Ly-49 + IL-2-активированных естественных клеток-киллеров. Nature 1992; 358 : 66–70.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 29

    Colonna M, Samaridis J.Клонирование членов суперсемейства иммуноглобулинов, связанных с распознаванием HLA-C и HLA-B естественными клетками-киллерами человека. Science 1995; 268 : 405–408.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 30

    Уолцер Т., Далод М., Роббинс С.Х., Зитвогель Л., Вивье Э. Естественные клетки-киллеры и дендритные клетки: «объединение силы». Кровь 2005; 106 : 2252–2258.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 31

    Waldhauer I, Steinle A. NK-клетки и иммунный надзор за раком. Онкоген 2008; 27 : 5932–5943.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 32

    Ву Л., Чжан Ц., Чжан Дж. HMBOX1 негативно регулирует функции NK-клеток, подавляя сигнальный путь NKG2D / DAP10. Cell Mol Immunol 2011; 8 : 433–440.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 33

    Пауст С., фон Андриан У. Память естественных клеток-киллеров. Nat Immunol; 12 : 500–508.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 34

    Sun JC, Lanier LL. Развитие, гомеостаз и функция NK-клеток: параллели с CD8 + T-клетками. Nat Rev Immunol 2011; 11 : 645–657.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 35

    Херберман РБ, Холден ХТ. Естественный клеточный иммунитет. Adv Cancer Res 1978; 27 : 305–377.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 36

    Riccardi C, Santoni A, Barlozzari T, Puccetti P, Herberman RB. In vivo естественная реактивность мышей против опухолевых клеток. Int J Cancer 1980; 25 : 475–486.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 37

    Барлоццари Т., Рейнольдс К.В., Херберман РБ. In vivo роль естественных клеток-киллеров: участие крупных гранулярных лимфоцитов в клиренсе опухолевых клеток у крыс, обработанных anti-asialo GM1. J Immunol 1983; 131 : 1024–1027.

    CAS PubMed Google ученый

  • 38

    Hayakawa Y, Smyth MJ. Распознавание врожденного иммунитета и подавление опухолей. Adv Cancer Res 2006; 95 : 293–322.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 39

    Kim S, Iizuka K, Aguila HL, Weissman IL, Yokoyama WM. In vivo активности естественных клеток-киллеров, выявленные мышами с дефицитом естественных клеток-киллеров. Proc Natl Acad Sci USA 2000; 97 : 2731–2736.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 40

    Смит М.Дж., Хаякава Ю., Такеда К., Ягита Х. Новые аспекты наблюдения за естественными клетками-киллерами и лечения рака. Nat Rev Cancer 2002; 2 : 850–861.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 41

    Wu J, Lanier LL.Естественные клетки-киллеры и рак. Adv Cancer Res 2003; 90 : 127–156.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 42

    Имаи К., Мацуяма С., Мияке С., Суга К., Накачи К. Естественная цитотоксическая активность лимфоцитов периферической крови и заболеваемость раком: 11-летнее наблюдение среди населения в целом. Ланцет 2000; 356 : 1795–1799.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 43

    Coca S, Perez-Piqueras J, Martinez D, Colmenarejo A, Saez MA, Vallejo C et al .Прогностическое значение внутриопухолевых естественных киллеров у пациентов с колоректальной карциномой. Cancer 1997; 79 : 2320–2328.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 44

    Ishigami S, Natsugoe S, Tokuda K, Nakajo A, Che X, Iwashige H et al . Прогностическое значение внутриопухолевых естественных киллеров при раке желудка. Cancer 2000; 88 : 577–583.

    CAS Статья Google ученый

  • 45

    Villegas FR, Coca S, Villarrubia VG, Jimenez R, Chillon MJ, Jareno J et al . Прогностическое значение инфильтрации опухоли подмножества естественных киллеров CD57 у пациентов с плоскоклеточным раком легкого. Рак легких 2002; 35 : 23–28.

    PubMed Статья Google ученый

  • 46

    Ljunggren HG, Malmberg KJ.Перспективы использования NK-клеток в иммунотерапии рака человека. Nat Rev Immunol 2007; 7 : 329–339.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 47

    Ljunggren HG, Karre K. Резистентность хозяина направлена ​​избирательно против вариантов лимфомы с дефицитом Н-2. Анализ механизма. J Exp Med 1985; 162 : 1745–1759.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 48

    Karre K, Ljunggren HG, Piontek G, Kiessling R.Селективное отторжение вариантов H-2-дефицитной лимфомы предполагает альтернативную стратегию иммунной защиты. Nature 1986; 319 : 675–678.

    CAS Статья Google ученый

  • 49

    Ljunggren HG, Karre K. В поисках «пропавшего я»: молекулы MHC и распознавание NK-клеток. Иммунол Сегодня 1990; 11 : 237–244.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 50

    van den Broek MF, Kagi D, Zinkernagel RM, Hengartner H.Перфорин-зависимость опосредованного естественными клетками-киллерами контроля опухолей in vivo . Eur J Immunol 1995; 25 : 3514–3516.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 51

    Смит М.Дж., Келли Дж.М., Бакстер АГ, Корнер Х., Седжвик Дж.Д. Существенная роль фактора некроза опухоли в опосредованном естественными клетками-киллерами отторжении опухоли в брюшине. J Exp Med 1998; 188 : 1611–1619.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 52

    Смит MJ, Thia KY, Cretney E, Kelly JM, Snook MB, Forbes CA и др. . Перфорин вносит основной вклад в контроль метастазов опухоли NK-клетками. J Immunol 1999; 162 : 6658–6662.

    CAS PubMed Google ученый

  • 53

    Каги Д., Ледерманн Б., Бурки К., Зайлер П., Одерматт Б., Олсен К.Дж. и др. .Цитотоксичность, опосредованная Т-клетками и естественными клетками-киллерами, значительно снижена у перфорин-дефицитных мышей. Nature 1994; 369 : 31–37.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 54

    Трапани Дж. А., Дэвис Дж., Саттон В. Р., Смит М. Дж.. Проапоптотические функции цитотоксических компонентов гранул лимфоцитов in vitro и in vivo . Curr Opin Immunol 2000; 12 : 323–329.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 55

    Bradley M, Zeytun A, Rafi-Janajreh A, Nagarkatti PS, Nagarkatti M. Роль спонтанной и индуцированной интерлейкином-2 активности естественных клеток-киллеров в цитотоксичности и отторжении опухолевых клеток Fas + и Fas-. Кровь 1998; 92 : 4248–4255.

    CAS PubMed Google ученый

  • 56

    Screpanti V, Wallin RP, Ljunggren HG, Grandien A.Центральная роль апоптоза, опосредованного рецепторами смерти, в отторжении опухолей NK-клетками. J Immunol 2001; 167 : 2068–2073.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 57

    Каягаки Н., Ямагути Н., Накаяма М., Такеда К., Акиба Х., Цуцуи Н. и др. . Экспрессия и функция TNF-связанного лиганда, индуцирующего апоптоз, на мышиных активированных NK-клетках. J Immunol 1999; 163 : 1906–1913.

    CAS PubMed Google ученый

  • 58

    Такеда К., Хаякава Ю., Смит М.Дж., Каягаки Н., Ямагути Н., Какута С. и др. . Участие лиганда, индуцирующего апоптоз, связанного с фактором некроза опухоли, в наблюдении за метастазами опухоли естественными клетками-киллерами печени. Nat Med 2001; 7 : 94–100.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 59

    Cretney E, Takeda K, Yagita H, Glaccum M, Peschon JJ, Smyth MJ.Повышенная восприимчивость к инициированию опухоли и метастазированию у мышей с дефицитом лиганда, индуцирующего апоптоз TNF. J Immunol 2002; 168 : 1356–1361.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 60

    Сутлу Т., Алиджи Э. Иммунотерапия рака на основе естественных клеток-киллеров: текущие взгляды и перспективы на будущее. J Intern Med 2009; 266 : 154–181.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 61

    Street SE, Cretney E, Smyth MJ.Активность перфорина и гамма-интерферона независимо контролирует инициирование опухоли, рост и метастазирование. Кровь 2001; 97 : 192–197.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 62

    Смит MJ, Crowe NY, Pellicci DG, Kyparissoudis K, Kelly JM, Takeda K et al . Последовательная продукция гамма-интерферона NK1.1 (+) Т-клетками и естественными клетками-киллерами имеет важное значение для антиметастатического эффекта альфа-галактозилцерамида. Кровь 2002; 99 : 1259–1266.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 63

    Cifone MG, D’Alo S, Parroni R, Millimaggi D, Biordi L, Martinotti S et al . Активированные интерлейкином-2 естественные клетки-киллеры крыс экспрессируют индуцибельную синтазу оксида азота, которая способствует цитотоксической функции и выработке гамма-интерферона. Кровь 1999; 93 : 3876–3884.

    CAS PubMed Google ученый

  • 64

    Furuke K, Burd PR, Horvath-Arcidiacono JA, Hori K, Mostowski H, Bloom ET.NK-клетки человека экспрессируют эндотелиальную синтазу оксида азота, и оксид азота защищает их от гибели клеток, вызванной активацией, регулируя экспрессию TNF-альфа. J Immunol 1999; 163 : 1473–1480.

    CAS PubMed Google ученый

  • 65

    Talmadge JE, Phillips H, Schindler J, Tribble H, Pennington R. Систематическое доклиническое исследование терапевтических свойств рекомбинантного человеческого интерлейкина 2 для лечения метастатического заболевания. Cancer Res 1987; 47 : 5725–5732.

    CAS PubMed Google ученый

  • 66

    Trinchieri G. Интерлейкин-12: цитокин на границе воспаления и иммунитета. Adv Immunol 1998; 70 : 83–243.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 67

    Wiltrout RH, Herberman RB, Zhang SR, Chirigos MA, Ortaldo JR, Green KM, Jr и др. .Роль связанных с органами NK-клеток в снижении образования экспериментальных метастазов в легких и печени. J Immunol 1985; 134 : 4267–4275.

    CAS PubMed Google ученый

  • 68

    Кодама Т., Такеда К., Симозато О, Хаякава Ю., Ацута М., Кобаяси К. и др. . Цитотоксичность перфорин-зависимых NK-клеток достаточна для антиметастатического действия IL-12. Eur J Immunol 1999; 29 : 1390–1396.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 69

    Смит MJ, Cretney E, Takeda K, Wiltrout RH, Sedger LM, Kayagaki N et al . Лиганд, индуцирующий апоптоз, связанный с фактором некроза опухоли (TRAIL), вносит вклад в интерферон-гамма-зависимую защиту естественных клеток-киллеров от метастазов опухоли. J Exp Med 2001; 193 : 661–670.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 70

    Яо Л., Сгадари К., Фуруке К., Блум Е.Т., Теруя-Фельдштейн Дж., Тосато Г.Вклад естественных киллеров в ингибирование ангиогенеза интерлейкином-12. Кровь 1999; 93 : 1612–1621.

    CAS PubMed Google ученый

  • 71

    Bryceson YT, March ME, Ljunggren HG, Long EO. Активация, коактивация и костимуляция покоящихся естественных клеток-киллеров человека. Immunol Rev 2006; 214 : 73–91.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 72

    Мартин-Фонтеча А., Томсен Л.Л., Бретт С., Жерар С., Липп М., Ланзавеккья А. и др. .Индуцированное привлечение NK-клеток к лимфатическим узлам обеспечивает IFN-гамма для прайминга T (H) 1. Nat Immunol 2004; 5 : 1260–1265.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 73

    Моцикат Р., Браумюллер Х., Гуми А., Эгетер О., Циглер Х., Ройш У. и др. . Природные клетки-киллеры, активированные MHC класса I (низкий), нацелены на первичные дендритные клетки, чтобы вызвать защитные ответы Т-лимфоцитов CD8. Иммунитет 2003; 19 : 561–569.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 74

    Келли Дж. М., Дарси П. К., Маркби Дж. Л., Годфри Д. И., Такеда К., Ягита Г. и др. . Индукция опухолеспецифической Т-клеточной памяти путем отторжения опухоли, опосредованного NK-клетками. Nat Immunol 2002; 3 : 83–90.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 75

    Nguyen-Pham TN, Yang DH, Nguyen TA, Lim MS, Hong CY, Kim MH et al .Оптимальные условия культивирования для создания дендритных клеток, индуцированных естественными клетками-киллерами, для иммунотерапии рака. Cell Mol Immunol 2012; 9 : 45–53.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 76

    Piccioli D, Sbrana S, Melandri E, Valiante NM. Контактно-зависимая стимуляция и ингибирование дендритных клеток естественными клетками-киллерами. J Exp Med 2002; 195 : 335–341.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 77

    Gerosa F, Baldani-Guerra B, Nisii C, Marchesini V, Carra G, Trinchieri G. Взаимное активирующее взаимодействие между естественными клетками-киллерами и дендритными клетками. J Exp Med 2002; 195 : 327–333.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 78

    Маки Дж., Кристал Дж., Догерти Дж., Такей Ф., Клингеманн Г. Г..Индукция чувствительности к NK-опосредованной цитотоксичности при лечении TNF-альфа: возможная роль ICAM-3 и CD44. Leukemia 1998; 12 : 1565–1572.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 79

    Costello RT, Sivori S, Marcenaro E, Lafage-Pochitaloff M, Mozziconacci MJ, Reviron D et al . Дефектная экспрессия и функция рецепторов, запускающих естественные клетки-киллеры, у пациентов с острым миелоидным лейкозом. Кровь 2002; 99 : 3661–3667.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 80

    Фараг СС, Калиджури Массачусетс. Цитокиновая модуляция врожденной иммунной системы при лечении лейкемии и лимфомы. Adv Pharmacol 2004; 51 : 295–318.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 81

    Смит MJ, Cretney E, Kershaw MH, Hayakawa Y.Цитокины в противораковом иммунитете и иммунотерапии. Immunol Rev 2004; 202 : 275–293.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 82

    Бекнелл Б., Калиджури, Массачусетс. Интерлейкин-2, интерлейкин-15 и их роль в естественных киллерных клетках человека. Adv Immunol 2005; 86 : 209–239.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 83

    Розенберг С.А.Интерлейкин-2 и разработка иммунотерапии для лечения онкологических больных. Cancer J Sci Am 2000; Дополнение 1 S2 – S7.

  • 84

    Коломбо МП, Тринкьери Дж. Интерлейкин-12 в противоопухолевом иммунитете и иммунотерапии. Cytokine Growth Factor Rev 2002; 13 : 155–168.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 85

    Розенберг С.А. Иммунотерапия рака путем системного введения лимфоидных клеток плюс интерлейкин-2. J Biol Response Mod 1984; 3 : 501–511.

    CAS PubMed Google ученый

  • 86

    Ghiringhelli F, Menard C, Terme M, Flament C, Taieb J, Chaput N et al . CD4 + CD25 + регуляторные Т-клетки ингибируют функции естественных клеток-киллеров зависимым от трансформирующего фактора роста бета образом. J Exp Med 2005; 202 : 1075–1085.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 87

    Rodella L, Zamai L, Rezzani R, Artico M, Peri G, Falconi M и др. .Интерлейкин 2 и интерлейкин 15 по-разному предрасполагают естественные клетки-киллеры к апоптозу, опосредованному эндотелиальными и опухолевыми клетками. Br J Haematol 2001; 115 : 442–450.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 88

    Hayakawa M, Hatano T, Ogawa Y, Gakiya M, Ogura H, Osawa A. Лечение запущенной почечно-клеточной карциномы с использованием регионарного артериального введения лимфокин-активированных киллеров в сочетании с низкими дозами rIL-2. Урол Инт 1994; 53 : 117–124.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 89

    Боярди А., Сильвани А., Руффини П.А., Риволтини Л., Пармиани Г., Броджи Г. и др. . Локорегиональная иммунотерапия рекомбинантным интерлейкином-2 и адгезивными лимфокин-активированными клетками-киллерами (A-LAK) у пациентов с рецидивирующей глиобластомой. Cancer Immunol Immunother 1994; 39 : 193–197.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 90

    Hayes RL, Koslow M, Hiesiger EM, Hymes KB, Hochster HS, Moore EJ et al .Повышение долговременной выживаемости после внутриполостных интерлейкин-2 и лимфокин-активированных клеток-киллеров у взрослых с рецидивирующей злокачественной глиомой. Cancer 1995; 76 : 840–852.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 91

    Keilholz U, Scheibenbogen C, Brado M, Georgi P, Maclachlan D, Brado B et al . Региональная адоптивная иммунотерапия интерлейкином-2 и лимфокин-активированными киллерами (LAK) при метастазах в печень. Eur J Cancer A 1994; 30A : 103–105

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 92

    Ma HL, Whitters MJ, Konz RF, Senices M, Young DA, Grusby MJ et al . IL-21 активирует как врожденный, так и адаптивный иммунитет, вызывая мощные противоопухолевые ответы, требующие перфорина, но не зависящие от IFN-гамма. J Immunol 2003; 171 : 608–615.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 93

    Берзофский Я.А., Алерс Я.Д., Беляков ИМ.Стратегии разработки и оптимизации вакцин нового поколения. Nat Rev Immunol 2001; 1 : 209–219.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 94

    Кобаяши Х., Дюбуа С., Сато Н., Сабзевари Х., Сакаи Ю., Вальдманн Т.А. и др. . Роль транс-клеточной презентации IL-15 в активации киллинга, опосредованного NK-клетками, что приводит к усилению иммунного надзора за опухолью. Кровь 2005; 105 : 721–727.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 95

    Замай Л., Понти С., Мирандола П., Гобби Г., Папа С., Галеотти Л. и др. . NK-клетки и рак. J Immunol 2007; 178 : 4011–4016.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 96

    Escudier B, Farace F, Angevin E, Charpentier F, Nitenberg G, Triebel F et al .Иммунотерапия интерлейкином-2 (IL2) и лимфокин-активированными естественными клетками-киллерами: улучшение клинических ответов у пациентов с метастатической почечно-клеточной карциномой, ранее получавших лечение IL2. Eur J Cancer A 1994; 30A : 1078–1083

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 97

    Исикава Э., Цубои К., Сайджо К., Харада Х., Такано С., Нос Т. и др. . Аутологичная терапия естественными клетками-киллерами для рецидивирующей злокачественной глиомы человека. Anticancer Res 2004; 24 : 1861–1871.

    PubMed Google ученый

  • 98

    deMagalhaes-Silverman M, Donnenberg A, Lembersky B, Elder E, Lister J, Rybka W et al . Посттрансплантационная адоптивная иммунотерапия активированными естественными клетками-киллерами у пациентов с метастатическим раком молочной железы. J Immunother 2000; 23 : 154–160.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 99

    Miller JS, Tessmer-Tuck J, Pierson BA, Weisdorf D, McGlave P, Blazar BR et al .Низкие дозы подкожного интерлейкина-2 после аутотрансплантации генерируют устойчивую активность in vivo естественных киллерных клеток. Biol Blood Marrow Transplant 1997; 3 : 34–44.

    CAS PubMed Google ученый

  • 100

    Burns LJ, Weisdorf DJ, DeFor TE, Vesole DH, Repka TL, Blazar BR et al . Иммунотерапия на основе ИЛ-2 после аутотрансплантации лимфомы и рака груди индуцирует активацию иммунной системы и высвобождение цитокинов: исследование фазы I / II. Пересадка костного мозга 2003; 32 : 177–186.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 101

    Ruggeri L, Capanni M, Urbani E, Perruccio K, Shlomchik WD, Tosti A et al . Эффективность аллореактивности донорских естественных клеток-киллеров в несоответствующих гемопоэтических трансплантатах. Science 2002; 295 : 2097–2100.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 102

    Ruggeri L, Mancusi A, Perruccio K, Burchielli E, Martelli MF, Velardi A.Естественная аллореактивность клеток-киллеров для терапии лейкемии. J Immunother 2005; 28 : 175–182.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 103

    Миллер Дж.С., Суаньер Ю., Паноскальцис-Мортари А., Макнирни С.А., Юн Г.Х., Фауч СК и др. . Успешный адоптивный перенос и экспансия in vivo гаплоидентичных NK-клеток человека у больных раком. Кровь 2005; 105 : 3051–3057.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 104

    Илиопулу Э.Г., Контоуракис П., Карамузис М.В., Дуфексис Д., Ардаванис А., Баксеванис CN и др. . Испытание фазы I адоптивного переноса аллогенных естественных клеток-киллеров у пациентов с распространенным немелкоклеточным раком легкого. Cancer Immunol Immunother 2010; 59 : 1781–1789.

    PubMed Статья Google ученый

  • 105

    Лундквист А., Маккой Дж. П., Самсел Л., Чайлдс Р.Снижение РТПХ и усиление противоопухолевых эффектов после адоптивной инфузии аллореактивных Ly49-несовместимых NK-клеток от согласованных с MHC доноров. Кровь 2007; 109 : 3603–3606.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 106

    Sconocchia G, Titus JA, Segal DM. Сигнальные пути, регулирующие CD44-зависимый цитолиз в естественных клетках-киллерах. Кровь 1997; 90 : 716–725.

    CAS PubMed Google ученый

  • 107

    Яннелло А., Ахмад А. Роль антителозависимой клеточной цитотоксичности в эффективности терапевтических противораковых моноклональных антител. Cancer Metastasis Rev 2005; 24 : 487–499.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 108

    Алдерсон К.Л., Сондел PM. Клиническая терапия рака NK-клетками посредством антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности . J Biomed Biotechnol 2011; 2011 : 379123

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google ученый

  • 109

    Соркин Л.С., Отто М., Болдуин В.М. 3-й, Вейл Э., Гиллис С.Д., Хандгретингер Р. и др. . Анти-GD (2) с точечной мутацией FC снижает фиксацию комплемента и снижает вызванную антителами аллодинию. Pain 2010; 149 : 135–142.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 110

    Navid F, Santana VM, Barfield RC.Терапия антителами против GD2 для опухолей, экспрессирующих GD2. Текущие цели по лекарствам от рака 2010; 10 : 200–209.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 111

    Horton HM, Bernett MJ, Pong E, Peipp M, Karki S, Chu SY et al . Сильная активность in vitro, и in vivo, моноклонального антитела против CD19, сконструированного с помощью Fc, против лимфомы и лейкемии. Cancer Res 2008; 68 : 8049–8057.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 112

    Залевский Дж., Леунг И.В., Карки С., Чу С.Ю., Жуковский Е.А., Десьярле Дж. Р. и др. . Влияние Fc-инженерии на антитело к CD19: повышенное сродство к рецептору Fcgamma усиливает очищение В-клеток у нечеловеческих приматов. Кровь 2009; 113 : 3735–3743.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 113

    Parihar R, Dierksheide J, Hu Y, Carson WE.IL-12 усиливает ответ цитокинов естественных клеток-киллеров на опухолевые клетки, покрытые Ab. J Clin Invest 2002; 110 : 983–992.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 114

    Парихар Р., Наделла П., Льюис А., Дженсен Р., де Хофф К., Диркшейде Дж. Э. и др. . Исследование фазы I интерлейкина 12 с трастузумабом у пациентов со злокачественными новообразованиями со сверхэкспрессией рецептора 2 эпидермального фактора роста человека: анализ устойчивого производства интерферона гамма в подгруппе пациентов. Clin Cancer Res 2004; 10 : 5027–5037.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 115

    Ортальдо JR, Вудхаус C, Морган AC, Херберман РБ, Череш Д.А., Райсфельд Р. Анализ эффекторных клеток на человеческую антителозависимую клеточную цитотоксичность с мышиными моноклональными антителами. J Immunol 1987; 138 : 3566–3572.

    CAS PubMed Google ученый

  • 116

    Schultz KR, Klarnet JP, Peace DJ, Cheever MA, Badger CC, Bernstein ID et al .Терапия мышиной лимфомы моноклональными антителами: повышенная эффективность за счет одновременного введения интерлейкина 2 или лимфокин-активированных клеток-киллеров. Cancer Res 1990; 50 : 5421–5425.

    CAS PubMed Google ученый

  • 117

    Пэрриш-Новак Дж., Диллон С.Р., Нельсон А., Хаммонд А., Спречер С., Гросс Дж. А. и др. . Интерлейкин 21 и его рецептор участвуют в размножении NK-клеток и регуляции функции лимфоцитов. Nature 2000; 408 : 57–63.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 118

    Брэди Дж., Хаякава Ю., Смит М.Дж., Натт С.Л. IL-21 индуцирует функциональное созревание NK-клеток мыши. J Immunol 2004; 172 : 2048–2058.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 119

    Betting DJ, Yamada RE, Kafi K, Said J, van Rooijen N, Timmerman JM.Внутриопухолевая, но не системная доставка олигодезоксинуклеотида CpG увеличивает эффективность терапии моноклональными антителами к CD20 против В-клеточной лимфомы. J Immunother 2009; 32 : 622–631.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 120

    Kohrt HE, Houot R, Goldstein MJ, Weiskopf K, Alizadeh AA, Brody J et al . Стимуляция CD137 усиливает противолимфомную активность антител к CD20. Кровь 2011; 117 : 2423–2432.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 121

    Yamane BH, Hank JA, Albertini MR, Sondel PM. Разработка иммунотерапии на основе антител-IL-2 с hu14.18-IL2 (EMD-273063) при меланоме и нейробластоме. Заключение эксперта по исследованию наркотиков 2009; 18 : 991–1000.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 122

    Бухтояров И.Н., Нил З.С., Ган Дж., Бухтоярова Т.Н., Патанкар М.С., Габбельс Дж. А. и др. .Дифференциальная интернализация иммуноцитокина hu14.18-IL2 NK и опухолевыми клетками: влияние на конъюгацию, цитотоксичность и нацеливание. J Leukoc Biol 2011; 89 : 625–638.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 123

    Эрнандес-Илизалитурри Ф.Дж., Редди Н., Холкова Б., Оттман Э., Чучман М.С. Иммуномодулирующий препарат CC-5013 или CC-4047 и ритуксимаб усиливают противоопухолевую активность на модели тяжелой комбинированной иммунодефицитной лимфомы мыши. Clin Cancer Res 2005; 11 : 5984–5992.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 124

    Биньямин Л., Альпау Р.К., Хьюз Т.Л., Лутц, Коннектикут, Кэмпбелл К.С., Вайнер Л.М. Блокирование ингибирующего самораспознавания NK-клеток способствует антителозависимой клеточной цитотоксичности в модели противолимфомной терапии. J Immunol 2008; 180 : 6392–6401.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 125

    Velardi A, Ruggeri L, Mancusi A, Aversa F, Christiansen FT.Аллораспознавание естественных клеток-киллеров пропавшего себя при аллогенной гемопоэтической трансплантации: инструмент иммунотерапии лейкемии. Curr Opin Immunol 2009; 21 : 525–530.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 126

    Ченг М., Чжан Дж., Цзян В., Чен И, Тянь З. Линии естественных клеток-киллеров в иммунотерапии опухолей. Front Med 2012; 6 : 56–66.

    PubMed Статья Google ученый

  • 127

    Cheng M, Ma J, Chen Y, Zhang J, Zhao W, Wei H et al .Создание, характеристика и успешная адаптивная терапия против опухолей человека с помощью NKG-клеток, новой линии NK-клеток человека. Трансплантация клеток 2011; 20 : 1731–1746.

    PubMed Статья Google ученый

  • 128

    Йонеда Н., Тацуми Е., Кавано С., Тешигавара К., Ока Т., Фукуда М. и др. . Обнаружение генома вируса Эпштейна-Барра в линии естественных киллеров, YT. Leukemia 1992; 6 : 136–141.

    CAS PubMed Google ученый

  • 129

    Цучияма Дж., Йошино Т., Мори М., Кондо Е., Ока Т., Акаги Т. и др. . Характеристика новой линии естественных клеток-киллеров человека (NK-YS), созданной на основе лимфомы / лейкемии из естественных клеток-киллеров, ассоциированных с инфекцией вируса Эпштейна-Барра. Кровь 1998; 92 : 1374–1383.

    CAS PubMed Google ученый

  • 130

    Ягита М., Хуанг К.Л., Умехара Х., Мацуо Ю., Табата Р., Мияке М. и др. .Новая линия естественных клеток-киллеров (KHYG-1) от пациента с агрессивным лейкозом естественных клеток-киллеров, несущих точечную мутацию p53. Leukemia 2000; 14 : 922–930.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 131

    Тонн Т., Беккер С., Эссер Р., Швабе Д., Зайфрид Э. Клеточная иммунотерапия злокачественных новообразований с использованием клональной линии естественных киллеров NK-92. J Hematother Stem Cell Res 2001; 10 : 535–544.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 132

    Klingemann HG. Иммунотерапевтические стратегии на основе естественных клеток-киллеров. Цитотерапия 2005; 7 : 16–22.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 133

    Мальмберг К.Дж., Брайсесон Ю.Т., Карлстен М., Андерссон С., Бьорклунд А., Бьоркстрем Н.К. и др. . Опосредованное NK-клетками нацеливание на рак человека и возможности новых средств иммунотерапии. Cancer Immunol Immunother 2008; 57 : 1541–1552.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 134

    Suck G, Branch DR, Smyth MJ, Miller RG, Vergidis J, Fahim S et al . KHYG-1, модель для исследования повышенной цитотоксичности естественных клеток-киллеров. Exp Hematol 2005; 33 : 1160–1171.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 135

    Suck G, Branch DR, Китинг А.Облученный KHYG-1 сохраняет цитотоксичность: потенциал для адоптивной иммунотерапии с использованием линии естественных клеток-киллеров. Int J Radiat Biol 2006; 82 : 355–361.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 136

    Робертсон MJ, Cochran KJ, Cameron C, Le JM, Tantravahi R, Ritz J. Характеристика линии клеток, NKL, происходящей от агрессивного лейкоза естественных киллеров человека. Exp Hematol 1996; 24 : 406–415.

    CAS PubMed Google ученый

  • 137

    Чжан Ц., Чжан Дж., Ню Дж., Тянь З. Интерлейкин-15 улучшает цитотоксичность естественных клеток-киллеров за счет активации NKG2D и экспрессии цитотоксических эффекторных молекул, а также фосфорилирования STAT1 и ERK1 / 2. Cytokine 2008; 42 : 128–136.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 138

    Гарсия-Лора А, Мартинес М., Педринаси С., Гарридо Ф.Различная регуляция изоферментов PKC и MAPK с помощью PSK и IL-2 в пролиферативной и цитотоксической активности линии естественных киллеров NKL человека. Cancer Immunol Immunother 2003; 52 : 59–64.

    CAS PubMed Google ученый

  • 139

    Pedrinaci S, Algarra I, Garrido F. Связанный с белком полисахарид (PSK) индуцирует цитотоксическую активность в линии естественных киллерных клеток человека NKL. Int J Clin Lab Res 1999; 29 : 135–140.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 140

    Nagashima S, Mailliard R, Kashii Y, Reichert TE, Herberman RB, Robbins P et al . Стабильная трансдукция гена интерлейкина-2 в линии естественных киллеров человека и их фенотипическая и функциональная характеристика in vitro и in vivo . Кровь 1998; 91 : 3850–3861.

    CAS PubMed Google ученый

  • 141

    Чжан Дж, Сун Р., Вэй Х, Тянь З.Характеристика модифицированных геном интерлейкина-15 естественных клеток-киллеров человека: значение для адоптивной клеточной иммунотерапии. Haematologica 2004; 89 : 338–347.

    CAS PubMed Google ученый

  • 142

    Цзян З., Чжан Дж., Тянь З. Функциональная характеристика трансдукции гена интерлейкина-15 в линию естественных киллерных клеток человека NKL. Цитотерапия 2008; 10 : 265–274.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 143

    Там Ю.К., Маки Г., Миягава Б., Хеннеманн Б., Тонн Т., Клингеманн Х.Г. Характеристика генетически измененных, независимых от интерлейкина 2 линий естественных киллеров, подходящих для адоптивной клеточной иммунотерапии. Hum Gene Ther 1999; 10 : 1359–1373.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 144

    Константинидис К.В., Алиси Е., Айнтс А., Кристенсон Б., Юнггрен Х.Г., Дилбер М.С.Нацеливание ИЛ-2 на эндоплазматический ретикулум ограничивает аутокринную стимуляцию роста клетками NK-92. Exp Hematol 2005; 33 : 159–164.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 145

    Чжан Дж., Сун Р., Вэй Х, Тянь З. Характеристика модифицированной геном фактора стволовых клеток линии естественных киллеров человека, клеток NK-92: участие в адоптивной клеточной иммунотерапии на основе NK-клеток. Oncol Rep 2004; 11 : 1097–1106.

    CAS PubMed Google ученый

  • 146

    Ширрманн Т., Печер Г. Линия естественных киллеров человека, модифицированная геном химерного Т-клеточного рецептора иммуноглобулина, приводит к ингибированию роста опухоли in vivo . Cancer Gene Ther 2002; 9 : 390–398.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 147

    Ширрманн Т., Печер Г.Специфическое нацеливание лейкозных клеток CD33 + линией естественных киллеров, модифицированной химерным рецептором. Leuk Res 2005; 29 : 301–306.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 148

    Ухерек К., Тонн Т., Ухерек Б., Беккер С., Шниерле Б., Клингеманн Х.Г. и др. . Перенацеливание цитолитической активности естественных клеток-киллеров на раковые клетки, экспрессирующие ErbB2, приводит к эффективному и селективному разрушению опухолевых клеток. Кровь 2002; 100 : 1265–1273.

    CAS PubMed Google ученый

  • 149

    Muller T, Uherek C, Maki G, Chow KU, Schimpf A, Klingemann HG et al . Экспрессия CD20-специфического рецептора химерного антигена усиливает цитотоксическую активность NK-клеток и преодолевает NK-резистентность лимфомных и лейкозных клеток. Cancer Immunol Immunother 2008; 57 : 411–423.

    Артикул CAS PubMed Google ученый

  • 150

    Имаи С, Ивамото С., Кампана Д.Генетическая модификация первичных естественных клеток-киллеров преодолевает тормозящие сигналы и индуцирует специфическое уничтожение лейкемических клеток. Кровь 2005; 106 : 376–383.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 151

    Arai S, Klingemann HG. Естественные клетки-киллеры: могут ли они быть полезны в качестве адоптивной иммунотерапии рака? Экспертное мнение Biol Ther 2005; 5 : 163–172.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 152

    Luevano M, Madrigal A, Saudemont A. Получение естественных клеток-киллеров из гемопоэтических стволовых клеток in vitro для иммунотерапии. Cell Mol Immunol 2012; 9 : 310–320.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 153

    Kao IT, Yao CL, Kong ZL, Wu ML, Chuang TL, Hwang SM.Получение естественных клеток-киллеров из бессывороточных расширенных клеток пуповинной крови человека CD34 + . Stem Cells Dev 2007; 16 : 1043–1051.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 154

    Спанхольц Дж., Тордуар М., Айссенс Д., Прейджерс Ф., ван дер Меер А., Йустен И. и др. . Высокое логарифмическое расширение функциональных естественных клеток-киллеров человека из CD34-положительных клеток пуповинной крови для адоптивной иммунотерапии рака. PLoS One 2010; 5 : e9221

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google ученый

  • 155

    Спанхольц Дж., Прейджерс Ф., Тордуар М., Трилсбек С., Паардекупер Дж., Де Витте Т. и др. . Генерация активных NK-клеток клинического уровня из гематопоэтических клеток-предшественников пуповинной крови для иммунотерапии с использованием процесса культивирования в закрытой системе. PLoS One 2011; 6 : e20740

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 156

    Кондиотти Р., Закай Ю.Б., Барак В., Наглер А. Ex vivo Экспансия цитотоксических клеток CD56 + из пуповинной крови человека. Exp Hematol 2001; 29 : 104–113.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 157

    Miller JS, Alley KA, McGlave P. Дифференциация естественных клеток-киллеров (NK) от примитивных предшественников костного мозга человека в системе длительного культивирования на основе стромы: идентификация предшественника NK CD34 + 7 + . Кровь 1994; 83 : 2594–2601.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 158

    Mrozek E, Anderson P, Caligiuri MA. Роль интерлейкина-15 в развитии человеческих CD56 + естественных клеток-киллеров из гематопоэтических клеток-предшественников CD34 + . Кровь 1996; 87 : 2632–2640.

    CAS PubMed Google ученый

  • 159

    Кауфман Д.С., Хансон Е.Т., Льюис Р.Л., Ауэрбах Р., Томсон Дж.Гемопоэтические колониеобразующие клетки, полученные из эмбриональных стволовых клеток человека. Proc Natl Acad Sci USA 2001; 98 : 10716–10721.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 160

    Кауфман Д.С. К клинической терапии с использованием гемопоэтических клеток, полученных из плюрипотентных стволовых клеток человека. Кровь 2009; 114 : 3513–3523.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 161

    Кнорр Д.А., Кауфман Д.С.Полученные из плюрипотентных стволовых клеток естественные клетки-киллеры для лечения рака. Transl Res 2010; 156 : 147–154.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 162

    Волл П.С., Мартин С.Х., Миллер Дж.С., Кауфман Д.С. NK-клетки, полученные из эмбриональных стволовых клеток человека, приобретают функциональные рецепторы и цитолитическую активность. J Immunol 2005; 175 : 5095–5103.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 163

    Woll PS, Grzywacz B, Tian X, Marcus RK, Knorr DA, Verneris MR et al .Эмбриональные стволовые клетки человека дифференцируются в гомогенную популяцию естественных клеток-киллеров с сильной противоопухолевой активностью in vivo. Кровь 2009; 113 : 6094–6101.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 164

    Берг М., Лундквист А., Маккой П., мл., Самсел Л., Фан И., Таваб А. и др. . Человеческие естественные киллерные клетки клинического уровня ex vivo активируют активирующие рецепторы и лиганды рецепторов смерти и обладают повышенной цитолитической активностью против опухолевых клеток. Цитотерапия 2009; 11 : 341–355.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 165

    Fujisaki H, Kakuda H, Shimasaki N, Imai C, Ma J, Lockey T et al . Расширение использования высокоцитотоксичных естественных клеток-киллеров человека для терапии раковых клеток. Cancer Res 2009; 69 : 4010–4017.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 166

    Siegler U, Meyer-Monard S, Jorger S, Stern M, Tichelli A, Gratwohl A et al .Сортировка клеток в соответствии с надлежащей производственной практикой и крупномасштабное распространение единичных KIR-положительных аллореактивных естественных клеток-киллеров человека для многократных инфузий пациентам с лейкемией. Цитотерапия 2010; 12 : 750–763.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 167

    Гонг В., Сяо В., Ху М., Вен X, Цянь Л., Пан X и др. . Ex vivo размножение естественных клеток-киллеров с высокой цитотоксичностью клетками K562, модифицированными для совместной экспрессии связанного с цепью белка A класса I главного комплекса гистосовместимости, лиганда 4-1BB и интерлейкина-15. тканевые антигены 2010; 76 : 467–475.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 168

    Денман С.Дж., Сенюков В.В., Соманчи С.С., Фатарпекар П.В., Копп Л.М., Джонсон Дж. Л. и др. . Связанный с мембраной IL-21 способствует устойчивой пролиферации ex vivo естественных клеток-киллеров человека. PLoS One 2012 г .; 7 : e30264

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 169

    Сутлу Т., Стеллан Б., Гилджам М., Кесада Х.С., Нахи Х., Гартон Г. и др. .Масштабное крупномасштабное размножение высокоактивных естественных клеток-киллеров человека без фидера клинического уровня для адоптивной иммунотерапии с использованием автоматизированного биореактора. Цитотерапия 2010; 12 : 1044–1055.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 170

    Tam YK, Martinson JA, Doligosa K, Klingemann HG. Ex vivo экспансия высокоцитотоксичной линии естественных киллеров-92 человека в условиях современной надлежащей производственной практики клинической адоптивной клеточной иммунотерапии. Цитотерапия 2003; 5 : 259–272.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 171

    Arai S, Meagher R, Swearingen M, Myint H, Rich E, Martinson J et al . Инфузия аллогенной клеточной линии NK-92 пациентам с запущенным почечно-клеточным раком или меланомой: испытание фазы I. Цитотерапия 2008; 10 : 625–632.

    CAS Статья Google ученый

  • 172

    Ruggeri L, Mancusi A, Burchielli E, Capanni M, Carotti A, Aloisi T et al .Аллореактивность NK-клеток и аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток. Blood Cells Mol Dis 2008; 40 : 84–90.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 173

    Slavin S, Ackerstein A, Or R, Shapira MY, Gesundheit B, Askenasy N et al . Иммунотерапия у устойчивых к химиотерапии пациентов высокого риска с метастатическими солидными опухолями и гематологическими злокачественными новообразованиями с использованием преднамеренно несовпадающих донорских лимфоцитов, активированных rIL-2: исследование фазы I. Cancer Immunol Immunother 2010; 59 : 1511–1519.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 174

    Розенберг С.А., Лотце М.Т., Муул Л.М., Лейтман С., Чанг А.Е., Эттингхаузен С.Е. и др. . Наблюдения за системным введением аутологичных лимфокин-активированных клеток-киллеров и рекомбинантного интерлейкина-2 пациентам с метастатическим раком. N Engl J Med 1985; 313 : 1485–1492.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 175

    Krause SW, Gastpar R, Andreesen R, Gross C, Ullrich H, Thonigs G et al . Лечение пациентов с раком толстой кишки и легких с помощью ex vivo белков теплового шока, активируемых 70-пептидом, аутологичных естественных клеток-киллеров: клиническое испытание фазы i. Clin Cancer Res 2004; 10 : 3699–3707.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 176

    Parkhurst MR, Riley JP, Dudley ME, Rosenberg SA.Адаптивный перенос аутологичных естественных клеток-киллеров приводит к высоким уровням циркулирующих естественных клеток-киллеров, но не опосредует регрессию опухоли. Clin Cancer Res 2011; 17 : 6287–6297.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 177

    Curti A, Ruggeri L, D'Addio A, Bontadini A, Dan E, Motta MR et al . Успешный перенос аллореактивных гаплоидентичных естественных клеток-киллеров, несоответствующих лиганду KIR, после инфузии у пожилых пациентов с острым миелоидным лейкозом высокого риска. Кровь 2011; 118 : 3273–3279.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 178

    Рицциери Д.А., Стормс Р., Чен Д.Ф., Лонг Джи, Ян Й., Никцевич Д.А. и др. . Инфузии донорских лимфоцитов, обогащенных естественными клетками-киллерами, из соответствующего члена семьи A 3-6 / 6 HLA после трансплантации немиелоаблативных аллогенных стволовых клеток. Пересадка костного мозга Biol 2010; 16 : 1107–1114.

    PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 179

    Геллер М.А., Кули С., Джадсон П.Л., Гебре Р., Карсон Л.Ф., Аргента ПА и др. . Исследование фазы II аллогенной терапии естественными клетками-киллерами для лечения пациентов с рецидивирующим раком яичников и молочной железы. Цитотерапия 2011; 13 : 98–107.

    CAS Статья Google ученый

  • 180

    Shi FD, Ljunggren HG, la Cava A, van Kaer L.Органоспецифические особенности естественных клеток-киллеров. Nat Rev Immunol 2011; 11 : 658–671.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 181

    Subleski JJ, Wiltrout RH, Weiss JM. Применение тканеспецифической активности NK и NKT-клеток для иммунотерапии опухолей. J Autoimmun 2009; 33 : 275–281.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 182

    Sanchez-Correa B, Morgado S, Gayoso I, Bergua JM, Casado JG, Arcos MJ et al .NK-клетки человека у пациентов с острым миелоидным лейкозом: анализ рецепторов, активирующих NK-клетки, и их лигандов. Cancer Immunol Immunother 2011; 60 : 1195–1205.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 183

    Romagne F, Andre P, Spee P, Zahn S, Anfossi N, Gauthier L et al . Доклиническая характеристика 1-7F9, нового терапевтического антитела человека против рецептора KIR, которое усиливает опосредованное естественными киллерами уничтожение опухолевых клеток. Кровь 2009; 114 : 2667–2677.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 184

    Сола К., Андре П., Леммерс С., Фусери Н., Боннафус С., Блери М. и др. . Генетическое и опосредованное антителами перепрограммирование естественного самораспознавания клетки-киллера in vivo . Proc Natl Acad Sci USA 2009; 106 : 12879–12884.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 185

    Purdy AK, Кэмпбелл К.С.Естественные клетки-киллеры и рак: регуляция Ig-подобных рецепторов клеток-киллеров (KIR). Cancer Biol Ther 2009; 8 : 2211–2220.

    PubMed Статья Google ученый

  • 186

    Hayashi T., Hideshima T., Akiyama M, Podar K, Yasui H, Raje N et al . Молекулярные механизмы, посредством которых иммуномодулирующие препараты активируют естественные клетки-киллеры: клиническое применение. Br J Haematol 2005; 128 : 192–203.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 187

    Fujii H, Trudeau JD, Teachey DT, Fish JD, Grupp SA, Schultz KR et al . In vivo контроль острого лимфобластного лейкоза с помощью иммуностимулирующих олигонуклеотидов CpG. Кровь 2007; 109 : 2008–2013.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 188

    Брандау С., Рименсбергер Дж., Якобсен М., Кемп Д., Чжао В., Чжао X и др. .NK-клетки необходимы для эффективной иммунотерапии БЦЖ. Int J Cancer 2001; 92 : 697–702.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 189

    Jha P, Golovko D, Bains S, Hostetter D, Meier R, Wendland MF et al . Мониторинг иммунотерапии естественными клетками-киллерами с использованием неинвазивных методов визуализации. Cancer Res 2010; 70 : 6109–6113.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 190

    Kircher MF, Gambhir SS, Grimm J.Неинвазивные методы отслеживания клеток. Нат Рев Клин Онкол 2011; 8 : 677–688.

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 191

    Меллер Б., Фрон С., Бранд Дж. М., Лауэр И., Шелпер Л. Ф., фон Хоф К. и др. . Мониторинг нового подхода к иммунотерапии аллогенными (111) In-меченными NK-клетками у пациентов с почечно-клеточной карциномой. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2004; 31 : 403–407.

    PubMed Статья Google ученый

  • 192

    Таври С., Джа П., Мейер Р., Хеннинг Т.Д., Мюллер Т., Хостеттер Д. и др. . Оптическая визуализация клеточной иммунотерапии против рака простаты. Mol Imaging 2009; 8 : 15–26.

    PubMed Статья Google ученый

  • 193

    Саттон Э.Дж., Хеннинг Т.Д., Пихлер Б.Дж., Бремер С., Далдруп-Линк Х.Отслеживание клеток с помощью оптического изображения. Eur Radiol 2008; 18 : 2021–2032.

    PubMed Статья Google ученый

  • 194

    Pichler BJ, Kolb A, Nagele T, Schlemmer HP. ПЭТ / МРТ: прокладывает путь к следующему поколению приложений мультимодальной клинической визуализации. J Nucl Med 2010; 51 : 333–336.

    PubMed Статья Google ученый

  • 195

    Патель Д., Келл А., Симард Б., Сян Б., Линь Х.Й., Тиан Г.Эффективность маркировки клеток, цитотоксичность и релаксирующая способность активируемых медью контрастных агентов для МРТ / ПЭТ-визуализации. Биоматериалы 2011; 32 : 1167–1176.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 196

    Iliopoulou EG, Kountourakis P, Karamouzis MV, Doufexis D, Ardavanis A, Baxevanis CN et al . Испытание фазы I адоптивного переноса аллогенных естественных клеток-киллеров у пациентов с распространенным немелкоклеточным раком легкого. Cancer Immunol Immunother 2010; 59 : 1781–1789.

    PubMed Статья Google ученый

  • 197

    Лаптева Н., Дюретт А.Г., Сан Дж., Роллинз Л.А., Хьюе Л.Л., Фанг Дж. и др. . Масштабное расширение ex vivo и характеристика естественных клеток-киллеров для клинического применения. Цитотерапия 2012; 14 : 1131–1143.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 198

    Дэн Х, Терунума Х, Ниеда М., Сяо В., Николь А.Синергетическая цитотоксичность ex vivo увеличила естественные клетки-киллеры в сочетании с препаратами моноклональных антител против раковых клеток. Int Immunopharmacol 2012; 14 : 593–605.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 199

    Воскенс С.Дж., Ватанабе Р., Роллинз С., Кампана Д., Хасуми К., Манн Д.Л. Ex-vivo увеличенные NK-клетки человека экспрессируют активирующие рецепторы, которые опосредуют цитотоксичность линий аллогенных и аутологичных раковых клеток путем прямого распознавания и клеточной цитотоксичности, направленной на антитела. J Exp Clin Cancer Res 2010; 29 : 134

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google ученый

  • 200

    Сутлу Т., Стеллан Б., Гилджам М., Кесада Х.С., Нахи Х., Гартон Г. и др. . Масштабное крупномасштабное размножение высокоактивных естественных клеток-киллеров человека без фидера клинического уровня для адоптивной иммунотерапии с использованием автоматизированного биореактора. Цитотерапия 2010; 12 : 1044–1055.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 201

    Геллер М.А., Кули С., Джадсон П.Л., Гебре Р., Карсон Л.Ф., Аргента ПА и др. . Исследование фазы II аллогенной терапии естественными клетками-киллерами для лечения пациентов с рецидивирующим раком яичников и молочной железы. Цитотерапия 2011; 13 : 98–107.

    CAS Статья Google ученый

  • Использование машинного обучения на основе правил для приоритезации генов-кандидатов заболеваний и выборочной классификации данных экспрессии генов рака

    Сравнение результатов прогнозов

    Обзор результатов сравнительного прогнозирования, полученных со всеми комбинациями выбора признаков, методов прогнозирования и наборов данных, приведен в таблице 2 для 10-кратного CV и в таблице 3 для LOOCV.Ниже обсуждаются результаты для всех наборов данных.

    Рак простаты

    В наборе данных рака простаты наилучшие результаты прогнозирования с помощью BioHEL были достигнуты без выбора внешних характеристик, обеспечивающих среднюю точность 94% (10-кратное CV), или при сочетании BioHEL с фильтром PLSS (средн. Погрешность 94%, LOOCV). Среди альтернативных эталонных классификаторов, рассмотренных в этом исследовании (SVM, RF и PAM, см. Таблицы 2 и 3), только комбинация PLS / PAM достигла такой же точности для 10-кратного CV, а комбинация CFS / RF достигла немного более высокой точности для LOOCV. (95%).GAssist достиг точности не менее 92% в сочетании со всеми методами выбора функций, но уступил лучшим моделям BioHEL.

    Аналогичным образом, в результатах перекрестной проверки, представленных в литературе для этого набора данных, только методы Shen et al. (94,6%) [71] и Paul et al. (96,6%) [72] (см. Таблицу 4) получили аналогичную или немного более высокую среднюю точность, чем BioHEL. Для сравнения, Shen et al. использовать разложение по сингулярным значениям (SVD) вместо выбора признаков, которое включает больше генов из исходных данных, чем максимальное значение 30, рассматриваемое здесь для всех методов выбора признаков.Этот тип модели может быть труднее интерпретировать, чем модели правил принятия решений без преобразования признаков (если производные признаки не могут быть связаны с биологическими процессами). Paul et al. используют оригинальные признаки в своих моделях, но среднее количество включенных генов также превышает 30 признаков (48,5). Таким образом, по сравнению с современными классификаторами эталонных тестов и альтернативными подходами, описанными в литературе, BioHEL достигает аналогичных уровней точности, несмотря на простую природу своих моделей, основанных на правилах, которые облегчают биологическую интерпретацию для экспериментатора.

    Диффузная В-клеточная лимфома

    В наборе данных DLBCL наивысшая средняя точность классификации образцов 95% (10-кратный CV) и 94% (LOOCV) были получены при использовании BioHEL без какого-либо выбора функций. Более того, ни один из методов тестирования с оптимизацией параметров не достиг более высокой точности, только комбинация PLSS / SVM обеспечила такую ​​же точность, как и BioHEL. В результатах, представленных в литературе для этого набора данных (см. Таблицу 5), только подход Wessels et al.[73] достигли немного более высокой точности (96%), чем лучшие модели BioHEL, но использовали размер подмножества признаков из 80 генов, что почти в 3 раза больше, чем максимальное количество функций, разрешенное правилами BioHel. GAssist обеспечил точность в том же диапазоне значений, что и другие методы тестирования, и достиг лучших результатов (10-кратный CV: 94%, LOOCV: 92%) в сочетании с фильтром PLSS.

    Распространенной проблемой при классификации данных большой размерности с небольшими размерами выборки является высокая дисперсия оценок ошибок перекрестной проверки, особенно в LOOCV [65], [74].Это наблюдение также было сделано для трех наборов данных, рассмотренных в этом исследовании, и применимо как к BioHEL, так и к альтернативным методам прогнозирования. Таким образом, несмотря на высокую среднюю точность, достигаемую некоторыми комбинациями методов, отсутствие надежности по-прежнему препятствует использованию этих подходов в повседневной клинической практике.

    Рак молочной железы

    Для набора данных по раку груди, полученного из Медицинского центра Nottingham Queen’s, лучшие средние значения точности с помощью BioHEL снова были получены без использования внешнего выбора функций, обеспечивая среднюю точность 88% (10-кратное CV) и 86% (LOOCV).Эти результаты были аналогичны результатам других тестовых классификаторов, при этом некоторые методы были немного лучше, а некоторые немного хуже (наиболее успешным подходом был CFS / PAM с 89% соответствием для 10-кратного CV и 90% для LOOCV). Важно отметить, что независимо от метода выбора функций и перекрестной проверки, BioHEL всегда обеспечивала среднюю точность не менее 82% данных по раку груди. GAssist снова не достиг лучших показателей BioHEL, но обеспечил надежную точность не менее 84% по всем методам выбора функций.

    Более низкая точность, достигаемая всеми методами на данных рака молочной железы по сравнению с характеристиками этих методов, наблюдаемыми в других наборах данных, соответствует предыдущим наблюдениям, показывающим, что классификация образцов микрочипов рака молочной железы имеет тенденцию быть более сложной, чем различение массива генов образцы для других видов рака [75]. Поскольку рассматриваемый здесь набор данных по раку молочной железы был получен из сотрудничающего института, в литературе нет результатов внешней перекрестной проверки альтернативных методов, однако набор данных был опубликован в Интернете (http: // www.ebi.ac.uk/microarray-as/ae/browse.html?keywords=E-TABM-576) и могут свободно использоваться для сравнительной оценки и целей биологического анализа.

    В целом, по всем трем наборам данных модели классификации BioHEL обеспечили точность классификации, которая была одной из самых высоких по сравнению с текущими методами классификации и другими подходами из литературы. Сходство между усредненными точностями, полученными из 10-кратного CV и LOOCV, показывает, что эти оценки производительности являются стабильными и существенно не меняются в зависимости от выбранной схемы валидации (в отношении дисперсии точности в циклах кросс-валидации, как и ожидалось, меньшие отклонения получены при использовании тестовых наборов большего размера в 10-кратном CV).Точно так же сравнение результатов прогнозирования и выбора функций при предварительной обработке различных наборов данных показывает, что производительность BioHEL является устойчивой в широком диапазоне настроек предварительной фильтрации (подробные результаты и обсуждение анализа устойчивости см. В Материале S1).

    Чтобы объективно сравнить классификаторы по всем наборам данных и различным методам выбора признаков, мы дополнительно применили тест Фридмана [76], [77] по средней точности классификации по всем методам выбора признаков (один раз для 10-кратного CV и один раз для LOOCV).Согласно этому статистическому тесту, GAssist и метод RF показали лучшие результаты для 10-кратного CV и получили одинаковый средний рейтинг (см. Таблицу 6) при использовании выбора функций. Интересно, что BioHEL получил более низкие средние оценки, чем эти методы, в сочетании с выбором внешних характеристик, но обеспечил в целом наивысшую точность без выбора внешних атрибутов. Этот результат предполагает, что BioHEL использует информационное содержание функций, которые считаются незначительными специальными методами выбора, и, таким образом, избегает узких мест в производительности, возникающих в результате предшествующего применения подхода внешнего выбора.

    Для LOOCV были получены те же результаты, что и для 10-кратного CV, за исключением того, что RF достиг лучшего среднего ранга, чем GAssist, со вторым лучшим рангом. Опять же, BioHEL имеет тенденцию получать более низкие средние ранги в сочетании с выбором внешних атрибутов, чем другие подходы, но достигает наилучшей общей производительности без процедуры внешнего выбора.

    В целом эти результаты показывают, что обе системы (GAssist в сочетании с выбором функций и BioHEL без внешнего выбора) не только генерируют компактные и простые для интерпретации правила принятия решений, но также достигают наилучшей или близкой к наилучшей производительности во всех протестированных сценариях.Таким образом, BioHEL и GAssist позволяют экспериментаторам извлекать выгоду из улучшенной интерпретируемости подхода к обучению на основе правил, не жертвуя производительностью по сравнению с другими современными подходами.

    Для всех методов общие требования к памяти и время выполнения для применения обученных моделей были одинаковыми и пренебрежимо малыми на стандартном настольном компьютере (для отдельных приложений алгоритма требовалось несколько минут или меньше на ЦП с тактовой частотой 2 ГГц). Самый трудоемкий эксперимент по перекрестной проверке (объединение LOOCV со 100-кратным ансамблем BioHEL и повторение этого 10 раз для разных случайных семян) потребовал менее одного дня.

    Сравнение результатов выбора функций

    При использовании выбора признаков перед контролируемой классификацией средняя точность часто сильно зависит от выбора метода выбора, так как эффективность прогнозирования не только зависит от включения информативных признаков, но также может отрицательно повлиять на выбор избыточных и нерелевантные функции. Для сравнения трех методов отбора, рассмотренных в этом исследовании (CFS, RFS, PLSS), тест Фридмана был применен к средней точности классификации (один раз для 10-кратного CV и один раз для LOOCV) по всем наборам данных и всем пяти методам прогнозирования (BioHEL , GAssist, SVM, RF и PAM).

    Таким образом, согласно тесту Холма, примененному после теста Фридмана, PLSS значительно превосходил CFS как для 10-кратного CV (уровень достоверности: 80%), так и LOOCV (уровень достоверности: 90%), а также превосходил RF. для LOOCV (уровень достоверности: 80%, никаких других значимых различий выше этого уровня достоверности обнаружено не было). Аналогичным образом, PLSS получил лучшие средние оценки в тесте Фридмана как для 10-кратного CV, так и для LOOCV (см. Таблицу 7). Эти наблюдения, показывающие, что метод одномерного ранжирования превосходит комбинаторный фильтр и встроенный метод выбора, могут указывать на то, что предположение о независимости признаков, лежащее в основе одномерного подхода, в достаточной степени выполняется для наиболее информативных признаков, и оправдывают широкую популярность одномерных подходов в гене микрочипов. выбор.Относительно высокая эффективность одномерных стратегий отбора уже была отмечена в аналогичном исследовании данных микрочипов Wessels et al. [73], сравнивая другие алгоритмы. Однако альтернативная интерпретация этих результатов может заключаться в том, что зависимости характеристик, обнаруженные методами многомерного выбора, были ложноположительными, что привело к более слабой прогностической эффективности этих подходов. Таким образом, если предположение о независимости представляет собой хорошее приближение для некоторых из наиболее информативных функций, или если многомерные методы не могут правильно уловить структуру зависимости между различными переменными, быстрый одномерный подход выбора может быть методом выбора для сложных, многомерных данные микрочипа.

    Литературный анализ выбранных генов - результаты

    Чтобы проиллюстрировать полезность конвейера анализа для биологической интерпретации данных и сравнить совокупность методов выбора внешних признаков с возможностями BioHEL для непосредственного выявления информативных признаков во время генерации модели, был проведен пример литературного анализа для наиболее высокопоставленных гены в каждом наборе данных (см. раздел «Методы»). При рассмотрении только генов, выбранных по крайней мере двумя различными методами отбора среди генов, выбранных наиболее часто в циклах LOOCV, было получено 11 генов для набора данных рака простаты (см. Таблицу 8 слева), 10 генов для набора данных лимфомы (Таблица 9 слева) и 18 генов для набора данных по раку груди (таблица 10 слева).Чтобы сравнить эти результаты отбора с рейтингом генов в соответствии с частотой их появления в наборах правил, созданных 100-кратным ансамблем BioHEL по всем циклам LOOCV, из верхней части этого рейтинга для каждого набора данных было выбрано одинаковое количество генов. (см. Таблицы 8, 9 и 10, справа, общие гены, определенные как информативные в обоих подходах, выделены жирным шрифтом).

    Два ранжирования генов (выбор ансамбля признаков и ранжирование признаков на основе BioHEL) были подтверждены извне с использованием литературного анализа в базе данных PubMed путем вычисления суммы положительных оценок PMI (см. Раздел «Методы») между стандартизованными названиями генов из рейтинга и заболеванием. термины из контролируемого словарного запаса, соответствующие трем наборам данных («новообразования предстательной железы», «новообразования груди» и «лимфома, В-клетки»).Один и тот же расчет был повторен 100 раз на наборах генов подобранного размера, выбранных случайным образом из генов на соответствующих платформах микрочипов, и на гистограммах этих случайных оценок PMI модели, а также на оценках, полученных с помощью выбора признаков ансамбля (Ensemble FS) и Ранжирование характеристик на основе BioHEL (BioHEL FR) показано на рис. 3, 4 и 5. Для количественной оценки относительной эффективности методов оценки значимости p-значения, полученные из этих оценок PMI, перечислены в таблице 11.

    Рисунок 3. Сравнение результатов интеллектуального анализа текста.

    Гистограмма оценок интеллектуального анализа текста для случайно выбранных подмножеств идентификаторов генов по сравнению с оценками, полученными с помощью BioHEL и подхода выбора ансамблевых признаков (FS) (набор данных по раку простаты).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0039932.g003

    Рисунок 4. Сравнение результатов интеллектуального анализа текста.

    Гистограмма оценок интеллектуального анализа текста для случайно выбранных подмножеств идентификаторов генов по сравнению с оценками, полученными с помощью BioHEL и подхода к отбору признаков ансамбля (FS) (набор данных по раку лимфомы).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0039932.g004

    Рисунок 5. Сравнение результатов интеллектуального анализа текста.

    Гистограмма оценок интеллектуального анализа текста для случайно выбранных подмножеств идентификаторов генов по сравнению с оценками, полученными с помощью BioHEL и подхода выбора ансамблевых признаков (FS) (набор данных по раку груди).

    https://doi.org/10.1371/journal.pone.0039932.g005

    Таблица и графики показывают, что как метод Ensemble FS, так и метод BioHEL FR достигли значимых значений p 0.05 по набору данных о простате и раке груди; однако ни один из двух подходов не обеспечил значимого p-значения для данных лимфомы (p-значение BioHEL FR: 0,22, p-значение Ensemble FS: 0,51). Более низкая эффективность литературного анализа этого набора данных может быть результатом меньшего количества доступных образцов (77 образцов по сравнению с 102 для исследования рака простаты и 128 для исследования рака груди), высокой степени классового дисбаланса (58 диффузных образцов). образцы большой В-клеточной лимфомы vs.19 образцов фолликулярной лимфомы), в результате чего были обнаружены только 10 генов, которые были определены как значимые с помощью по крайней мере двух методов отбора признаков, и нулевое перекрытие между первыми генами, полученными из Ensemble FS и из BioHEL FR (см. Таблицу 9).

    Что касается относительной эффективности подходов к отбору генов, анализ интеллектуального анализа текста показал, что в двух из трех наборов данных, лимфоме и наборе данных о раке груди, BioHEL FR достиг более низких значений p, чем Ensemble FS. Соответственно, по крайней мере, для некоторых наборов данных подход BioHEL FR обеспечивает превосходные результаты с точки зрения литературных оценок PMI по сравнению с ансамблем множественных методов отбора, даже несмотря на то, что BioHEL FR требует применения только одного алгоритма.

    Таким образом, анализ интеллектуального анализа текста на основе перестановок может дать представление как о надежности результатов отбора генов в различных наборах данных (в этом случае показывая более высокую надежность, полученную на данных рака простаты и молочной железы по сравнению с данными лимфомы), так и на относительная эффективность методов отбора генов.

    В дополнение к автоматическому анализу интеллектуального анализа текста, функциональные аннотации генов, занявших первое место, также были исследованы путем ручного просмотра литературы для выявления конкретных ассоциаций с интересующими заболеваниями.Поскольку подробное обсуждение отдельных генов, отобранных с помощью двух разных подходов, выходит за рамки данного исследования, мы сосредотачиваемся в основном на генах, отобранных с помощью подходов Ensemble FS и BioHEL FR.

    Для набора данных рака простаты , 4 гена были обнаружены в наборе пересечений двух методов отбора: Hepsin , Neural epidermal growth factor-like 2 (nel-like 2) , альфа-метилацил-коа рацемаза (AMACR) и адипсин .Аннотации для этих и всех других генов в списке были получены из веб-сервиса Gene Cards [78], базы данных функциональных аннотаций DAVID [79] и из дополнительных материалов набора данных микрочипа. Изучение биомедицинской литературы показывает, что все эти гены либо имеют значительную функциональную связь с раком простаты, либо используются в качестве диагностических маркеров, либо ранее предлагались в качестве новых маркеров-кандидатов.

    В частности, гепсин представляет собой сериновую протеазу клеточной поверхности, экспрессия которой значительно повышена при раке простаты [80] - [82] в других исследованиях, а также предложена в качестве прогностического биомаркера [83], [ 84].Однако нет единого мнения о функции хепсина; в то время как некоторые исследования утверждают, что гепсин способствует прогрессированию рака простаты [85], другие исследования предполагают, что гепсин подавляет рост клеток рака простаты [86]. Нервный эпидермальный фактор роста-подобный 2 (nel-like 2, NELL2) является гомологом фактора роста, который, как полагают, функционирует как фактор дифференцировки и регуляции [87]. Сообщалось, что NELL2 дифференциально экспрессируется при доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГП) [88], предполагается, что он является мезенхимальным регулятором органогенеза и онкогенеза [89] и используется в запатентованном методе диагностики рака простаты (патентная заявка США.11 / 519,892). Третий ген-кандидат, альфа-метилацил-КоА рацемаза (AMACR) кодирует фермент, который играет функциональную роль в биосинтезе желчных кислот и -окислении жирных кислот с разветвленной цепью [90]. Было установлено, что он значительно активируется при раке простаты на основании различных наборов данных по независимой экспрессии генов, а также был предложен в качестве биомаркера для диагностики рака простаты в различных исследованиях [84], [91], [92]. Адипсин - это специфический ген для адипоцитов [93], клеток, специализирующихся на хранении энергии в виде жира, который также, как предполагалось, влияет на пролиферацию и дифференцировку эпителиальных клеток.Культивирование адипоцитов с клеточной линией карциномы простаты [94] предоставило убедительные доказательства того, что адипоциты модулируют рост и экспрессию цитокинов клеток рака простаты (на основе гистологических и иммуногистохимических анализов и измерения экспрессии цитокинов с помощью ОТ-ПЦР). Хотя точная роль адипсина в развитии рака остается неизвестной, его дифференциальная экспрессия в раковой ткани наблюдалась в нескольких исследованиях [95] - [97]. Однако эти результаты могут также быть результатом общей взаимосвязи между ожирением и раком, поскольку ожирение является фактором риска для некоторых видов рака [98], включая рак простаты, а экспрессия адипсина, как известно, нарушается как при приобретенном, так и при генетическом ожирении [99]. .

    В наборе данных о лимфомах не было обнаружено совпадения между генами, получившими наивысший рейтинг из Ensemble FS и подхода BioHEL FR. Как упоминалось ранее в разделе, посвященном автоматическому анализу литературного анализа, более низкая надежность результатов выбора признаков в этом наборе данных может быть результатом меньшего количества доступных выборок и более высокой степени дисбаланса классов по сравнению с другими наборами данных. Однако при изучении аннотаций для трех главных генов в обоих рейтинговых списках снова были обнаружены сильные функциональные ассоциации с болезненным состоянием.

    Лактатдегидрогеназа A (LDHA) , единственный ген, который был определен как значимый всеми тремя методами отбора в подходе Ensemble FS, как известно, имеет повышенные уровни экспрессии после разрушения ткани. По этой причине LDHA уже является признанным маркером для мониторинга больных раком. Более того, взаимосвязь между уровнями LDHA и гистологическим типом и массой опухоли неходжкинских лимфом была исследована в литературе [100]. Металлотионеин 2a (MT2A) , ген, выбранный двумя разными методами в подходе Ensemble FS, кодирует белок семейства металлотионинов, который участвует во многих патофизиологических процессах, включая защиту от окислительного повреждения, пролиферацию клеток, лекарственные препараты и устойчивость к химиотерапии и развитие рака [101].Более того, было показано, что злокачественные лимфобласты диффузной В-клеточной лимфомы имеют высокую экспрессию металлотионеина [102]. Точно так же известно, что тубулины, подобные TUBB2C , имеют более высокие уровни экспрессии в пролиферирующих раковых клетках из-за образования микротрубочек в этих клетках. Поэтому эти белки часто рассматриваются как мишени для противоопухолевых препаратов, подавляющих рост раковых клеток, и также сообщалось, что уровни экспрессии подавляются при лечении, которое индуцирует апоптоз в клетках лимфомы [103].

    Белок рецептора трансферрина (TfR) 1 , ген, занимающий первое место в соответствии с подходом BioHEL FR, необходим для импорта железа в клетку посредством опосредованного рецептором эндоцитарного транспорта комплекса трансферрин-железо, но также участвует в регуляции роста клеток. Повышенные уровни TfR были обнаружены при нескольких злокачественных новообразованиях, а мембранный белок был изучен как многообещающая мишень для лечения рака с помощью антител [104]. Более того, ранее сообщалось, что экспрессия TfR коррелирует с выживаемостью и гистологической классификацией пациентов со злокачественной лимфомой, не являющейся Ходжкинской [105] - [107]. Рецептор I гамма-Fc иммуноглобулина (FCGR1A) представляет собой рецепторный белок для иммуноглобулиновых антител, которые вырабатываются врожденной иммунной системой в ответ на вирусные и бактериальные инфекции или раковые клетки. Известно, что ген экспрессируется как часть сигнатуры иммунного ответа фолликулярной лимфомы [108] и, как известно, является частью кластера сверхэкспрессированных генов, связанных с иммунной системой, в образцах В-клеточной лимфомы, которые богаты Т-клетками и гистиоциты (иммунные клетки, способные переваривать чужеродные вещества) [109].Интересно, что одобренный препарат против неходжкинской лимфомы, Тозитумомаб, как известно, связывается с FGR1A, хотя предполагаемой мишенью является антиген В-лимфоцитов CD20.

    Рецептор скавенджера гемоглобина (кластер дифференцировки 163, CD163). Белок , кодируемый геном, занимающим третье место по BioHEL FR, является рецептором, участвующим в клиренсе и эндоцитозе комплексов гемоглобин / гаптоглобин макрофагами. CD163 был предложен в качестве маркера инфильтрирующих опухоль макрофагов при лимфоме Ходжкина, где наблюдалась высокая экспрессия CD163, которая коррелирует с неблагоприятным исходом [110].Более того, было высказано предположение, что CD163 может иметь противовоспалительную роль [111] и может иметь диагностическое значение для мониторинга активации макрофагов при воспалительных состояниях, которые, как считается, играют решающую роль в опухолевой прогрессии многих видов рака [112].

    Для данных о раке молочной железы 7 генов были обнаружены как информативные как с помощью Ensemble FS, так и с помощью подхода BioHEL FR. Недавно мы оценили один из этих генов, RAS-подобный, регулируемый эстрогеном, ингибитор роста (RERG) , экспериментально в совместном исследовании с Медицинским центром Королевы в Ноттингеме с помощью иммуногистохимии с использованием тканевых микрочипов в 1140 образцах инвазивного рака молочной железы [ 6].Исследование подтвердило, что экспрессия RERG обеспечивает чувствительный маркер для различения клинически значимых категорий образцов просвета и непросветного рака молочной железы (см. Подход Nielsen et al. Для категоризации подтипов рака молочной железы [113]). Более того, было выявлено несколько значимых корреляций с уже существующими маркерами люминальной дифференцировки, включая положительные корреляции с экспрессией рецептора эстрогена, люминальных цитокератинов (CK19, CK18 и CK7 / 8), FOXA1 (p-value = 0.004), рецептор андрогенов, ядерный BRCA1, FHIT и ингибиторы клеточного цикла p27 и p21, а также обратные ассоциации с маркером пролиферации MIB1 (значение p = 0,005) и p53. Что еще более важно, сильная экспрессия RERG показала связь с более длительной выживаемостью при раке молочной железы и отдаленным интервалом без метастазов во всей когорте пациентов, и эти ассоциации не зависели от других прогностических переменных. Эти результаты соответствуют высоким рейтингам, полученным этим геном с помощью рассмотренных здесь вычислительных методов отбора генов.В подходе BioHEL FR RERG занял второе место, в подходе Ensemble FS он принадлежал к трем единственным генам, которые были выбраны в качестве информативных всеми тремя методами отбора входных данных (см. Таблицу 10).

    Еще одним геном, занимающим высокие места в обоих подходах к селекции, является рецептор эстрогена 1 (ESR1), , хорошо известный маркерный ген рака молочной железы, который кодирует рецептор эстрогена альфа (ER-). Известно, что в образцах рака молочной железы в просвете ER- экспрессируется в опухолевых клетках (тип ER +), тогда как он не экспрессируется в базальных образцах (тип ER-).Гормон эстроген, как известно, вызывает рост клеток рака молочной железы ER +, и некоторые виды гормональной терапии основаны на использовании антиэстрогенов в качестве лекарств против соответствующих форм рака молочной железы.

    Третий ген, занимающий первое место, калиевый канал, подсемейство K, член 15 (KCNK15, TASK-5) , является менее очевидным геном-кандидатом и в настоящее время неизвестен в онкогенезе. Однако было обнаружено, что KCNK15 подавляется гиперметилированием промоторной области во многих опухолях [114]. Ген кодирует белок двухпорового калиевого канала, что соответствует результатам для других ионных каналов, таких как канал Ca2 + CACNA1G и канал Na + SLC5A8 с предполагаемой функцией подавления опухоли, которые, как уже сообщалось, гиперметилированы. при различных раковых заболеваниях [115], [116].Таким образом, этот ген / белок может стать многообещающей целью для будущих исследований.

    Другим мембранным белком, выбранным обоими подходами, является мембранный белок с повторением WD (PWDMP, WDR19) . Белки WD-повторов образуют семейство структурно родственных белков, которые участвуют в нескольких клеточных функциях, включая образование пузырьков, везикулярный транспорт, трансмембранную передачу сигналов и модификацию мРНК [117]. В предыдущем исследовании рака молочной железы было выявлено, что WDR19 по-разному экспрессируется между клетками карциномы со сходной морфологией со здоровыми клетками и клетками с отклоняющейся, нерегулярной морфологией [118].Однако до сих пор WDR19 участвовал только в других типах рака, в частности, в раке простаты [119]. Интересно, что с помощью обоих подходов был выбран дополнительный белок, содержащий повтор WD, WDR32 (белок 32, содержащий повтор WD) , также известный как DDB1 и связанный с CUL4 фактор 10 . WDR32, как было обнаружено в базе данных Genes-to-Systems Breast Cancer (G2SBC), дифференциально экспрессируется в клетках рака груди в нескольких исследованиях [120].

    Шестым геном в наборе пересечений рейтинговых списков является связанный с G-белком пиримидинэргический рецептор P2Y6 , принадлежащий к группе рецепторов P2Y, которые отвечают на пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды.Было показано, что экспрессия P2Y6 не регулируется в случаях измененной реакции на прогестин из-за изменений в экспрессии изоформ рецепторов прогестерона, которые, как известно, возникают в клетках рака молочной железы [121]. Более того, в 2003 году была подана патентная заявка на способ обнаружения предопухолевых и неопластических состояний на основе уровней экспрессии P2Y (заявка на патент США 10/450 205).

    Наконец, ген, который наиболее часто встречается в различных вариантах транскриптов и занимает первое место в обоих методах отбора, - это рецептор семейства GDNF альфа 1 (GFRA1) , который встречается в вариантах транскрипта 1 и 2 и версии изоформы b .Нейротрофический фактор, происходящий из глиальных клеток (GDNF), который связывается с рецептором GFRA1, как известно, играет важную роль в дифференцировке и контроле выживания нейронов. Также было высказано предположение, что он действует как компонент воспалительной реакции при раке молочной железы, и экспериментальное исследование с использованием микроматрицы ткани рака молочной железы показало, что транскриптов GFRA1 сверхэкспрессируется в инвазивных карциномах молочной железы и, в частности, в рецепторах гормонов. –Положительные (ER + и PR +) опухоли [122].

    Таким образом, все гены, появляющиеся в обоих списках генов с наивысшим рейтингом из различных подходов к отбору, имеют предполагаемые или известные функциональные ассоциации с соответствующим типом рака. Хотя это не означает, что все гены с высокими оценками и соответствующие им продукты являются подходящими маркерами для диагностики или мониторинга раковых заболеваний, как автоматический анализ литературы, так и ручная проверка функциональных аннотаций генов с самым высоким рейтингом подтверждают полезность этих методов отбора для выявления и определения приоритетности предполагаемых маркеров, а также для биологической интерпретации данных.

    В то время как классические методы приоритезации генов основаны на единственном методе выбора признаков и единой мере достоверности [123], используемые здесь подходы используют либо информацию из множественных методов отбора, либо множественные модели прогнозирования, заданные ансамблями наборов правил BioHEL. Кроме того, учитывается надежность выбора в нескольких циклах перекрестной проверки.

    Наконец, поскольку списки генов-кандидатов с высокими показателями, которые были обнаружены с помощью множественных методов отбора признаков, ограничиваются относительно небольшими наборами атрибутов, возможно применить более чувствительные экспериментальные подходы для изучения отдельных генов и белков, например.грамм. с использованием количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР) или иммуногистохимии на тканевых микроматрицах, что проиллюстрировано успешной проверкой экспрессии гена RERG в качестве маркера для проб рака молочной железы, подобного просвету.

    Россия Федерациясайнинг Солик кодексининг 128 сан'ати бойича явобгарлик асослари

    128-modda HK RF: mohiyati va sharhlari (bu yilni qayta ko'rib chiqilishi) k. 16-бо'лимлар VI "Солик хукукбузарликлари ва уларнинг маджбуриятлари учун джавобгарлик" ва гувохлик бериш учун гувохлик бериш дараджасини белгилайди суд джарайониёльг'он гувохлик учжас дарайо дарайон.

    "Гувохлик явоби" тушунчаси

    Huquqshunoslikning boshqa sohalarida bo'lgani kabi, guvohlarning guvohliklari ushbu materialni ob'ektiv deb hisoblashga yordam beradigan ma'lumot sifatida ko'rib chiqiladi.

    Fuqarolarning fikriga ko'ra cheklovlar, shuningdek, deyarli bir xil.

    • балогатга этмаган бола;
    • тегишли худжат томонидан аклий гобилияцизлиги;
    • ushbu ish bo'yicha ushbu ish bo'yicha o'z ma'lumotlariga ega bo'lgan shaxslar kasbiy faoliyat (нотариуслар, адвокатлар, аудиторлар ва бошкалар).Патроны санатнинг 3-бандидир. 96 NK mamlakatlarda ba'zi hollarda mutaxassis jalb qilish, agar kerak bo'lsa, uning protsessual holatini o'zgartirish bilan shug'ullanishi mumkin.
    • рухонийлар 125-сонли "Видон эркинлиги то'г'рисида ...";
    • бу holatda moddiy yoki ma'naviy qiziqish mavjud bo'lgan jismoniy shaxs.

    Buni tanib olish kerak: Soliq jinoyatlari holatlarida protsessual daxlsizlikka duchor bo'lganlar doirasi juda shartli. Бу турли хил амалиотларга имкон берадиган камчиликлар.

    Shunday qilib, masalan, guvohlik paytida guvohlik olinishi mumkinmi yoki yo'qmi, aniqlik seziladi. фикрлар аджратилган: ба'зи адвокатлар буни хисобга олиш такикланмаган деб та'кидлашади, бошка мутаксассислар рози бо'лишмайди; Учинчиси - «руксат этилган» либерал та'рифи билан чекланган ». HK ushbu protsedurani aniqlamaydi.

    Россия Федерациясайнинг Soliq кодексининг 128-moddasi

    Hujjatda, qora rangda qora, qora tanlilar sifatida ma'lumot berishdan bosh tortadigan yoki soliq huquqbuzarliklari to'g'risida yaqinlashib kelayotgan shaxsning biridan uch ming rublgacha zary.

    Soliq jinoyatlari nuqtai nazaridan soxta guvohlik uchun Juda "yumshoq" jarimalar fiskal sohadagi qonun hujjatlarini liberallashtirish tendensiyasi bilan izohlanadi.

    Eslatma: Deyarli 20 yil oldin, 1999 yilda Soliq kodi 127-moddaga ulashgan 127-moddaga ulangan, hujjatlar va sub'ektlarni soliq organining talabiga binoan topshirishni rad etish uchun jazo tayinlandi.

    129-modda, shuningdek, expertlarning soliq invati tadbirlari holatlarini ko'rib chiqish ishtirokchilari bo'lgan tajriba o'tkazish uchun soxta ma'lumotlarni taqdim etish uchun javobgarlikni o'zlani zimlani.

    Маколанинг шархлари

    Aftidan, NCning eng muhim moddasi ob'ektiv natijalarning ma'nosini yo'qotishiga olib kelishi mumkin soliq tekshiruviVa huquqbuzar javobgarlikni qoldiradi.

    Shunday qilib, jalb qilingan Shohidlarning vijdonsiz xatti-harakatlari Russia Federationasining Jinoyat kodeksiga binoan pasayishi mumkin. Савол тугилади:

    • назар бо'лмаган нарса;
    • tergov idoralari bilan aloqa qilish natijasida sodir etilganligi;
    • объект ма'лумотни бериш;
    • qanday soxta guvohlik beradi.

    San'atga sharhlar. 128 HK. Россия Федерацияси Бундай характератлар куйидагича талкин гилинади.

    Назорат бо'лмаган - солик муассасасига униинг карори то'г'рисида хабардор qilish билан рад этиш. Rasmiy qo'ng'iroqni (odamlarga - "o'yin" o'yinida "-" o'yin "tushuntirishsiz e'tiborsiz qoldiring. Ikkala epizodlarda harakatlarga nisbatan hurmatni aniqlaydigan harakatlar marakatlar qasddqan mufqişdqqan muofqi.

    Misol sifatida siz quyidagilarni berishingiz mumkin:

    • baxtsiz hodisaga erishish;
    • qonuniylikni yo'qotish;
    • yuqumli касаллик ва бошкалар.

    Ammo Hurmatsiz sabablar odatda o'zlari isbotlanadi davlat idoralari. Бундай эпизодлар иккаласи хам ичиш ва бошлангич qo'ng'iroqni e'tiborsiz qoldirishi mumkin.

    Эслатма: Fuqarolik guvoh sifatida ma'lumot berishdan Bosh Tortganligi haqidagi rad etishni rad etishni keltirib chiqaradi. 128 ПФ, йозма йоки сан'атда расмий огохлантириш билан бирга келади. 90 ва 99 нг. Agar bu sodir bo'lmagan bo'lsa, yig'ish choralari qo'llanilmaydi. Shuni esda tutish kerakki, 128 характеров uning imkoniyatlari mavjud.

    Faqat bu holatda, sinovlar sanktsiyalar shaklida guvohlikka nisbatan qo'llanilishi mumkin. Ammo shuni yodda tutish kerakki, 128-moddaning harakati guvohliklarni noqonuniy rad etish bilan cheklangan. Бундай эпизодда Россия Федерация Конституциясайн 51-moddasiga muvofiq, yaqin odamlarga yoki o'ziga qarshi ko'rsatuvlardan kelib chiqadigan sabablar. «Sinovda» амалдаги процесслар to'g'risida faqat ma'lumot beriladi.

    Bu allaqachon qayd etilgan: tergov bilan hamkorlik qilish yoki to'liq qasddan bo'shatish yoki to'liq istamaslik, bunday harakatni Jinoyat kodeksining moddalari asosida ko'rib chiqish mumkin.Йоки джазо сан'атдан фойдаланади. Россия Федерациясайнинг Soliq kodeksining 114 - soliqni tiklash to'g'risida.

    Soliq audi bilan guvohlarga chorlash qoidalarini tushuntiradigan videoga qarang:

    Судья Фаррукшина Г.Р. 33-8842 иши

    Кассация та'рифи

    Фукаролик ишлари билан бог'лик муаммолар Олий суд Удмромр республики таркибидаги:

    Раиси Сопотиев И.Л.,

    Хакамлар кар И.Л.Джакиби Давлат11 Хакамлар кар И.Л., Шарова Давид ШароваА.

    Очик о'рганилган суд маджлиси Ижевскда 10.08.2011

    Кассация бойича федеральная инспекция апелляци солик хизмати Ижевскнинг Октябрьский туман

    Октябрьскийнинг qaroriga биноан Г. Изевскда.

    Андрева Н.П. байоноти Ижевскнинг Октябрьск туманида Федеральный солик хизмати инспекциясини комиссия учун явобгарликни о'з зиммасига олиш то'г'рисида ноконуний карор кабул килиш то'г'рисида солик хукукбузарликмамнун.

    2010 год 11 ноябрь куни Ижевск тумания Федеральный солик хизмати инспекциисинг 2000 год 11 ноябрь куни, 2010 год 11 ноябрь куни солик инспекциясинин Андреева Н.П. Soliq huquqbuzarlik uchun soliq majburiyatlari.

    Удмуртская Республика Копотев И.Л. Олий суди судьяси hisobotini eshitib, Ижевск Воробьева Е.В., Пономаренко И.О., вакили Андрева Н.П. - Лазарева Н.П., суд группы Октябрьский туман IFSS вакиллари тушунтиришлар

    Sozlamoq N.Ижевскнинг Октябрьск туманность Федеральный солик хизматини текшириш учун судга муроджаат кильди ното'г'ри эчимлар Солик хукукбузарлик учун солик майбуриятларини джалб qilish бо'йича 2010 год 11 ноября 001/001 Россия, АН Россия, 001211, Россия. -ни со'рок гилишни амалга осириши билан асосланади. каби индивидуаланави бош директор ООО

    Со'рок пайтида Андреева Н.П. San'at tomonidan taqdim etilgan huquqdan foydalanib, дана синовидан бош тортди.Россия Федерациясуществующая Конституциясинхронизация 51-Конституциясинин 51 нафари унга карши гувохлик беришни талаб килганини хисобга олсак.

    Россиянин Федеральный солик хизмати Ижевская туманность 2010 ил 4 октября куни сан'атнинг 2-бандида ко'рсатилган солик хукукини корсатган солик хукукини ко'рсатувчи фактларни аниклаш бо'йрдича н 10-50 128 нк рф.

    Arizachining e'tirozlari arizachiga taqdim etildi.

    2010 год 11 ноября Россиянинг Ижевскнинг Октябрьский туман Федеральный солик хизмати Н.Н. Н.П-ни джалб qilish bo'yicha 10-51 / 001 qaror chiqardi. Sohatning 2-bandida belgilangan soliq huquqi bo'yicha vakolatnomasi uchun javobgarlik bilan. Россия Федерациясоставляет 128 таси 3000 руб. Ярима шаклида.

    2010 год 23 ноября Андрева Н.П. Россиянин УДММММтда федеральный солик хизмати аризаси топширилди.

    Россия Федеральный солик хизмати рахбарияти 2010 за 13 декабря N 14-06 // [Электрон почта билан химояланган] Солик то'ловчи шикояти qondirmasdan qoldiriladi.

    Андреева Н.P. Rossiya Federationasining Konstitutsiyasining 51-moddasiga binoan Rossiya Federal Soliq xizmatining "Federal soliq xizmati" Federal soliq xizmatiga qarori noqonuniydir, chunki u o'z faoliyatiga oid savollarga javob berish huququriga ej.

    So'roq paytida Андрева Н.П. Унга ушбу корхона фаолияти билан бевосита бог'лик бо'лмаган саволлар ва ташкилот фаолияти билан бог'лик масалалар билан бевосита бог'лик.

    Андрева Н.П-ни корсатади Etakchi korxonaning faoliyati bo'yicha etakchi sifatida, bu shaxsiy javobgarlikni qo'llash shaklida zarar etkazishi mumkin.

    Андреева Н.П. Бошкарманинг Россия Федерациясі Конституциясинин 51-моддасига биноан, компания бощилигидаги корхона фаолияти хакидаги саволлар, у о'зини шаксан о'зи корсатадиган бошлик каби конунийбалида джакалиджанідир о'зідир о'зідір джаканідар джакубыр о'зідір о'зінідір джакідір джакідір о'зідір.

    Россия Федерация туманида Россия Федерациясайнинг Октетский туманидаги Федеральный солик ксизматининг чекланган талкинини Конституцияга койилган умумий принтсиппарнинг 51-моддаси (xususan, 2-modda va 45-modda.Россия Федерациясоставляет Конституции ва фукаролик ва сиёсий хукуклар то'г'рисидаги халкаро пактнинг 14-моддаси 14-моддизинирует 14-моддаси 14-моддаси (xususan, g) normalari).

    Суд мажлисида Андреева Н.П. Суд маджлисининг вакти ва джой хакида хабар берилмаган, судга ишни йо'кликда ко'риб чикилганлиги то'г'рисида йозма байонотни такдим этишда йозма байонот.

    Суд маджлисида Андрева Н.П., куллаб-кувватлаган далилар аризани кондиришдан со'ради.

    Soliq Organining vakili, Soliq Organining vakili talabni tanimadi.

    Sud yuqoridagi qarorni qabul qildi.

    Кассация шикоятида солик инспекцияси суд карорини бекор qilishga qarorni bekor qilishini so'raydi, chunki sud moddiy qonunni noto'g'ri qo'llanilishini bildiradi.

    Ushbu ishni ko'rib chiqayotganda, Sud kengashi Kassat shikoyatining dalillari doirasida sud qarorining qonuniyligi va asosliligini tekshiradi.

    Иш материалларини текширгандан со'нг, кассация шикоятинин далилларини мухокама qilib, суд кенгаши молиявий хукук нормарини бузган холда кабул qilinganidek bekor qilinishi uchun sud qarorini topadi.

    Ushbu materiallardan quyidagilar ko'rinadi.

    2008 год 1 ноябрдан 2010 год 18 октября Андреева Н.П. МЧЖ бош директора эди.

    2010 год 21 сентября куни N 10-5 / 476-гувохномага биноан Россиянинг "Октябрьск" федеральный солик хизмати, Ижевскнинг Октябрьский туманности Андреева Н.П-ни со'рок гилишди. Soliq nazorati amalga oshirilishi uchun muhim bo'lgan holatlar haqida, Андрева Н.П. ning ARREVA N.P. Нинг сан'ати, сан'ат хакида гапиришдан бош тортди. Россия ФедерацияСогласно Конституции 51.

    Джами Андрева Н.П. 91 савол, шу jumladan kompaniyaning iqtisodiy faoliyati to'g'risida so'rashdi.

    2010 год 6-октября Россия Федеральный солик ксизмати, Ижевск туманидаги Федеральный солик ксизмати Россия Федерациясайнинг Солик кодексининг Солик кодекси (истисно билан та'минланган хукукбузарликларни ко'рсатган аншикинджинджинхалан, 120/123-50 -moddada nazarda tutilgan soliq huquqbuzarliklari, unga binoan Andreeva Np noqonuniy ravishda guvohlik berishdan bosh Tortgan, u Андреева Н.пдан тикланиш таклиф килинган 3000 руб микдоридаги пентидан, Андреев Н.П ни джалб килинг. San'atning 2-bandida belgilangan javobgarlik. Россия Федерациясайнинг Солик кодексинин 128 нафари со'рок пайтида гувохлик беришдан рукссациз ишдан чикканлиги учун 128.

    Андрева Н.П. 20.10.2010 Belgilangan qonunga e'tirozlar taqdim etiladi.

    2009 год 11 ноября Россия Федерский туманность Россия Федеральный солик ксизмати рахбарининг о'ринбосари Россия Федерациясайнинг солик кодексининг Солик кодексида назарда тутилган хукукбузарликларни хисобга олиган холдак, далашилларни хисобга олгани холдак, далашилларни хисобга олиган'олдак, далашилларни солик хизобга олиган'олдак, далашилларни хисобга олиган'толдак, далашилларни соликан'олдук, далашилларни 122, 123-modda bilan ta'minlangan.San'atning 2-bandida belgilangan soliq majburiyatini olish. Россия Федерациясайнинг Солик кодексининг 128 таси анрева Н.П. tomonidan taklif qilingan 3000 руб. miqdorida jarima shaklida Jarima miqdorini to'lash.

    2010 год 23 ноября Андрева Н.П. 11.11.2010 йилдаги 10-51 / 001-сонли карори бо'йича шикоят Россия Федерациясайнинг федеральный солик хизмати рахбарияти томонидан солик идораси рахбарияти то'г'рисида.

    Россия Федеральный солик xizmati rahbariyati 2010 от 13 декабря N 14-06 / [Электрон почта билан химояланган], Шикоят Андрева Н.P. Russia Federal soliq xizmati to'g'risidagi qarori Izhevsk n 10-151 / 001 yildagi 10-51 / 001, soliq huquqbuzarlik komissiyasining komissiyasiga javoban qoniqishsiz qolib ketdi.

    Биринчи инстанция суди, талаб килинган карор аризачинин хукукларини, Андреева Н.П. Деб Талабларни Кондирди. Saytda soliq tekshiruvi paytida MChJ bosh direktori edi, Ya'ni tashkilotning qonuniy vakili, shuning uchun guvoh sifatida so'roq qilinishi mumkin emas va soliq to'lovchi Андрева Н.П. деб тушунтириш рад этмади.

    Sudyariya boshqaruvi arizachining da'volarini bajarish uchun asos bo'lib xizmat qilgan xulosasiga rozi bo'lolmaydi.

    Шундай килиб, со'рок протоколига кора, N10-35 / 476 йилларда 2000 год 21.09.2010 йилларда инспексия ходими Анрева Н.П. Та'лим хакидаги саволлар, тиббийот фанлари бо'йича иш тайрибаси, шунингдек, ООО, ООО хакида ташкилий табиат масалалари ва унинг иктисодий фаолияти.

    Barcha savollar uchun, istisnosiz, guvoh javob berish huquqidan foydalanib javob berishdan bosh Tortdi.Россия Федерациясуществующая Конституциясайнинг 51.

    Россия Федерацияси Солик кодексининг 31-моддасайн 1-бандида 12 мувофик, солик органлари солик назорат qilish uchun muhim bo'lgan har qanday holatlarni ma'lum eumatikin guvohda.

    Russia Federationasining Soliq kodeksining 90-moddasi Russia Federationasining Soliq kodeksining 90-moddasi, har bir kishi soliq nazorati uchun amal qiladigan har qanday holatni ko'rsatadiganda har qanday holatni guhdo ko'rsatishining m ко'зда тутилган.Guvohning guvohligi bayonnomaga kiritilgan.

    90-moddaning 2-bandiga binoan Soliq kodeksi guvoh sifatida so'roq qilinmaydi:

    1) Yoshlik tufayli ularning jismoniy yoki aqliy kamchiliklari soliq nazorati uchun mu'dlaray to'lgan olgatlar.

    2) солик назорати органлари учун зарур бо'лган ма'лумотларни ольган шакслар, шунингдек шунга о'шшаш ма'лумотлар ушбу шаксларнинг профессиональный сири билан бог'лик, хусусан адвокат, аудиторга, аудиторнишли.

    Россия ФедерацияСолик кодексинин 90-моддаси 3 9-моддаси бо'йича шаксснинг со'зларига ко'ра, шаксс факат Россия Федерацияси конунларида назарда тутилган асослар асосида гувохлик беришга ​​хакли.

    Россия Федерация Конституциясайнинг 51-моддисайнинг 11-моддасайн 1-моддасига мувофик, хеч ким уз-о'зидан, турмуш о'ртог'ига ва якин кариндошларига карши гувохлик федеральный бермайдиас бермайдианинг, унион айылконг.

    Россия Федерацияпроизводство оилавий кодексинин 14-моддасига биноан кариндошлар то'г'ридан-то'г'ри о'сиб борайотган ва пастга каратилайотган кариндошлари, я'ни.Ота-оналар ва болалар, бувилар, бувилар ва неваралар. Oila qonunchiligi munosabatlarni faqat ushbu shaxslar o'rtasida tartibga soladi.

    Russia Federationasining Soliq kodeksining 128-moddasiga binoan, iacha ko'rsatuvidan guvohsiz, shuningdek, yolg'on guvohlikning sanasi uch ming rubl miqdorida jarimani qaytarishga olib keladi.

    Андреева Н.П. Россия Федерацияси qonunlari, ya'ni San'at bilan ta'minlangan huquqni suiiste'mol qilish. Россия Федерацияси Конституциясининг 51 нафари ноконуний равишда юридик шакс фаолияти билан бог'лик саволларга джавоб беришдан бош тортди, шунингдек, якин кариндошларига та'сир кила олмайдиган та'лим оид саволла ишхир.

    Arizachining lavozimi, soliq organi guvohning guvohi (та'лим, иш таджрибаси) ва ташкилотнинг текшируви то'г'рисида умами саволлар ва ташкилот фаолияти то'г'рисида кандай уммий саволлар эмаселишга чакдай уммий саволлар бериша Джакин хакдай javobgar bo'ladi.

    Шу билан бирга, корсатилган саволлар Андрева Н.П учун гандай салбий окибатларга олиб келиши мумкинлиги хакидаги далилар Россия Федерациясодержание фукаролик процессов Кодексинин 56-моддасинимайга йозган судья, аридиасини бузган судья.

    Андрева Н.П. томонидан йозилган ко'рсатувлар О'з та'лимотида джамиятнинг худудий джойлашуви, компания фаолиятин ташкилий хусусиятига тегишли масалалар бо'йича, Андрева Н.П нинг хукукий хукуклари ва манфади. shaxs sifatida.

    Ариза бериш сан'ати. Россия Федерациясайнинг 128 Солик кодекси Сан'ат томонидан такдим этилган солик назорати хораларини амалга ошириш билан бевосита бог'ликдир. Россия Federationasining 90 soliq kodi, unda soliq nazorati uchun muhim bo'lgan ma'lumotlarni olish uchun muayyan ma'lumot va shartlar haqida gapiramiz.

    Russia Federationasining Soliq kodeksining 128-moddasiga binoan, iacha ko'rsatuvidan guvohsiz, shuningdek, yolg'on guvohlik berish sanasi uchta ming rubl miqdorida jarimaga uchraydi.

    Noqonuniy tajovuzkorlikning ob'ekti soliq nazorati va soliq institutlarini amalga oshirish uchun muhim bo'lgan har qanday holatda soliq Organining to'liq va ishonchli ma'lumotlarni olish huquqidir. Ushbu huquq subda mustahkamlangan. 13 п. 1 сан'ати. 31 НК РФ ва сан'ат. 90 нк рф.

    Mavzu san'at uchun javobgardir.Soliq kodeksining 90-moddasida belgilangan Rossiya Federationasining 128 tasi o'n olti yoshli shaxsga etib borgan har qanday shaxs:

    Yosh davri, ularning jismoniy yoki aqliy kamchiliklari tufayli'n olihir'asilga muzshorati ;

    Soliq nazorati uchun zarur bo'lgan ma'lumotlarni olish, ularning kasbiy majburiyatlari bajarilishi munosabati va shunga o'xshash ma'lumotlar ushbu shaxslarning профессиональный сири, xususanitor, адвокатлар, аудитлар, аудитор.

    Boshqa boshqa istisno qonun qonunchiligi mavjud emas.

    Зиддият бахсида, Андреева Н.П. Вояга этган киши, вазиятни сезона олмайдиган джисмоний йоки аклий камчиликларнинг мавджудлиги, судга берилмайди, улар бойича берилган ма'лумотларга адвокатларни амалга ошириш билан бог'лик фа'лмаптик йылган берг'лик фа'лгайк профессионал

    Россия Федерациясининг Солик кодексинин 90-моддаси, хар гандай шаксс иджтимоий, хукукий (шу джумладан расмий), со'рокни бошкаришнинг иджтимоий, хукукий, шу джумладан со'рокайшанди улыхални бошкарди .

    Шундай килиб, суднинг якунланиши Андреева Н.П. San'atga muvofiq javobgarlikka tortilmaydi. Россия Федерациясайнинг Солик кодексинин 128, бу ташкилотнинг этакчиси эканлиги сабабли, бу ното'гри, чунки у молиявий хукук normalarini noto'g'ri talqin qilishga asoslangan.

    San'atning 1-qismida nazarda tutilgan jinoyatning ob'ektiv tomoni. Россия Федерациясайнинг Soliq kodeksining 128 tasi huquqbuzarning faol harakatlaridan iborat.

    Ushbu huquqbuzarlikning sub'ektiv tomoni niyati bo'yicha aybdorlarning mavjudligini anglatadi.

    Guvohlikning ruxsatsiz rad etilishi har qanday shakldagi yoki alohida epizodlar tomonidan guvohlik berish istagining yoki uning alohida epizodlari bilan ko'rinadi.

    Андреева Н.П. Soliq organlarining ishonchli ma'lumotlarga bo'lgan huquqini buzadigan ongli bo'lgan ong, va uni xohlash.

    Муваффакияциз Анррева Н.П. Vaziyatli vaziyatda, ko'rib chiqilayotgan vaziyatdagi javoblar yozmaidan, barcha savollar o'z va yaqinlari soliqorganining huquqlari va qonuniy manfaatlariga ta'sir qiladigan ma'lumotlari oshqilni oshkor.нима болганда ветчина.

    Санат туфайли. Россия Федерациясуществующая Конституциясинтегрированная 51-конституциясинин джавобгарликга карши емас, о'зимизга карши гувохлик беришдан бош тортган шакслар; uning turmush o'rtog'i; Якин кариндошлар, я'ни: ота-оналар, болалар, фарзанд асраб олувчилар, бобо-буви ва набиралари, ака-ука ва опа-сингиллар.

    San'atdan foydalanishning qonuniyligi uchun. Россия Федерациясоздание Конституциисайнинг 51 Шохиди, бу гувохликлар йопилганлигини ва джиноят содир этишда унинг якин кариндошлари хам шуни исботлашлари керак.Санъатнинг бошка талькини. Россия Федерациясайнинг 51-моддаси давлат организация хукукларини амалга ошириш билан бог'лик холда, унга зарур бо'лган ма'лумотларни олиш учун давлат организация хукукларини бузишга олиб келади ва'а'га'забаджад хардида хандайджа кадайджа каанджанда харди Келади ва'а'га'заджада харди Канджанда харди Келади узоклашиш. Soliq kodeksining 128 tasi yaroqsiz bo'ladi.

    Россия Федерация, Конституция суди, хатто, федеральное объединение 19-моддаси, 19-моддаснинг, 19-моддасида, барпо, этилган, парламент хукуци, ветчина 08.05.1994 г., боеприпасы 17-модданинг 3-цисминги талабларини баджариш пайтида, адолатли фаолиятни амалга ошириш билан бог'лик бо'лмаган фукаролик манфаатларини амалга ошириш билан бог'лик бо'лфагароголатликлар, бо'лган фу'лгаролатликлар holatlarning diqqatga sazovorligini kuchaytirishga imkon bermaydi va Rossiya Federationasining Konstitutsiyasining 52-moddasi.

    Shunday qilib, da'vogar Russia Federationasining Konstitutsiyasining 51-moddasini talqin qilib, maqola tarkibini tushunish, har qanday ko'rsatma bermaslik majburiyatini tushunish, shuningdek, amaldiragi qonunchidilik normal.Fuqarolik qarzining tamoyillari sifatida fuqaroning fuqarosi bo'lgan jamiyat uchun javobgarlikni tan olish va qabul qilish.

    Shohid, belgilangan normadan faqat o'z huquqlari va manfaatlariga индивидуальный ta'sir ko'rsatayotgan savollarga javob berishga haqlidir.

    Shu bilan birga, so'roq paytida guvoh so'roq yuridik shaxs faoliyati bilan bog'liq savollar berildi - MChJRossiya Federationasi Konstitutsiyasining 51-moddasi normalari qo'llanilmaydi.

    Белгиланганский саволлар Ташкилот Россия Федерация, специализирующаяся на хисоботидах, РФ hisobotini ва NCning NC hisobotida, shuningdek, NC tomonidan taqdim etilgan, shuningdek, Soliq Audit MChJ tomonidan taqdim etilgan bay hujjjatlar.

    Barcha muammolar uchun ko'rsatuv berishdan bosh torish, soliq organining huquqiy vakolatini amalga oshirish uchun tasdiqlash tashkilotining mansabdor shaxsiga qasddan to'siqni ko'rsatadi.

    Шундай qilib, Soliq, организация Andreva N.P-ning soliq majburiyatlarini jalb qilish to'g'risidagi qarori. Бу qonuniy tan olinishi kerak.

    Бундай шароитда ушбу карор талабларга джавоб беришни рад этиш учун янги карорни такдим этиш билан бекор цилиниши керак.

    San'at yo'nalishi.Россия Федерацияси, суд хай'атинин фукаролик процедурасининг 361 коди

    Аникламок

    Иш бо'йича янги карор кабул цилин.

    Андрева Н.П. 2010 год 11 ноября Джазвид солик хизмати инспекциясида Федеральный солик хизмати инспекцияси томонидан 2010 год 11 ноябрь куни Ижевский туманидаги Федеральный солик хизмати инспекциясинспекциясини ноконуний карори билан. Soliq huquqbuzarlik komissiyasi uchun.

    Qoniqish uchun кассация шикояти.

    Раиси Копотиев И.Л.

    Хакамлар Глюхова И.Л.

    Soliq Inspektsiyasi katta imkoniyatga ega, шу jumladan u uchun ko'rsatuvlar yoki har qanday ma'lumot uchun u uchun foydali bo'lishi mumkin bo'lganlarning vazifasi.

    Hurmatli o'quvchilar! Макола хукукий масалаларни хал цилишнинг одатий усуллари хакида хикоя цилинади, аммо хар бир холат - бу шакс. Agar siz buni bilishni istasangiz muammoni hal qiling - maslahatchi bilan bog'laning:

    Ilovalar ва qo'ng'iroqlar haftasiga etti kun va etti kun qabul qilinadi..

    Bu tez i. Бепул !

    Ma'lumki, guvoh bo'lgan guvoh - bu har qanday dalil yoki aksincha, рад этилган такдирда иуда мухим шакс.

    Шу сабабли, бундай шакссларнинг йордами нафакат джиноят холатларида, балки биз билан таниш бо'лганидек, балки соликка хам тегишли.

    Сиз нимани билишиз керак

    Ishni ko'rib chiqayotganda, qoidabuzarni bilishi, bilishi yoki u bilan aloqani bilishi yoki biron bir aloqasi bo'lgan guvohlar talab qilishi mumkin.

    Soliq ishlari kompaniyalar, biznes sheriklar va boshqa barcha shaxslarning bir-biri bilan bevosita bog'liq va foydali ma'lumotlarni jalb qiladi.

    Shunday qilib, mamlakatning ko'rsatuviga taklif qiling, shuning uchun bunday tartibda, kun tartibi buning boshqa holatlarda bo'lgani kabi, kun tartibi buni ta'minlaydi.

    Shuning uchun, agar odam biron bir hujjatni olmasa, u tanada bo'lmasligi mumkin va buning uchun jazo bo'lmaydi.

    Агар кун tartibi uning manziliga kelsa, bu erda Soliq kodeksi ma'lum bir mas'uliyat bilan unga tegishli bo'lgan talablarga muvofiq kelmagan.

    Soliq organlarini yuboradigan ikki xil hujjatlar mavjud va bu ushbu talabning qanday maqsadiga bog'liq.

    Agar kun tartibi faqat so'roq qilish uchun mo'ljallangan bo'lsa, unda bunday qog'ozni ogohlantirish sifatida kuzatib borishi kerak.

    Boshqa har qanday taklif usullari hech qanday qonuniy kuchga ega emas, shuning uchun agar siz Rossiya MM -33/06 Federal soliq xizmati tartibini tasdiqlamasdan, siz tasdiqlangan yoki gilam bilan telefon shqilim, xilan telefon qilaris, makilos .Xuddi шу нарса o'qish shaklida qo'llaniladi.

    Agar ular qoidalarga muvofiq bajarilmagan bo'lsa, bunday ko'rsatmalarga hech qanday qonuniy kuchga ega emas va ishda dalil sifatida ishtirok etolmaydi.

    Bunday harflar va talablardan qo'rqmang, chunki Aksariyat hollarda, ularning savollari QQS yoki boshqa tushunmovchiliklar bilan bog'liq.

    Qonunchilik bazasi

    NK RF 1-qismi san'ati. 80-сонли шубхали ишларга чакирувлар йоки гувохларнинг иштирок этиш учун ваколатлар мавджуд, улар орасида гумон килинган qoidabuzarlik билан бог'лик бо'лган шакслар йоки компаньялар ходимлари бо.

    Qo'ng'iroq qilish huquqi har qanday jismoniy qiyinchiliklarga beriladi. Guvoh sifatida foydali bo'lishi mumkin bo'lgan kishi. 2-разм. 90 talablar bo'yicha guvohlik bermaslik huquqiga ega bo'lgan fuqarolarning ro'yxatini o'z ichiga oladi.

    Qonunda faqat Russia Federationasining qonunlariga zid bo'lmagan ko'rsatmalar rad etish ko'zda tutilgan. So'roq qilish, bolalari, kichik yoshi yoki ruhiy holati ularning ishda etarli darajada guvohlik berish va ishtirok etish qobiliyatini bildiradi.

    2 ош кошикча. 31 НК РФ har qanday jismoniy deb hisoblash uchun soliq organining huquqini anglatadi. Бу холатда далилар базасини олиш гувохи сифатида.

    Russia Federationasining Soliq kodeksining 128-moddasida sharhlar va mulohazalar rad etilganligi yoki muvaffaqiyatsizligi bo'yicha jazo sana uchun javobgarlik va jazo choralari to'g'risida guvohlik berisha.

    Qonunda soliq xizmatining talabiga binoan yoki tashqi ko'rinishga yoki undan bo'yin tovlashi mumkin bo'lgan ikkita vaziyatni ko'zda tutadi.

    Shuningdek, ushbu moddani noqonuniy ravishda tekshirish iltimosiga binoan qo'llab-quvvatlagan yoki yolg'on guvohlik bergan shaxslar uchun jarima miqdori oshirilmoqda.

    San'at. Россия Федерациясайнинг Солик кодексинин 51 нафар гувохлик беришга, о'зларига нисбатан, уларнинг кариндошлари йоки до'стларига карши гувохлик бермаслик хукукини беради. Ушбу сабаблар ветчина хурматли ва рад этиш учун ишлатилади.

    Биринчи стандарт бир гисми

    Стандартизация 1 qismida tekshiruv iltimosiga binoan tekshirish to'g'risidagi iltimosiga binoan asosli sabablarga ko'ra guvohlik berishga bag'ishlangan.

    Иккинчи кисм

    Макола бошкача вазиятни назарда тутади, боеприпасы гувох о'зини о'зи бошкармаса йоки пайдо бо'лган, боеприпасы аник йолг'он гувохлик берган.

    Бундай холда, явобгарликни кучайтиради, шунинг учун бундай характерат учун джазо 3 мин рубл бо'лади.

    Нима сабаб бо'лган

    Xizmatni chaqirish Ko'pgina masalalar bilan bog'liq bo'lishi mumkin, shuning uchun siz bunday talabni olganingizda vahima bosmaslik kerak.

    Умуми вазиятлардан бири бу сизнинг qo'shnilaringizning ишг'олчилиги, контрагент, шартнома имзолаган компания ва бошкаларга тегишли бо'лган шакслардир.

    Инспектор хамма нарсани билмаслиги мамкин, шунинг учун уларнинг шубхаларини тушунишга йордам берадиган одамларни таклиф калади.

    Bu standart ma'lumot sinovi, hisobot ва компания daromadlari va ko'p narsa bilan taqqoslash bo'lishi mumkin.

    ва гувохларнинг вазифаси халол ва аник джавоб бериш учун, акш холда юнинг со'злари тушунмаслиги мамкин ва у йолг'он гувохлик то'г'рисида маколани олади.

    Talab solig'i bo'yicha soliqqa tashrif buyurish paytida tashvishlanmaslik kerak va faoliyatingiz yoki hamkorlik olib boradigan har qanday muammolarga yoki ular bilan bog'liq bo'lgan har qanday muammolarlish keayrayy.

    Rahbariyat har qanday kompaniya, uning ma'lumotlar, hisobvaraqlari va guvohlar, agar iloji bo'lsa, ularga qonun hujjatlariga asoslangan ko'rsatmalardan voz kechish uchun hech qanday'cabum ularish málmasa.

    Asosiy tez-tez so'raladigan savollar quyidagilarga tegishli:

    1. Qanday qilib vaqaysi vaqtda gumondor bilan ishlay boshladingiz.
    2. Uni qayerdan bilasiz.
    3. Hamkorlik qanday o'tdi.
    4. Shartnomalar yoki shartnomalarni imzolashda qanday yuzlar jalb qilindi.
    5. Kontaktlar, hisob ma'lumotlari, Gumon qilinuvchining manzili.
    6. Qayerda saqlanadigan ва hokazolarga qanday xizmatlarga berilgan.

    Хамма саволларга, боеприпасы бундай характерда киядиган барча нарсалар дастаси.

    Shaxslarni jalb qilishning o'ziga xos xususiyati

    Soliq xizmati doimiy soliq nazoratini amalga oshirish uchun mavjud, shuning uchun ular nafaqat nazorat qilish, balki aks ettirilgan hisobotlarga, ayniqsa ular shubhali yoki nomuvofihdishqil chouvofiqirdıkı k

    Shuning uchun, qonun mamlakatning keng ma'lumotlari uchun foydali bo'lishi mumkin bo'lgan har qanday shaxslarni chaqirish huquqini beradi.

    Asosan yaqin atrofdagi qo'shni kompaniyalar, chunki Qo'shnilar har doim bir-birlarini bilishadi.

    Ba'zida shubhali shaxsning hattoki xodimlar ham so'roqqa ishonish yoki tasdiqlash uchun, chunki ular har kuni ma'lumotga ega va nima qilish kerakligini bilishadi.

    Agar ular tijorat sirlarini oshkor etmaslik to'g'risida kelishuvni faqat istisno qilishlari mumkin.

    Расмий кун тартибига гувохлик бериш учун чакирув учун келиши керак. Agar u pochta qutisiga qo'yilsa, u shaxsan qo'lda topshirilgunga qadar so'rovni e'tiborsiz qoldirish uchun to'liq huquqqa ega.

    Hujjat shaklida va talablarga rioya etilishi to'g'risida e'tibor berish kerak. Tashqi ko'rinishi bilan so'roq halol bo'lishi va savollarga aniq javob berishi kerak.

    Natijada, so'roq qilingan odam o'zining ko'rsatuvlari bilan tanishishi va imzo chekishi kerak.Шунингдек, у протокол шаклида этибор бериши ва объединение qonuniyligiga ishonch hosil qilishi kerak.

    Ma'lumot qog'ozga aniq, mubolag'a va qo'shimcha buzilishsiz oziqlanadi. Агар джараонда бир нечта шакс иштирок еца, уларнинг мавджудлиги ког'озга о'рнатилиши керак.

    Oxirida, yozma so'zlar bilan tanishishdan keyin guvohnomani tasdiqlaydi.

    Ёлгон мас'улиятли юзлар

    Agar guvohlik uchun asossiz ko'rinishga ega bo'lmagan yoki haqiqatga mos kelmaydigan guvohnoma berilmasam, guvoh bilan javobgar bo'lishi mumkin.

    Ma'lum bo'lishicha, so'roq qilingan protokolga yuborilganida, har bir so'z, agar Inspektor soxta ma'lumot yozgichi yoki guvohlik berilsa, darhol jinoyatda ayblanib, qabul qilinadi arzimas narsa.

    Jazoni faqat ma'muriy xususiyatni kiyishi mumkin va Jinoyat kodeksida kesishmaydi.

    Guvoh sifatida olish mumkin bo'lgan maksimal muammolar maksimal darajada katta hajmda, боеприпасы ko'pi bilan emas.

    Qiziquvchilar

    Qonunchilikka ko'ra manfaatdor tomonlar qonunchilikka muvofiq, soliqqa tortiladilar.

    Avvalo, bu korxonaning rahbari, chunki U bu ishning natijasi bilan qiziqadi va tushuntirish uchun qo'shimcha ma'lumotlar, faktlar, dalillar, hisobotlar va boshqalar va boshqumufga pomlakanishiata.

    Видео: Soliq tekshiruvi bilan so'roq qilish

    Nafas olish yoki tashqi ko'rinishni sodir etish uchun shaxsning qonuniy huquqbuzarlik holatida guvoh sifatida chaqirilgan,

    minglab rubl miqdorida jarimani tiklashga olib keladi.

    Guvohliklardan guvohlik berish, shuningdek, iacha soxta guvohlik berishdan voz kechish

    bu uch ming rubl miqdorida jarimani tiklashga olib keladi.

    Сан'атга шарх беринг. 128 нк рф

    Soliq huquqbuzarlik ishlarida jarayon davomida sodir etilgan huquqbuzarliklar mustaqil soliq institutlarini amalga oshiradi. Унда Россия Федерациясайнинг Soliq kodeksining 128 va 129-moddalari kiritilgan, soliq huquqbuzarliklari jarayonida ishtirok etgan shaxslarning noqonuniy xatti-harakatlari uchun javobgarlikni ta'minladi.Bunday odamlar guvoh, ekspert, mutaxassis va tarjimon. Россия Федерациясайнинг Soliq kodeksining 31-moddasiga muvofiq soliq idorasi mutaxassislar, ekspertlar, ekspertlar, soliq nazorati bo'yicha tarjimonni, soliq nazorati uchun muhim bo'lgan har'lgan at'lgan holatni bilishi. Soliq huquqbuzarlik holatida guvoh sifatida, ishda belgilangan har qanday holatni ma'lum qilishlari mumkinligini eslash maqsadga muvofiqdir.

    1. Тахлил килинган акт - солик назорати ва солик аудити пайтида, солик текшируви ва солик хукуки бо'йича иш юритиш билан бог'лик бо'лган муносабатлардир.Шу билан бирга, айбдор Кодекснинг 23-моддаси, 90-моддаси, 90-модда, 90-модда сифатида, то'г'ридан-то'г'ри объект, унга берилган вазифаларни баджармаганлиги йоки мото'г'ри баджарилиги билан то'г'ридан-то'г'ри объект. . Ushbu huquqbuzarlikning xavfi shundaki, soliq tekshiruvi natijalarini rad etib, ularning ishonchliligi haqidagi asossiz shubhalarni keltirib chiqarishi mumkin, bu soliq organlarining boshqarshi shundaki ukchradi.

    2. Ushbu huquqning ob'ektiv tomoni guvohlarning harakatlarida ham, ham emas.Келинг, ба'зи та'рифларни тушунтириб берамиз:

    a) Hech qanday ko'rinishda soliq organida (belgilangan tartibda yuzaga kelganiga qaramay - San'at xatboshisiga qarang - русская федерацияасининг 90-bandiga sharhni ko'ring. Bevosita va aniq;

    б) Ташки ко'ринишдан кочиш айбдорлик аслида солик органида эмас, гарчи рад этмайди;

    c) ва ташки ко'ринишдан воз кечиш, кейинчалик улар йаксши сабабларсиз кабул цилинганда, ушбу хукукбузарликнинг объект томони белгиларини яратинг.O'zining haqiqiy bo'lishi uchun bir yoki boshqa sabab bor, biri faqat ma'lum bir vaziyatni tahlil qilish asosida baholash mumkin. Сусусан, амалда, тегишли сабабларга ко'ра хурмат куйидагилар киради:

    Tashqi ko'rinishga to'sqinlik qiladigan eng xavfli kasallik kasalligi;

    Kasal Oila a'zosiga g'amxo'rlik qilish zarurati;

    Guvohning hayotida ba'zi tantanali hodisa;

    Qisqa muddatli harbiy to'lovlarni chaqiring;

    Baxtsiz hodisa yoki baxtsiz hodisa, yo'l-transport hodisasi va boshqalar.

    Пайдо бо'лишнинг хурмацизлиги (ташки ко'ринишда бо'рон) солик органлайнинг о'зи томонидан исботланиши керак;

    г) гувох болган соликни бузганлик бойича иш юритишни ишлаб чикарадиган мансабдор шакс томонидан берилган;

    e) шархнинг иккинчи qismida nazarda tutilgan jinoyatning ob'ektiv tomoni, bunday hujjatlarni o'z ichiga oladi:

    Guvohlikdan guvohlik berilmagan. Рад этиш учун ариза йозма равишда ветчина, ог'из оркали ветчина амальга осирилиши мамкин (хар гандай холатда ветчина, бу сан'атнинг 1-бандда корсатилган протоколольда акс эттирилган.90 ва Ст. 99 нафари Россия Федерациясайнинг Солик кодексининг 99)). Джиноятчилар Россия Федерацияси Soliq кодексининг 128-moddasi bo'yicha sudga tortiladi, ularning soni to'liq ва qisman rad javobini rad etishdi. Mutlaqo niyat ва гувохлик бериш сабаблари: солик то'ловчи билан алокаларни барбод qilishdan, солик органлари билан хамкорлик qilishni istamaslik ва бошкалар. Boshqa tomondan, sharhlangan maqolada, bu ruxsatsiz muvaffaqiyatsizlikka bog'liq. О'зи, турмуш о'ртог'ига, турмуш о'ртог'ига, якин кариндошларига карши гувохлик бермаса, конуний равишда конун худжятларида назарда тутилган бошка холатларда, о'зидан, гувохлый оикрсто-дэбэдан кариндошлар оикрсто 'илаш керак.Ko'rsatmalar (koinotdan bosh Tortgan yozgi) har qanday ma'lumot bo'lib, soliq huquqi bo'yicha guvohga ma'lum bo'lgan holatlar. Бирок, бизнес факат соликни бошкариш билан бог'лик бо'лган бундай холатлар хакида гапирамиз. Бошка холатлар хакида, шакс бериш учун эмас, балки гувохлик беришга ​​хакли;

    Kotteje, шубхасиз йолг'он гувохликлар айбдорлик солик организации мансабдор шаксларини онгли равишда определениядан чикарганлиджини англатади;

    (e) шархда ко'рсатилган джиноятнинг макшади иккала харакатнинг максади (масалан, аник йолг'он гувохлик санаси) ва харакацизлик билан тавсифланади (масалан, гувохлик беришганда йанаси).

    3. Faqatgina shaxslar ushbu huquqbuzarlik bo'lishi mumkin (бу то'г'ридан-то'г'ри сан'атнинг 1-бандига биноан, Россия Федерация, как 90-бандиг биноан берилади). Shuni ta'kidlash kerakki, guvoh sifatida guvohlik voyaga etmaganlar, shuningdek, jismoniy yoki aqliy kamchiliklar tufayli, ish uchun muhim bo'lgan holatlarni to'g'ri qabul Federation qila modasii

    Boshqa tomondan, guvohning guvohligi, kasalligi, qarilik, qarilik, nogironlik soliq idoralarida va mansabdor shaxsning ixtiyorida ko'rinmasligi mumkin Soliq Organi - va boshqa hollarda (сан.90 нк).

    Ushbu maqolada nazarda tutilgan mas'uliyat bo'lsa, agar qonunda Rossiya Federationasi Jinoyat kodeksining normalarida nazarda tutilgan jinoyat belgilari bo'lmasa.

    4. Тахлил гилинайотган характерный субъект томони факат касддан айбдорлик шакли билан тавсифланади. Бу одам ушбу солик хукукини бузиб, конунни бузганлигини тасаввур килиб бо'лмайди (хакикат ва маджбуриятлар солик идораси вакили томонидан тушунтириши керак. Шундай килиб, айбдор'вита-йокилан йокилан йокилан йокилъатс 128 йокилан йокилан йокатни йокитс 128 йокий тогилан йокилан йокитан йокилан йокилан йокитан йокитс ныйгатс 128 нафари (128 нафар федерациянинг 128 таси), шунингдек, сокта йолг'он совг'аси билан та'минлайди гувохлик (иккинчи гисми).

    Taqdimot materiallaridan kelib chiqqan holda, umumiy yurisdiktsiya sudlarining qarorlari, ariza beruvchi soliq, организация qarorlarini qabul qilishdan bosh Tortdi, uni javobgarlikni rad etish uchun ruxchuniz raddiish etish uchun ruxschuniz raddiish etish uchun ruxschuniz raddiish etish.

    Ushbu maqola guvohlarning soliq insiatsiyasida bo'lgan taqdirda guvohlarning javobgarligini belgilaydi.

    Россия Федерациясайнинг Soliq kodeksining 128-moddasida ko'rsatilgan soliq solish huquqi tarkibi rasmiy hisoblanadi.Хар сафар, yaxshi sababsiz aylanib qolmasdan, yuz soliqni buzadi. Юзи солик идораси учун ягона джиноятда гувох сифатида олиб кетилмаслиги, бундай джиноят учун джавобгарликни джалб qilish юзага келади.

    Ushbu xulosa sud amaliyotida tuzilgan (2012 год 13 марта, Шаркий Сибирь, туманность, Максус Сибирь, майнинг, карори билан каранг. 32.11.9.2011 год

    )

    Shuni yodda tutish kerakki, Russia Federationasining 90-moddasi 9-moddasiga binoan shaxslarni so'roq qilishda, luttersning guvoh sifatida yoki aniq yolg'on guvohlik sovg'asi uchun to'sqinlik qilinlik.Россия Федерациясайнинг Soliq кодексининг 128-моддасида назарда тутилган.

    29.03.2012 yil A323.2012 yil № 2923.2012 yil № 29.03.2012 yildagi qarorda Шимолий Кавказ туманидаги ФАС томонидан сюнга о'хшаш лавозимида келтирильди.

    Shuni yodda tutish kerakki, Russia Federationasining Soliq kodeksi kengaytma rad etilishini rad etishga sabab bo'lgan shaxsning javobgarligini ta'minlamaydi. Шу билан бирга, ма'мурий джавобгарлик (Россия Федерациясинин Ма'мурий Кодексинин 19.4-moddasi) tushuntirishning asorati sifatida tushunish darajasida ko'rinmasligi uchun qo'llanilishi mumkin.

    17.07.2013 yillardagi Maktubning 5.1-bandida Rossiya Federal soliq xizmati direktorni so'roq qilgan, guvoh sifatida tekshirilgan va aniq qiziqqan soliq to'lovchining bosh hisobchisi direktorni so'roqilishni Солик кодексининг 31-моддаси).

    Россия Федерацияси Солик кодексининг 90-моддасига биноан хар Кандай Шакс хар Кандай Шаксни гувохлик бериш учун гувох сифатида этказилиши мумкин, улар солик назорати учун амал каладиган хар кандай холатумни билдиши.

    Ular guvoh sifatida so'roq qilinishi mumkin emas, xususan, yosh yoshi, jismoniy yoki aqliy kamchiliklari soliq nazorati amalga oshirilishining ahamiyati (90-bandda) muhimligini aniqlay Federation olmraqilardilar. Soliq organi xodimi so'roqni olib boruvchi zobit Rossiya Federationasining 90-moddasining 90-moddasida ko'rsatilgan shaxslarga guvoh bo'lmasligi kerakligini aniqlaydi.

    Россия Федерацияпроизводство Фукаролик Кодексининг 172-моддаларидан 172-моддасида 14 Ёшгача бо'лган шакслар киради.

    Шундай килиб, 15 йошга то'лган шакс гувох сифатида со'рок цилиниши мамкин, боеприпасы Россия Федерациясининг Солик кодексининг 107-моддаси 2-бандига ко'ра, шаксс факат йошдан бошлаб солик 900 инвентациясум хисобга 16.

    Shunday qilib, 16 yoshga to'lmagan guvoh sifatida jalb qilingan shaxs Russia Federationasining Soliq kodeksining 128-moddasiga binoan javobgar bo'lmaydi.

    miR-301a нацелена на фактор репрессии NF-k B (NKRF).(A) miR-301a ...

    Контекст 1

    ... мы трансфицировали клетки 293T конструкцией miR-301a и экстрагировали растворимые белки для исследования уровней экспрессии Tax1bp1 и Nkrf. Белок Nkrf снижался в B3 раза, когда miR-301a сверхэкспрессировалась в B42 раза в клетках HEK-293T (фиг. 2A и B), в то время как уровни Tax1bp1 не изменялись. Мы проверили, влияет ли подавление miR-301a в клетках 293T на экспрессию Nkrf. ...

    Контекст 2

    ... проверили, влияет ли подавление miR-301a в клетках 293T на экспрессию Nkrf. Как показано на фиг. 2A и B, когда уровни экспрессии miR-301a были снижены на B80% с использованием антисмыслового ингибитора (анти-miR-301a), экспрессия белка Nkrf увеличивалась примерно в два раза. Реакцию qRT-PCR проводили, чтобы определить, изменился ли уровень мРНК NKRF при модуляции экспрессии miR-301a. ...

    Контекст 3

    ... EMBO Journal VOL 30 | № 1 | 2011, когда miR-301a подавлялась, и она снижалась с избыточной экспрессией miR-301a (Figure 2B and C).Эти данные предполагают, что экспрессия NKRF негативно регулируется miR-301a посредством деградации мРНК. ...

    Контекст 4

    ... данные свидетельствуют о том, что экспрессия NKRF негативно регулируется miR-301a посредством деградации мРНК. Кроме того, когда уровень экспрессии Nkrf снижался с помощью siRNA против Nkrf (siNkrf), экспрессия NF-kB-зависимого репортера повышалась в B2,5 раза (рис. 2D), что указывает на активацию NF-kB с помощью miR- 301a, вероятно, из-за понижающей регуляции Nkrf.Более того, наши анализы in silico показали, что взаимодействие miR-301a: NKRF сохраняется у человека, крысы и мыши (Lewis et al, 2005) - обнаружение, указывающее на регуляторную важность (Figure 2E). ...

    Контекст 5

    ... когда уровень экспрессии Nkrf снижался с помощью siRNA против Nkrf (siNkrf), экспрессия NF-kB-зависимого репортера повышалась в B2,5 раза (рис. 2D). ), указывая на то, что активация NF-kB с помощью miR-301a, вероятно, происходит через подавление регуляции Nkrf.Более того, наши анализы in silico показали, что взаимодействие miR-301a: NKRF сохраняется у человека, крысы и мыши (Lewis et al, 2005) - обнаружение, указывающее на регуляторную важность (Figure 2E). Примечательно, что отсутствует идеальное начальное совпадение между miR-301a и NKRF 3 0 UTR. ...

    Контекст 6

    ... G: пары "колебание-основание" U присутствуют в области зародыша, но имеется много компенсаторных 3 0 пар (10 пар) (Bartel, 2009). Для дальнейшего тестирования важности комплементарного спаривания 30 мы ввели miR-130a, которая имеет ту же затравочную последовательность, но 9 из 10 компенсаторных пар оснований нарушены по сравнению с miR-301a (дополнительный рисунок S2).MiR-130a не влияла ни на уровень экспрессии Nkrf (дополнительный рисунок S2B), ни на активность репортера NF-kB (дополнительный рисунок S2C), что указывает на то, что комплементация 30 части miR-301a в 30 UTR NKRF является существенной для Nkrf- отрицательное регулирование. ...

    Контекст 7

    ... для дальнейшего тестирования важности сопряжения с дополнительными 30, мы ввели miR-130a, имеющую ту же начальную последовательность, но 9 из 10 пар компенсирующих оснований нарушены по сравнению с miR-301a (дополнительный рисунок S2).MiR-130a не влияла ни на уровень экспрессии Nkrf (дополнительный рисунок S2B), ни на активность репортера NF-kB (дополнительный рисунок S2C), что указывает на то, что комплементация 30 части miR-301a в 30 UTR NKRF является существенной для Nkrf- отрицательное регулирование. Таким образом, мы заключаем, что взаимодействие miR-301a и NKRF представляет собой 3 0 компенсаторный сайт (Bartel, 2009) и первый с двумя парами G: U. ...

    Контекст 8

    ... для дальнейшего тестирования важности сопряжения комплементарных 30 мы ввели miR-130a, имеющую ту же начальную последовательность, но 9 из 10 пар компенсирующих оснований нарушены по сравнению с miR-301a (дополнительный рисунок S2).MiR-130a не влияла ни на уровень экспрессии Nkrf (дополнительный рисунок S2B), ни на активность репортера NF-kB (дополнительный рисунок S2C), что указывает на то, что комплементация 30 части miR-301a в 30 UTR NKRF является существенной для Nkrf- отрицательное регулирование. Таким образом, мы заключаем, что взаимодействие miR-301a и NKRF представляет собой 3 0 компенсаторный сайт (Bartel, 2009) и первый с двумя парами G: U. ...

    Контекст 9

    ... проверить, нацелен ли miR-301a непосредственно на 30 UTR гена NKRF, мы клонировали 30 UTR NKRF ниже гена Rluc pRL-TK и выполнили второй анализ с miR-301a и 21 другой miRNA, все из которых предположительно нацелены на NKRF.Мы обнаружили, что репортер подавлялся больше всего при введении miR-301a (рис. 2F). Впоследствии мы мутировали 30 UTR, чтобы нарушить его взаимодействие с затравочной последовательностью miR-301a, и обнаружили, что подавление репортерной регуляции с помощью miR-301a в значительной степени отменено (рис. 2G и H). ...

    Context 10

    ... обнаружил, что репортер был подавлен сильнее всего, когда был введен miR-301a (Рисунок 2F). Впоследствии мы мутировали 30 UTR, чтобы нарушить его взаимодействие с затравочной последовательностью miR-301a, и обнаружили, что подавление репортерной регуляции с помощью miR-301a в значительной степени отменено (рис. 2G и H).Эти результаты показывают, что сверхэкспрессия miR-301a подавляет уровни белка Nkrf и что подавление Nkrf с помощью miR-301a зависит от NKRF 3 0 UTR. ...

    Контекст 11

    ... результаты показывают, что сверхэкспрессия miR-301a подавляет уровни белка Nkrf и что подавление Nkrf с помощью miR-301a зависит от NKRF 3 0 UTR. Чтобы дополнительно продемонстрировать, что взаимодействие miR-301a и Nkrf является специфическим, мы провели репортерные анализы и кПЦР с тремя контролями: (1) miR-130a, которая имеет затравочную последовательность как miR-301a, но не имеет 10-п.н. компенсационный участок; (2) miR-223 имеет пару из 10 пар оснований (одна G: U), но не совпадает с исходной последовательностью с UTR; и (3) мутант miR-301a (зашифрованный miR-301a), в котором последовательность затравки была нарушена (дополнительная фигура S2A).miR-301a, но не эти контроли, усиленная экспрессия NF-kB-зависимого репортера (дополнительный рисунок S2C), подавление NKRF 3 0 UTR-зависимой репортерной активности (дополнительный рисунок S2D), подавление уровней мРНК Nkrf , и увеличил экспрессию двух мишеней трансактивации NF-kB (дополнительный рисунок S2E). ...

    Контекст 12

    ... дополнительно демонстрируя, что взаимодействие miR-301a и Nkrf является специфическим, мы провели репортерные анализы и кПЦР с тремя контролями: (1) miR-130a, которая имеет затравочную последовательность как miR-301a, но не имеет компенсаторного сайта из 10 пар оснований; (2) miR-223 имеет пару из 10 пар оснований (одна G: U), но не совпадает с исходной последовательностью с UTR; и (3) мутант miR-301a (зашифрованный miR-301a), в котором последовательность затравки была нарушена (дополнительная фигура S2A).miR-301a, но не эти контроли, усиленная экспрессия NF-kB-зависимого репортера (дополнительный рисунок S2C), подавление NKRF 3 0 UTR-зависимой репортерной активности (дополнительный рисунок S2D), подавление уровней мРНК Nkrf , и увеличил экспрессию двух мишеней трансактивации NF-kB (дополнительный рисунок S2E). ...

    Контекст 13

    ... дополнительно демонстрируя, что взаимодействие miR-301a и Nkrf является специфическим, мы провели репортерные анализы и кПЦР с тремя контролями: (1) miR-130a, которая имеет затравочную последовательность как miR-301a, но не имеет компенсаторного сайта из 10 пар оснований; (2) miR-223 имеет пару из 10 пар оснований (одна G: U), но не совпадает с исходной последовательностью с UTR; и (3) мутант miR-301a (зашифрованный miR-301a), в котором последовательность затравки была нарушена (дополнительная фигура S2A).miR-301a, но не эти контроли, усиленная экспрессия NF-kB-зависимого репортера (дополнительный рисунок S2C), подавление NKRF 3 0 UTR-зависимой репортерной активности (дополнительный рисунок S2D), подавление уровней мРНК Nkrf , и увеличил экспрессию двух мишеней трансактивации NF-kB (дополнительный рисунок S2E). ...

    Контекст 14

    ... дополнительно демонстрируя, что взаимодействие miR-301a и Nkrf является специфическим, мы провели репортерные анализы и кПЦР с тремя контролями: (1) miR-130a, которая имеет затравочную последовательность как miR-301a, но не имеет компенсаторного сайта из 10 пар оснований; (2) miR-223 имеет пару из 10 пар оснований (одна G: U), но не совпадает с исходной последовательностью с UTR; и (3) мутант miR-301a (зашифрованный miR-301a), в котором последовательность затравки была нарушена (дополнительная фигура S2A).miR-301a, но не эти контроли, усиленная экспрессия NF-kB-зависимого репортера (дополнительный рисунок S2C), подавление NKRF 3 0 UTR-зависимой репортерной активности (дополнительный рисунок S2D), подавление уровней мРНК Nkrf , и увеличил экспрессию двух мишеней трансактивации NF-kB (дополнительный рисунок S2E). ...

    Контекст 15

    ... затем протестировали недавно разработанную жесткую РНК-ловушку (TuD) для стабильного подавления функции miR-301a в клетках рака поджелудочной железы с использованием лентивирусного вектора.Эти РНК содержат две копии антисмысловой РНК против miR-301a, встроенные в два стержня длиной 18 и 8 п.н. соответственно (Рисунок 6A) (Haraguchi et al, 2009). Вектор содержал маркер GFP, так что сортировку клеток с помощью проточной цитометрии можно было использовать для выделения инфицированных клеток. ...

    Контекст 16

    ... мы определили, зависит ли подавление опухоли, опосредованное анти-miR-301a, от Nkrf. Сначала мы создали две конструкции (рис. 6F), в которых кодирующая последовательность Nkrf была размещена выше либо нативной 30 UTR (NKRF-UTRwt), либо мутантной конструкции, на которую miR-301a не может нацеливаться (NKRF-UTRmut; рис. 2C).Мы упаковали эти две конструкции в лентивирус и инфицированные клетки PANC-1, которые эндогенно экспрессируют высокие уровни miR-301a. ...

    Контекст 17

    ... сообщалось, что мутантный Nkrf, лишенный ДНК-связывающего домена, также ингибирует NF-kB-зависимую экспрессию гена (Nourbakhsh and Hauser, 1999).

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *